刘传
- 作品数：6 被引量：24H指数：3
- 供职机构：南开大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学农业科学轻工技术与工程化学工程更多>>
- Bc几丁质酶表达类型检测及chiB基因上游DR的功能分析
- 多种芽胞杆菌都可产生几丁质酶(chitinase，简称Chi)。但芽胞杆菌几丁质酶的表达方式及调控机制目前尚无定论。本研究首先对实验室保藏的26株蜡状芽胞杆菌(Bacillus cereus，简称Bc)在基础培养基和诱导...
- 刘传
- 关键词：几丁质酶生物防治菌种资源
- 文献传递
- 苏云金芽胞杆菌几丁质酶的基础表达及诱导合成的多态现象
- 多数微生物可以产生几丁质酶。而一般认为几丁质酶基因表达受几丁质的诱导和葡萄糖抑制。但是苏云金芽胞杆菌Bacillus thuringiensis(简称Bt)几丁质酶的诱导表达方式是否与其他微生物相同,至今尚无定论。本文采...
- 谢池楚蔡峻刘传陈月华
- 关键词：苏云金芽胞杆菌几丁质酶
- 文献传递
- Bacillus cereus 53菌株几丁质酶基因异源表达及调控元件研究
- 几丁质酶在医药、化工、环境和农业领域具有广阔的应用前景。Bacillus cereus53(简称Bc53)为本室保藏的一株蜡状芽胞杆菌。在有几丁质培养基中可以大量合成几丁质酶,诱导作用十分明显。发现该菌株的培养上清对小麦...
- 刘传肖亮蔡峻陈月华
- 关键词：异源表达DRS
- 文献传递
- 苏云金芽胞杆菌几丁质酶B特性及其杀虫抑真菌的作用被引量：17
- 2009年
- 【目的】本文对苏云金芽胞杆菌科默尔亚种15A3菌株(Bacillus thuringensis subsp.colmeri 15A3,简称Bt 15A3)几丁质酶B(chitinase B,简称ChiB)的特性及其杀虫抑真菌作用作了初步研究。【方法】将大肠杆菌(Escherichia coli)中表达的Bt 15A3菌株的ChiB,经过硫酸铵沉淀、透析、Sephadex G-200凝胶层析,最终得到初步纯化的几丁质酶。利用酶谱方法确定分子量,并且对2种分子量的酶蛋白进行了质谱鉴定。对各种金属离子对ChiB酶活的影响、最适反应温度及pH、温度及pH稳定性等理化特性进行研究,并且测定了ChiB抑制真菌孢子萌发的活性和对甜菜夜蛾和棉铃虫的杀虫增效作用。【结果】ChiB分子量约为70kDa。同时证明检测到的64kDa蛋白为70kDa蛋白C端的降解产物。ChiB最适作用温度为60℃,最适pH值为5,在温度20℃～60℃和pH4～8的范围内均有良好的稳定性。供试金属离子中Fe3+对ChiB的酶活有促进作用,Zn2+,Ag+有抑制作用。ChiB可抑制产黄青霉等真菌孢子的萌发,半抑制浓度(median effective inhibitory concentration,IC50)约为4μg/mL。该酶可以分别降低Bt晶体蛋白对甜菜夜蛾和棉铃虫的半致死浓度(median lethal concentration,LC50)26%和30%。【结论】Bt科默尔亚种的几丁质酶不但具有较稳定的理化性质,而且具有抑制真菌生长及明显的杀虫增效作用。
- 刘东陈月华蔡峻肖亮刘传
- 关键词：苏云金芽胞杆菌
- Bt几丁质酶的基础表达及诱导合成的多态现象被引量：4
- 2010年
- 多数微生物可以产生几丁质酶。一般认为几丁质酶基因表达受几丁质的诱导和葡萄糖抑制。但是苏云金芽胞杆菌Bacillus thuringiensis(简称Bt)几丁质酶的诱导表达方式是否与其他微生物相同,至今尚无定论。采用DNS法检测77株Bt在有或无诱导物培养基中的几丁质酶活力。研究了葡萄糖对4株不同表达类型菌株酶活力的影响,以及葡萄糖抑制与几丁质诱导之间的关系。研究发现在无几丁质诱导条件下,全部试验菌株都可以产生几丁质酶,保持一定量的基础表达,说明Bt能组成型合成几丁质酶,不需要诱导。添加诱导物之后,31株菌的酶活力没有任何变化,44株菌有不同程度的提高,但其中绝大部分诱导特性并不典型,酶活力提高不显著。许多Bt菌株几丁质酶表达兼具组成型和诱导型的特点。葡萄糖能够抑制几丁质的诱导作用,但是不能完全抑制Bt菌株几丁质酶的基础表达。比较组成型和诱导型菌株的几丁质酶基因chiA、chiB调节区域核苷酸序列,发现仅存在个别碱基的差异。
- 谢池楚陈月华蔡峻刘传陈艳玲
- 关键词：苏云金芽胞杆菌几丁质酶
- 地衣芽孢杆菌MY75菌株几丁质酶基因的异源表达及特性被引量：5
- 2010年
- 【目的】地衣芽孢杆菌MY75菌株的几丁质酶基因的异源表达,并对表达蛋白的特性进行研究。【方法】制备MY75菌株培养上清粗蛋白,利用酶谱分析确定具有几丁质酶活的蛋白分子量。将该蛋白进行飞行时间质谱分析,确定其部分氨基酸序列,设计PCR引物对MY75菌株的几丁质酶基因进行克隆及异源表达。对表达蛋白的最适反应温度及pH,温度耐受性及金属离子对酶活力的影响等特性进行了研究,并测定了表达蛋白对真菌孢子萌发的抑制活性和对甜菜夜蛾幼虫的杀虫增效作用。【结果】酶谱分析证明MY75菌株培养上清液中仅含有一种55kDa的几丁质酶。将该编码基因chiMY克隆及序列分析后发现,基因长度为1797bp,编码599个氨基酸。在大肠杆菌中异源表达的几丁质酶ChiMY蛋白的分子量为67kDa。质谱分析证明,55kDa蛋白与67kDa蛋白序列相同。ChiMY最适pH和最适温度分别为7.0和50°C,为中性几丁质酶。Li+,Na+,和Mg2+离子对表达蛋白的酶活力具有促进作用,Mn2+,Cr3+,Zn2+和Ag+离子则能显著抑制酶活力,Cu2+和Fe3+离子完全抑制酶活性。生物测定的结果显示,异源表达的MY75几丁质酶能够抑制小麦赤霉及黑曲霉的孢子萌发,并且对苏云金芽孢杆菌的杀虫活力具有增效作用。【结论】地衣芽孢杆菌MY75菌株中仅有一种55kDa几丁质酶,其编码基因能够在大肠杆菌中大量表达,表达蛋白分子量与野生型蛋白之间有显著差异,由此证明MY75菌株中存在着几丁质酶的剪切加工过程。明确了地衣芽孢杆菌几丁质酶ChiMY具有抑制真菌活性及杀虫增效作用。上述全部研究结论在国内首次报道。
- 肖亮刘传谢池楚蔡峻刘东陈月华
- 关键词：地衣芽孢杆菌几丁质酶质谱
