陈晴晴
- 作品数：11 被引量：21H指数：3
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- 灰飞虱蛋白与RBSDV P10的互作分析
- 黑条矮缩病毒(rice black-streaked dwarf virus,RBSDV)为呼肠孤病毒科(Reoviri-dae)斐济病毒属(Fijivirus)的成员,可侵染水稻、玉米等禾本科植物,引起水稻黑条矮缩病、...
- 徐秋芳周益军陈晴晴倪海平李硕
- 关键词：灰飞虱酵母双杂交多克隆抗体
- 水稻黑条矮缩病毒(RBSDV)侵染对寄主植物核糖核酸酶基因mRNA表达量的影响被引量：3
- 2013年
- 植物核糖核酸酶能抵抗病原菌侵染。为分析核糖核酸酶在水稻黑条矮缩病毒(RBSDV)侵染过程中的作用,通过灰飞虱人工接种病毒的方法,在寄主植物水稻、小麦和玉米上接种RBSDV,经RT-PCR鉴定病毒成功侵染后,分别以水稻的OsUBQ5、小麦的TaeEF1-α和玉米的ZmaActin作为内参基因,实时荧光定量PCR分析RBSDV侵染后水稻的OsRNS4、小麦的TaeRNS4和玉米的ZmaRNS1基因mRNA表达量的变化。结果显示,感染RBSDV后,寄主植物OsRNS4、TaeRNS4和ZmaRNS1基因的表达量分别是未接种对照植株的3.08倍、1.87倍和3.49倍,表明寄主植物核糖核酸酶基因在RBSDV侵染后被诱导,核糖核酸酶可能在植物抗病毒过程中起作用。
- 张晓霞徐秋芳陈晴晴任春梅邵颖周益军
- 关键词：核糖核酸酶实时荧光定量PCR
- 马铃薯抗晚疫病试管苗评价体系初探被引量：2
- 2012年
- 目前研究者大都采用愈伤组织诱导法或水培法进行马铃薯抗性的早期评价,受自然因素影响较大。本试验以无菌试管苗和马铃薯晚疫病菌分泌物为实验材料,建立试管苗室内评价技术体系并通过分泌物接种试验探测其可行性,以便用于早期抗性资源的评价,缩短育种周期。本试验在无菌条件下进行,将健康试管苗植于含有马铃薯晚疫病菌株XH05-5-4分泌物的MS培养基中培养,培养1个月后,调查其生长情况。结果表明:马铃薯试管苗在接种分泌物培养1个月后,处理组试管苗明显矮于空白对照组试管苗。处理组试管苗叶片有褐变现象,同时根的分化受阻。不同品种(系)做同样处理后株高比空白对照组的株高减少的程度不同,可得知不同品种(系)的马铃薯试管苗的抗性不同。因此,用分泌物接种试管苗来进行抗性评价是可行的,有利于进行对抗性资源的早期评价,减少抗病育种的工作量,缩短育种周期。
- 刘霞陈晴晴郑煜杨艳丽
- 关键词：分泌物马铃薯晚疫病抗性评价
- 灰飞虱actin基因的克隆及原核表达
- 2014年
- 通过生物信息学分析获得了灰飞虱actin基因的序列信息,采用RT-PCR方法从灰飞虱中克隆了actin基因的开放阅读框,并将其在大肠杆菌BL21(DE3)中进行原核表达。序列分析结果表明,该基因开放阅读框长1 131 bp,编码377个氨基酸,蛋白质理论分子量为4.17×104,理论等电点为5.28。将此序列登录GenBank数据库,登录号为KC683802。序列比对发现,该基因序列在多个物种间保守,与褐飞虱actin基因的同源性高达95%。构建的原核表达载体pET32a-actin,在大肠杆菌BL21(DE3)中进行获得表达,SDS-PAGE分析结果表明,表达的蛋白质主要存在于包涵体中。
- 陈晴晴李艳舞倪海平徐秋芳张金凤李硕周益军
- 关键词：灰飞虱肌动蛋白基因克隆原核表达
- 酵母双杂交筛选灰飞虱体内水稻黑条矮缩病毒p10的互作蛋白被引量：5
- 2013年
- 为获取灰飞虱体内传播RBSDV相关介体因子,以RBSDV编码的外层外壳蛋白p10为诱饵,采用酵母双杂交方法从灰飞虱cDNA文库中筛选与RBSDV p10互作的蛋白。将RBSDVp10基因构建至pGBKT7载体获得诱饵表达载体pGBKT7-p10。自激活实验结果表明,p10蛋白对酵母细胞无毒性,也不具有自激活活性。通过pGADT7-cDNA文库质粒转化含有pGBKT7-p10的酵母AH109筛选获得灰飞虱cDNA文库中与p10互作的蛋白。文库筛选共获得326个阳性克隆。测序结果表明这些阳性克隆编码14种不同的互作蛋白,包括Actin 1,GAPDH,RACK等。这些互作蛋白参与胞吞胞吐作用和膜融合等过程,可能与病毒在介体内的循回和增殖相关。
- 徐秋芳陈晴晴张金凤李硕倪海平周益军
- 关键词：水稻黑条矮缩病毒外壳蛋白酵母双杂交
- 一种用RBSDV粗提液进行病毒覆盖蛋白结合实验的方法
- 本发明公开了一种用RBSDV粗提液进行病毒覆盖蛋白结合实验的方法。本发明的实质是通过研磨RBSDV病样释放出病毒粒子，离心获得病毒的粗提液，以RBSDV的粗提液而不是提纯的病毒粒子进行病毒覆盖蛋白结合实验。本发明这个方法...
- 徐秋芳陈晴晴周益军倪海平
- 文献传递
- RBSDV侵染对水稻ABA代谢相关基因表达的影响被引量：3
- 2015年
- 为明确水稻黑条矮缩病毒(Rice black streaked dwarf virus,RBSDV)侵染对水稻脱落酸(abscisic acid,ABA)含量的影响,通过灰飞虱在水稻日本晴和淮稻5号两个品种上人工接种RBSDV,待接种的水稻表现明显矮缩症状时,采用ELISA方法测定ABA含量。结果显示,在接种RBSDV的日本晴和淮稻5号中,ABA含量均明显增加。接种病毒的日本晴植株中ABA含量为111.04ng/g,而对照中仅为60.86ng/g;淮稻5号对照植物ABA含量为70.61ng/g,而病株中ABA的含量为102.60ng/g。为进一步明确病毒侵染如何调控ABA的含量,采用荧光定量PCR方法分析了日本晴接种RBSDV 8d,12d,16d和60d时ABA合成关键基因(OsZEP、OsNCED1、OsNCED2、OsNCED3、OsNCED4和OsNCED5)及分解关键基因(OsABA8ox1、OsABA8ox2和OsABA8ox3)mRNA相对表达量的变化。结果显示,病毒侵染8d,ABA合成和分解代谢基因的表达量均高于对照,其中OsNCED4和OsNCED5的表达量随病毒侵染时间的延长而增加,至60d时OsNCED3、OsNCED4和OsNCED5的表达量为对照的3.97、7.66和2.99倍,而OsZEP,OsABA8ox1和OsABA8ox2的表达量则随侵染时间的延长而降低。RBSDV侵染后可能既影响了ABA合成也影响了其分解,两者共同作用导致了ABA含量增加。
- 倪海平徐秋芳兰莹陈晴晴张金凤周益军
- 关键词：水稻黑条矮缩病水稻脱落酸基因表达
- 灰飞虱中与RBSDV P10互作的介体因子分析
- 黑条矮缩病毒（Rice black-streaked dwarf virus, RBSDV）为呼肠孤病毒科（Reoviridae）斐济病毒属（Fijivirus）的成员,可侵染水稻、玉米、小麦等禾本科植物,引起水稻黑条矮...
- 陈晴晴
- 关键词：灰飞虱酵母双杂交多克隆抗体
- 文献传递
- 灰飞虱原肌球蛋白的基因克隆、原核表达及多克隆抗体制备被引量：8
- 2014年
- 【目的】通过筛选灰飞虱cDNA酵母表达文库发现原肌球蛋白(tropomyosin,Tm)能与水稻黑条矮缩病毒(Rice black-streaked dwarf virus,RBSDV)P10蛋白发生互作。研究旨在克隆灰飞虱原肌球蛋白基因(Tm),将其在原核细胞中进行表达,纯化Tm蛋白,免疫大白兔并制备其多克隆抗体,为进一步分析Tm在灰飞虱与RBSDV互作过程中的作用提供抗体条件。【方法】根据与之高度同源的Tm基因信息确定灰飞虱Tm的开放阅读框(open reading frame,ORF)。提取灰飞虱总RNA,采用RT-PCR方法从灰飞虱中克隆Tm的ORF,连接至pMD-18T载体后进行测序分析,利用DNAstar软件分析该基因序列及其编码的蛋白特性。将测序验证正确的Tm通过EcoR V和BamH I限制性内切酶酶切连接至原核表达载体pET-32a(+)。重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),经终浓度为0.4mmol·L-1的IPTG诱导表达4 h后检测Tm融合蛋白的表达情况。离心收集诱导表达的大肠杆菌菌液,进行超声波破碎处理,收集上清及沉淀,采用SDS-PAGE分析融合蛋白的表达。利用Ni-NTA Agarose纯化上清中的可溶性融合蛋白,经100 mmol·L-1咪唑洗脱和0.01 mol·L-1 PBST溶液透析后获取纯化的Tm融合蛋白,免疫大白兔,制备多克隆抗血清,并采用间接ELISA法检测抗血清效价。纯化的Tm融合蛋白及灰飞虱总蛋白经SDS-PAGE分离后,用制备的Tm多克隆抗体进行Western blotting检测,分析抗体的特异性。【结果】序列分析显示,灰飞虱Tm的ORF大小为852 bp。采用RT-PCR克隆获得此ORF并进行测序分析,结果表明扩增所得灰飞虱Tm的ORF长为852 bp,编码283个氨基酸,理论分子量大小为32.6 kD。序列比对结果发现所编码蛋白在不同物种间保守。将Tm ORF克隆入pET-32a(+)表达载体后在大肠杆菌BL21(DE3)中进行诱导表达,表达产物经SDS-PAGE分析显示,融合蛋白大小约为55 kD,主要以可溶性蛋白形式表达,在包涵体中也有少量表达。纯化上清中的可溶性Tm融合�
- 徐秋芳陈晴晴倪海平李硕张金凤周益军
- 关键词：灰飞虱原肌球蛋白克隆原核表达多克隆抗体
- 灰飞虱蛋白与RBSDV P10的互作分析
- 黑条矮缩病毒(rice black-streaked dwarf virus,RBSDV)为呼肠孤病毒科(Reoviridae)斐济病毒属(Fijivirus)的成员,可侵染水稻、玉米等禾本科植物,引起水稻黑条矮缩病、玉...
- 徐秋芳周益军陈晴晴倪海平李硕
- 关键词：灰飞虱酵母双杂交多克隆抗体
