陈碧玲 作品数:18 被引量:36 H指数:5 供职机构: 广东出入境检验检疫局 更多>> 发文基金: 广东出入境检验检疫局科技计划项目 广东省科技计划工业攻关项目 更多>> 相关领域: 医药卫生 轻工技术与工程 化学工程 生物学 更多>>
细菌“活的非可培养”状态的研究进展 2013年 活的非可培养(Viable but nonculturable,VBNC)状态是细菌在不良条件下的一种特殊生存方式。处于这种状态的细菌仍具有致病性,能够通过动物肠道复苏而致病,但采用常规培养方法不能被检测出来,造成VBNC状态菌的漏检,对公共卫生和人类生命健康构成巨大的威胁。因此,对VBNC状态菌的研究、检测有着重要的意义。该研究介绍了细菌进入VBNC状态的诱导因素、生物学特性、检测方法的最新进展。 凌莉 易敏英 胡科锋 陈碧玲 刘静宇关键词:细菌 基于TaqMan探针双重荧光PCR检测食品中肠道沙门氏菌和肠炎沙门氏菌 被引量:9 2017年 建立基于TaqMan探针双重重实时荧光PCR检测肠道沙门氏菌(Salmonella enterica,SP)和肠炎沙门氏菌(Salmonella Enteritidis,SE)的方法。根据SP的aceA基因(Gen Bank:U43344.1)、肠炎沙门氏菌特异序列SEP(GenBank:AF370707.1),分别设计引物和探针,在ace A探针的5′端标记FAM和SEP探针的5′端标记VIC,建立基于TaqMan探针双重荧光PCR检测方法。试验结果,58株29种不同血清型肠道沙门氏菌均扩增出ace A基因扩增曲线,SEP特异性地扩增出15株SE,而28种不同血清型沙门氏菌和17株变形杆菌等阴性对照株扩增结果均为阴性。ace A和SEP的双重荧光PCR扩增效率分别为100%和104%,R2分别为0.999和0.998,最低检测浓度分别达到280 cfu/m L和260 cfu/m L。建立的方法特异性好、灵敏度高,整个试验可在31 h完成,是快速检测SP和SE的有效方法,可用于食品中SP和SE的特异性检测。 袁慕云 许龙岩 刘二龙 曹际娟 陈碧玲关键词:肠炎沙门氏菌 TAQMAN探针 食品 副溶血性弧菌MPCR-DHPLC检测方法的建立 被引量:1 2013年 目的:建立多重PCR(Multiplex PCR,MPCR)结合变性高效液相色谱(Denaturing High-Performance Liquid Chromatography,DHPLC)检测副溶血性弧菌的方法,并了解该菌携带毒力基因的情况。方法:根据副溶血性弧菌的毒力基因tdh、trh和种特异性基因toxR进行引物设计,以其单一PCR扩增产物在DHPLC出现的色谱峰作为标准色谱峰,建立MPCR-DHPLC的检测方法。结果:该方法能有效扩增副溶血性弧菌的tdh、trh和toxR基因,25株副溶血性弧菌的MPCR扩增产物经DHPLC分析所得的色谱峰在位置和峰型与标准色谱峰有很好的符合性,其他菌属的菌株均无特异性扩增,对模拟污染样品可正确检测,灵敏度达到1*103CFU/ml,特异性达到100%。结论:本文建立的MPCR-DHPLC方法可准确检测副溶血性弧菌,并了解该菌携带毒力基因的情况。 凌莉 许龙岩 袁慕云 胡科锋 陈碧玲 焦红关键词:副溶血性弧菌 DHPLC PCR-焦磷酸法检测单增李斯特菌的检测引物、试剂盒和检测方法 本发明公开了一种PCR-焦磷酸法检测单增李斯特菌的检测引物、试剂盒和检测方法。本发明根据单增李斯特菌hly基因设计扩增引物和测序引物,建立了PCR-焦磷酸测序,从DNA碱基序列水平上检测单增李斯特菌的方法。本发明先对目标... 许龙岩 袁慕云 凌莉 阳静 唐勤 陈碧玲 易敏英耐甲氧西林金黄色葡萄球菌三重实时荧光PCR检测引物、探针、检测试剂盒和检测方法 本发明公开了一种耐甲氧西林金黄色葡萄球菌三重实时荧光PCR检测引物、探针、检测试剂盒和检测方法。本发明根据nuc、mecA和femA基因序列分别设计引物和探针,利用该检测引物和检测探针按照本发明的方法对样品进行三重实时荧... 袁慕云 许龙岩 张旺 王志强 阳静 陈碧玲文献传递 2010年广州进出口化妆品的微生物污染情况分析 被引量:6 2012年 目的:为了了解2010年广州进出口的化妆品微生物污染情况。方法:按照卫生部《化妆品卫生规范》(2007版)微生物学部分要求,对化妆品的菌落总数、霉菌和酵母计数、绿脓杆菌、金黄色葡萄球菌和粪大肠菌群5个项目进行检测分析。结果:2010年广州共检测6601份进出口化妆品,检出18份不合格样品,合格率为99.73%。在不合格样品中,18份样品全部菌落总数超标,其中1份样品同时检出霉菌超标,2份同时检出绿脓杆菌。香水类和口腔卫生用品类的卫生情况最好,合格率达到100%。结论:总体来说,2010年广州进出口的化妆品产品卫生状况良好。 凌莉 刘静宇 陈碧玲 胡科锋关键词:化妆品 微生物污染 基于TaqMan探针双重荧光PCR检测食品中鼠伤寒沙门菌和肠炎沙门菌 被引量:9 2013年 目的建立基于TaqMan探针双重荧光PCR检测鼠伤寒沙门菌和(Salmonella typhimurium,ST)和肠炎沙门菌(Salmonella enteritidis,SE)的方法。方法根据ST的STM4599序列(GenBank:AERV01000023.1)和SE特异序列(GenBank:AF370707.1),分别设计引物和探针,ST探针的5'端标记FAM、SE探针的5'端标记VIC,建立基于TaqMan探针双重荧光PCR检测方法。结果 ST和SE的引物和探针分别特异性地扩增出16株ST和15株SE,而28种不同血清型沙门菌和17株变形杆菌等扩增结果均为阴性。ST和SE的双重荧光PCR扩增效率均为94.2%,R2分别为0.998和0.995,最低检测浓度分别达到300 CFU/ml、260 CFU/ml。结论建立的方法特异性好、灵敏度高,整个试验可在31h完成,是快速检测ST和SE的有效方法,可用于食品中ST和SE的特异性检测。 袁慕云 许龙岩 曹际娟 阳静 张旺 陈碧玲 相大鹏关键词:鼠伤寒沙门菌 肠炎沙门菌 TAQMAN探针 食品 食品中常见病原微生物监测与溯源技术研究 许龙岩 袁慕云 黄华军 范媛媛 邹志飞 相大鹏 刘静宇 王志强 张旺 林文丽 陈碧玲 该项目对进出口食品中分离的沙门氏菌、单增李斯特氏菌、副溶血性弧菌进行rep-PCR分型,揭示了表型特征相同的不同国家和地区病原菌分子型别以及它们之间的相关性,并汇总相关信息初步建立了进出口食品中沙门氏菌、单增李斯特氏菌、...关键词: 一种检测活的不可培养状态大肠杆菌O157的荧光PCR引物组及其检测方法 本发明提供了一种检测活的不可培养状态大肠杆菌O157荧光PCR引物组,该引物组检测的基因区域包括Stx1、Stx2、Flic、Rfb、Eae基因。序列分别如SEQ ID NO:1-10。本发明还提供了一种检测活的不可培养... 刘静宇 凌莉 席静 邓翼惠 易敏英 胡科峰 陈碧玲文献传递 活的非可培养状态副溶血性弧菌实时荧光逆转录PCR检测方法的建立及其毒力研究 被引量:8 2013年 目的建立检测活的非可培养(VBNC)状态副溶血性弧菌的荧光逆转录PCR方法并研究其毒力基因表达。方法将副溶血性弧菌AS079菌株添加到陈化海水中,4℃冰箱内培养,使其进入VBNC状态,针对其管家基因、鉴定基因和毒力基因分别设计实时荧光逆转录PCR引物,通过不同的PCR反应程序和引物浓度组合试验,摸索最佳反应体系条件,用于VBNC状态副溶血性弧菌的检测和毒力研究。结果用所建立的检测VBNC状态副溶血性弧菌的实时荧光逆转录PCR方法,对接种于陈化海水培养的不同时期的AS079副溶血性弧菌进行荧光定量逆转录PCR扩增,结果显示,随着培养时间的延长,毒力基因tdh2和鉴定基因toxR表达水平持续下降,但即使细菌进入VBNC状态,这两个基因也能够得到很好的扩增,说明以toxR基因和tdh2基因对进入VBNC状态的副溶血性弧菌进行检测和毒力研究方法可行。灵敏度试验表明,鉴定基因toxR的最低检测限可达到48 cfu/ml,研究毒力基因tdh2的表达需要细菌浓度至少为4.8×102cfu/ml,同时试验证明此方法与其他相近食源性致病菌无交叉反应。结论该实时荧光逆转录PCR方法检测快速、特异性强、敏感度高,适用于VBNC状态副溶血性弧菌的检测和毒力分析。 刘静宇 凌莉 邓翼惠 易敏英 胡科锋 陈碧玲关键词:副溶血性弧菌 毒力基因 食源性致病菌