路珂
- 作品数：1 被引量：4H指数：1
- 供职机构：浙江大学药学院更多>>
- 发文基金：浙江省中医药管理局重点科研项目浙江省科技攻关计划国家杰出青年科学基金更多>>
- 相关领域：生物学更多>>
- 利用细菌／杆状病毒系统在昆虫细胞中表达人CYP2E1被引量：4
- 2008年
- 目的:获得人CYP2E1重组酶,并用该重组酶的特征性探针底物对其进行代谢活性研究。方法:以人肝组织RNA为模板,通过RT-PCR得到CYP2E1 cDNA片断,然后与pFastBac质粒连接,得到pFastBac-CYP2E1重组质粒,将其转化E.coli DH 10Bac大肠杆菌,通过转座作用,获得重组Bacmid-CYP2E1,将其转染草地夜蛾细胞(Sf9)后,产生重组杆状病毒。将该病毒以及分别含有人CYPOR和人CYPb5的病毒共同感染Sf9细胞,收集共表达蛋白,以氯唑沙宗为底物鉴定重组酶的活性。结果:利用细菌/杆状病毒系统得到重组人CYP2E1的表达,其对氯唑沙宗的Km值为(72.4±8.7)μmol.L-1,Vmax值为(2.41±0.10)μmol.min-1.g-1蛋白。结论:利用杆状病毒系统成功表达了有催化活性的人CYP2E1重组酶,其活性与文献报道值相似。
- 路珂曾苏姚彤炜
- 关键词：细胞色素P450酶系统杆状病毒氯唑沙宗
