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SmacsiRNA慢病毒载体的构建及其对Smac基因沉默效果的鉴定被引量：1: 2016年; 背景研究证实半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶激活剂（Smac）蛋白是肿瘤细胞的促凋亡蛋白，我们先前的研究表明，Smac蛋白在白内障患者LECs中表达量明显高于正常人，因此推测沉默LECs中Smac的表达可抑制LECs的过度凋亡，但如何成功将SmacsiRNA转染进入LECs是研究的关键。目的构建人SmacsiRNA慢病毒载体并对人LECs进行感染，研究慢病毒载体构建方法及其在人晶状体上皮细胞HLE—B3中的干扰效率，利用RNA干扰（RNAi）技术建立Smac低表达的HLE—B3株。方法根据我们前期的工作设计并合成针对Smac基因序列的siRNA序列，将合成的双链DNA以T4噬菌体DNA连接酶与GV118慢病毒载体相连接，转化DH5α感受态细胞，采用PCR筛选阳性克隆，经测序鉴定正确后，感染293T细胞，收集上清液并标定病毒滴度。用重组慢病毒感染HLE—B3细胞，荧光显微镜下观察转染后的阳性HLE—B3细胞数并计算病毒感染复数（MOI）。将常规培养的HLE—B3细胞分为阴性对照组、空质粒组和GV118-Smac—siRNA1组，阴性对照组为常规培养的细胞，空质粒组细胞仅转染不含慢病毒载体的siRNA质粒，GV118-Smac·siRNA1组细胞转染GV118-Smac—siRNA1质粒，采用实时荧光定量PCR检测各组细胞中SmacmRNA的相对表达量。结果构建的重组载体GV118-Smac—siRNAl转化DH5c感受态细胞后阳性克隆产物大小为340bp，空载的克隆产物为299bp，与预期结果相符，测序结果显示合成的Smac—siRNA1与预期目的序列一致。构建的GV118-Smac—siRNA1病毒滴度为3．0x10。TU／m1。感染HLE．B3细胞后荧光显微镜下可见MOI为100时，细胞毒性低且感染效率高，约为82％。阴性对照组、空载质粒组和GV118-Smac—siRNA1质粒组细胞中SmacmRNA相对表达量分别为（101．290±8．349）％、（92．330±6．320）％和（32．540±4．221）％，3个组间总体比较差异有统计学意义（F=32．871，P〈0．01�; 李云郑广瑛蒋瑜; 关键词：小干扰RNA 基因载体基因转染技术晶状体上皮细胞

零球差非球面人工晶状体应用于外伤性白内障术后视觉质量的临床观察被引量：3: 2013年; 目的观察外伤性白内障患者植入零球差非球面人工晶状体（IOL）术后的视觉质量。方法前瞻性临床研究。2009年6月至2012年6月依据入选标准连续选取郑州大学第一附属医院眼科收治的角膜穿孔伤所致的外伤性白内障患者96例（96只眼）。根据所选择的植入晶状体类型不同分为试验组48例（48只眼）：白内障术中植人零球差非球面IOL；对照组48例（48只眼）：白内障术中植入传统球面IOL。术后1、3、6个月对比观察两组患者的裸眼视力、最佳矫正视力、立体视觉、对比敏感度，并对患者生存质量满意度进行问卷调查。两组患者术前一般情况、术后视力、对比敏感度及立体视觉的比较均采用t检验，散光度和生活满意度采用秩和检验进行组间比较。结果术后1、3、6个月试验组裸眼视力（0．56±0．22，0．68±0．13，0．84±0．15）与对照组（0．51±0．17，0．61±0．20，0．81±0．17）相比，差异无统计学意义（t=1．371，1．283，0．711，P〉0．05）；试验组最佳矫正视力（0．62±0．13．0．74±0．21，0．87±0．10）与对照组（0．57±0．25，0．69±0．22，0．84±0．15）相比，差异无统计学意义（t=0．865，1．380，1．386，P〉0．05）；术后6个月试验组与对照组远近立体视觉相比差异均无统计学意义，分别为：远立体视：123．5±7．8，126．9-4-5．9（t=0．638，P〉0．05）；近立体视：90．5±7．8，95．2±3．5（t=1．364，P〉0．05）；术后6个月试验组各空间频率对比敏感度（3e／d：1．524-0．18，6c／d：1．68±0．19，12e／d：1．29±0．14，18c／d：1．04±0．20）均高于对照组（3e／d：1．49±0．27，6c／d：1．57±0．21．12c／d：1．14±0．20，18c／d：0．85±0．14），特别是眩光对比敏感度（试验组：3c／d：1．40±0．15，6c／d：1．52±0．22，12c／d：1．21±0．18，18e／d：0．91±0．14；对照组：3c／d：1; 郑广瑛徐东郭红亮王瑞娜郝莉莉蒋瑜; 关键词：眼损伤白内障视敏度

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蒋瑜

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