- 中华仓鼠卵巢细胞在检测百日咳菌免疫原中的应用被引量：3
- 1992年
- 采用中华仓鼠卵巢(CHO)细胞检测百日咳菌主要免疫原—百日咳毒素(LPF)和丝状血凝素(FHA),仅发现LPF使CHO细胞呈现明显的特异性簇聚反应,敏感性高,能检测出100pg/ml蛋白氮抗原量。与小鼠白细胞增多促进试验相比,CHO细胞法具有简便、经济、省时等优点,可作为一种检测百日咳毒素免疫原的实用辅助方法。
- 王祖森张蓉杨晓明何长民
- 关键词：卵巢细胞仓鼠
- rHB-DTaP联合疫苗中抗-HBs抗体应答被引量：3
- 1997年
- 在乙肝、白喉、破伤风、无细胞百日咳（ｒＨＢ－ＤＴａＰ）四联疫苗的研制过程中，我们采用基因工程乙肝疫苗（ＣＨＯ），精制白喉、破伤风类毒素和无细胞百日咳菌苗原液，按不同的稀释液，不同的加入顺序以及不同的含量等制备四联疫苗，并以单价基因工程乙肝疫苗（ｒＨＢ）做对照，进行小鼠试验，接种４周后采血检测抗－ＨＢｓ水平。结果表明，不同配方的四联疫苗中ｒＨＢ与ＤＴａＰ均无干扰，相容性好；抗－ＨＢｓ免疫应答水平与单价苗（ｒＨＢ）无显著性差异（Ｐ＞０．０５），使用生理盐水制备的ｒＨＢ－ＤＴａＰ其抗－ＨＢｓ免疫应答水平较醋酸盐缓冲液者高（Ｐ＜０．０５），ｒＨＢ－ＤＴａＰ中的抗－ＨＢｓ免疫应答水平与ｒＨＢ原液的加入顺序无关（Ｐ＞０．０５）；ｒＨＢ含量以２０μｇ／ｍｌ为宜。
- 任魁孙述学郑菊梅何长民
- 关键词：联合疫苗白喉
- 百日咳杆菌69KDa外膜蛋白的分离纯化及生物学特性研究被引量：1
- 1995年
- 本文发展了一种从百日咳杆菌Ⅰ相菌株中纯化６９ＫＤａ外膜蛋白的简易方法，将细菌体经加热浸提、乙醇沉淀蛋白、ＤＥＡＥ－ＳｅｐｈａｄｅｘＡ＿（５０）柱层析精制而成。用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ、免疫印迹、光密度仪扫描分析，证明纯化制剂为均一的、特异性的６９ＫＤａ外膜蛋白，其收率为５４．２％，纯度达９９．２％，每微克６９ＫＤａ蛋白制。剂中内毒素含量低于０．８５ＥＵ；ＰＴ残留量小于０．１０５ｎｇ。ｆＬ６９ＫＤａ蛋白抗血清能凝集含有３因子凝集原的百日咳菌株。用纯化的６９ＫＤａ蛋白免疫小鼠，能够保护小鼠抵抗致死剂量的１８３２３菌株的脑内攻击，与ＰＴ、ＦＨＡ组成的无细胞百日咳菌苗的效力，较含ＰＴ和ＦＨＡ的组分菌苗为高。表明６９ＫＤａ蛋白与ＰＴ、ＦＨＡ显示协同保护作用，有望成为无细胞百日咳菌苗的另一候选组分。
- 孙述学何长民
- 关键词：百日咳杆菌菌苗提纯
- DTP-rHB联合疫苗的研制
- 1999年
- 本文对制备ＤＴＰ—ｒＨＢ联合疫苗的实验条件进行了初步探索，并优选最佳配方制备的三批连续中试产品经安全、效力试验测定，结果表明，联合疫苗中各组分均能达到相应规程要求，抗原间无干扰作用，相容性好。联合疫苗中的ｒＨＢ免疫应答较单价苗明显提高（Ｐ＜ ０．０５），有增强作用。ＨＢｓＡｇ含量以２０ μｇ／ｍ ｌ为宜，稳定性试验证明，该联合疫苗质量稳定、安全、有效。
- 任魁孙述学李玉陈爱荣魏然宋继萍郑菊梅何长民
- 关键词：百日咳白喉破伤风乙型肝炎联合疫苗
- ELISA在检测百日咳杆菌免疫原中的应用被引量：4
- 1992年
- 本文采用ELISA技术,实验研究了LPF-ELISA和FHA-ELISA的最适条件以及LPF和FHA免疫原在纯化过程中的动态。实验结果表明,LPF-ELISA的HP最佳包被浓度为0.413μg/100μl;所用第二抗体(抗LPF兔血清)的最佳浓度为2.8EU/100μl。FHA-ELISA的抗FHA豚鼠血清的最佳包被浓度为0.05EU/100μl,所用第二抗体(抗FHA兔血清)的最佳浓度为2.25EU/100μl。LPF和FHA在经培养、盐析、浸提、超速和分级离心后,其ELISA单位与蛋白量密切相关,呈同步消长。证明用LPF-ELISA和FHA-ELISA作新菌苗批量生产工序中的质量控制,是一种行之有效的方法。
- 陈平纡杨晓明陈爱荣何长民
- 关键词：ELISA百日咳杆菌
- 百日咳杆菌LPF和FHA的纯化及其特性的研究
- 1993年
- 采用羟基磷灰石、HP—Sepharose 4B和Sephadex G—200色层分析方法,精制出了单一的白细胞增多促进因子(LPF)和丝状血凝素(FHA)组分.经SDS—PAGE证明,精制LPF呈现四条带,其分子量分别为30,000、27,000、23,000和14,000;精制FHA呈现三条带,其分子量分别为185,000、130,000、105,000.ELISA检测证明,精制LPF为620EU/mL,精制FHA为402EU/mL;小鼠LP和HS活性测定结果证明,0.136μg的精制LPF可引起白细胞的明显增高,0.015μg可引起HS活性,0.29μg可引起组胺致敏小鼠50%的死亡;CHO细胞簇聚活性检测结果显示,3.3pg的精制LPF可引起CHO细胞明显的簇聚反应;免疫双扩散试验结果显示,精制LPF和FHA分别与其相应的抗LPF和抗FHA血清形成特异性的沉淀线;电镜结果显示,精制LPF呈直径约6nm的球形颗粒;精制FHA呈2×40—100nm的丝状结构.
- 潘兹书何长民
- 关键词：白细胞增多百日咳杆菌纯化
- 肽核酸寡聚体研究进展
- 1998年
- 肽核酸寡聚体是一类９０年代发现的新型ＤＮＡ同类物，在生物化学和分子生物学领域已得到广泛应用。本文对ＰＮＡ寡聚体的结构、特性、合成。
- 王剑虹何长民
- 百日咳杆菌粘着素的分子克隆、表达、纯化及生物学特性研究被引量：2
- 1997年
- 大肠杆菌中克隆了编码百日咳杆菌粘着素（Ｐｅｒｔａｃｔｉｎ，Ｐｒｎ）１．９ｋｂ的结构基因，获得了４株表达Ｐｒｎ的重组菌株，以融合蛋白的形式，对Ｐｒｎ进行了表达。Ｐｒｎ融合蛋白的表达量占细胞总蛋白量的４６．４％。融合蛋白纯度达８９．２％。免疫印迹证明，抗天然Ｐｒｎ的单克隆抗体ＢＰＥ３能识别重组菌中及纯化的Ｐｒｎ融合蛋白。Ｐｒｎ融合蛋白能与抗百日咳杆菌Ⅰ相血清发生特异凝集反应。Ｐｒｎ融合蛋白及重组菌免疫小鼠后，对百日咳杆菌毒力株１８３２３的脑内攻击，保护率达６０～６２．５％。
- 杨晓明何长民
- 关键词：百日咳杆菌分子克隆生物学特性
- 百日咳、白喉、破伤风、乙型肝炎联合疫苗的实验研究被引量：2
- 1997年
- 对制备无细胞百日咳菌苗、白喉、破伤风、乙型肝炎联合疫苗的实验室条件进行了初步探索，实验结果表明，联合疫苗的配方以每毫升无细胞百日咳组分１５－１８μｇ．ＰＮ、白喉类毒素３０ｌｆ、破伤风类毒素７－１０ｌｆ和基因工程乙肝表面抗原２０μｇ为宜，稀释缓冲液选用０．８５％ＮａＣｌ溶液吸附效果较好，动物实验证明联合疫苗中各组分均安全有效。
- 孙述学乔瑞洁陈爱荣刘志源杨晓明何长民任魁李玉张昀孟秀园郑菊梅
- 关键词：百日咳白喉破伤风乙型肝炎联合疫苗
- 吸附精制百日咳菌苗稳定性的研究
- 1994年
- 本文对新一代吸附精制百日咳菌苗保存于不同温度条件下的安全和效力稳定性进行了实验，结果表明，９批吸附精制百日咳菌苗经贮存于４～８℃条件下半年、１年、２年和３年后，贮存于常温（１８～２２℃）半年后和贮放于３７℃４０天后，其贮存前后的ＢＷＤＵ／ｍｌ、ＬＰＵ／ｍｌ和ＨＳＵ／ｍｌ间的数值变化，均在制检规程要求的标准数值内，无显著性差异（Ｐ＞０．０５），说明菌苗的毒性无逆转、菌苗的安全性良好。３批吸附精制百日咳菌苗经贮存于４～８℃条件下７个月和２年后、其贮存前后的效力单位间的数值变化，均在制检规程要求的标准数值内，无显著性差异（Ｐ＞０．０５），说明菌苗的效力无下降，菌苗的质量稳定。
- 陈爱荣杨晓明王祖森何长民
- 关键词：百日咳菌苗稳定性效力试验
