程钢
- 作品数：14 被引量：49H指数：5
- 供职机构：苏州大学更多>>
- 发文基金：江苏省自然科学基金江苏省高校高新技术产业发展项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 圣愈汤对正常小鼠免疫功能的影响被引量：2
- 2009年
- 目的:观察和分析圣愈汤对正常小鼠免疫功能的影响。方法:选用昆明种正常小鼠,随机分成3组,运用不同剂量的圣愈汤经灌胃给药,每天1次。用药第20及30天,称小鼠体重,摘眼球取血,肝素抗凝,采用免疫荧光及流式细胞术分析外周血T细胞亚群的改变,ELISA法检测血浆中IL-2及IL-4的含量。结果:高剂量圣愈汤能明显提高正常小鼠CD3+T细胞、CD4+T细胞的百分率及CD4+/CD8+比值(与对照组比较,P<0.05);运用圣愈汤后,正常小鼠血液中IL-2的含量升高(与对照组比较,P<0.05),但IL-4的水平无明显变化。结论:圣愈汤通过对T淋巴细胞亚群百分率和比值及IL-2含量的影响,对正常小鼠具有良好的免疫调节和促进免疫应答的功效。
- 周立峰邱玉华程钢孙中文孙玮丽
- 关键词：圣愈汤正常小鼠免疫功能
- 抗人CD28鼠-人嵌合抗体的构建及瞬时表达被引量：2
- 2007年
- 目的构建及瞬时表达抗人CD28鼠-人嵌合抗体。方法采用基因工程技术,从分泌鼠抗人CD28单克隆抗体的杂交瘤细胞株(克隆号:2F5)中克隆出抗体重链和轻链可变区基因及相应信号肽编码序列。分别与人免疫球蛋白IgG1恒定区重、轻链基因拼接,构建含有重组基因的pIRES表达质粒pIRES/h2F5。转染293T细胞并用抗性药物G418选择培养。采用流式细胞术,检测瞬时转染细胞后嵌合抗体的表达情况。结果抗人CD28鼠人嵌合抗体得到表达并能与CD28分子特异性结合。结论抗人CD28鼠-人嵌合抗体的构建和瞬时表达是成功的,为后续构建稳定分泌抗人CD28鼠-人嵌合抗体的CHO基因转染细胞株奠定了基础。
- 程钢陈永井马震宇费敏孙中文徐耀瑜胡玲玲邱玉华
- 关键词：CD28单克隆抗体嵌合抗体
- CD80鼠-人嵌合抗体的CHO细胞表达及体外生物学功能的初步研究被引量：12
- 2009年
- 目的:CHO细胞表达抗人CD80鼠-人嵌合抗体ch4E5,并研究其在体外阻断CD80介导的共刺激信号转导的生物学功能。方法:构建含有嵌合重、轻链基因的表达载体pIRES/ch4E5;表达载体先转染293T细胞,FCM检测到ch4E5抗体的瞬时表达后,表达载体再转染CHO细胞,构建稳定表达细胞株CHO-ch4E5;ProteinG亲和层析法从CHO-ch4E5细胞无血清培养上清中纯化ch4E5抗体,FCM检测ch4E5抗体对膜型CD80的识别;以丝裂霉素处理的正常人外周血单核细胞PBMCs为刺激细胞,以异体正常人外周血淋巴细胞PBLs为反应细胞,用MTT法分析ch4E5抗体的阻断作用。结果:ch4E5抗体在293T细胞的瞬时表达于48小时达到高峰,上清与L929-B7-1细胞结合率为96.0%;CHO-ch4E5细胞持续表达ch4E5抗体,其培养上清与L929-B7-1细胞结合率为95.7%;3天培养上清中,ch4E5抗体的产率约为5.56mg/L;ch4E5抗体和L929-B7-1、Daudi、Sub-T细胞结合率分别为94.1%、25.7%、23.5%;ch4E5抗体可以阻断CD80介导的共刺激信号转导,抑制异体PBLs的体外增殖。结论:在CHO细胞中成功表达了抗人CD80鼠-人嵌合抗体ch4E5,在体外该嵌合抗体具有亲本抗体阻断CD80介导的共刺激信号的生物学活性。
- 徐耀瑜胡玲玲陈永井程钢罗先富孙杰刘玉华王艳茹陈明心邱玉华
- 关键词：CD80嵌合抗体阻断作用
- 圣愈汤对环磷酰胺诱导的免疫低下小鼠T细胞亚群和细胞因子的影响被引量：8
- 2009年
- 目的观察圣愈汤对免疫低下小鼠T细胞亚群和细胞因子的影响。方法选用昆明种小鼠,环磷酰胺诱导建立免疫低下小鼠模型,用不同剂量的圣愈汤经灌胃给药,每天1次。用药第30天时,称小鼠体重,摘眼球取血,肝素抗凝,采用免疫荧光及流式细胞术分析外周血T细胞亚群的改变,ELISA法检测血浆中IL-2及IL-4的含量。结果各组小鼠外周血的CD8+T细胞的百分率差异无显著性(>0.05)。环磷酰胺组小鼠外周血CD4+T的百分率及CD4+/CD8+的比值比对照组低(<0.05)。环磷酰胺+低剂量组的CD4+T的百分率及CD4+/CD8+的比值与环磷酰胺组高。环磷酰胺+高剂量组与环磷酰胺+免煎组的CD3+T、CD4+T的百分率及CD4+/CD8+的比值比环磷酰胺组高。环磷酰胺组小鼠血浆中细胞因子IL-2及IL-4的浓度比对照组低(<0.05);环磷酰胺+低剂量组、环磷酰胺+高剂量组以及环磷酰胺+免煎组血浆中IL-2及IL-4浓度比环磷酰胺组高,具有统计学意义(<0.05)。环磷酰胺+高剂量组与环磷酰胺+低剂量组IL-2浓度差异也有显著性(<0.05),但与环磷酰胺+免煎组比较差异无显著性(0.05)。结论圣愈汤能纠正环磷酰胺所致的免疫低下小鼠T细胞亚群的异常,升高血液中IL-2及IL-4的含量,从而提高机体的免疫应答水平。
- 周立峰邱玉华程钢孙中文李海舟孙玮丽周春刚
- 关键词：细胞因子类T淋巴细胞亚群圣愈汤
- 抗人CD28鼠-人嵌合抗体的构建及表达
- 目的:构建抗人CD28鼠-人嵌合抗体基因,用293T细胞瞬时表达并对表达产物进行鉴。方法:从分泌鼠抗人CD28单克隆抗体的杂交瘤细胞株(2F5)中提取总RNA,通过RT-PCR技术克隆该抗体VH和VL的编码区基因序列,根...
- 程钢陈永井孙中文马震宇徐耀瑜胡玲玲张学光邱玉华
- 关键词：CD28嵌合抗体突变
- 文献传递
- 抗人CD86嵌合抗体对B淋巴瘤细胞株Raji生长抑制及杀伤作用研究被引量：4
- 2009年
- 目的:研究CD86嵌合抗体ch1D1对天然高表达CD86分子的人恶性B淋巴瘤细胞株Raji增殖抑制及杀伤效应。方法:经流式细胞术检测ch1D1对Raji细胞表面CD86分子的识别;经ch1D1(终浓度10μg/ml)处理Raji细胞,MTT法检测对Raji细胞增殖的抑制效应;流式细胞术检测ch1D1诱导Raji细胞表面FasL及Fas的表达;MTT法检测ch1D1介导的外周血单个核细胞(PBMCs)对Raji为靶细胞的ADCC效应。结果:ch1D1可特异性识别Raji细胞表面CD86分子,阳性结合率为97.5%。ch1D1对Raji细胞增殖的抑制率为27.1%,较鼠源性亲本抗体1D1组(抑制率为38.8%)略下降,但两者统计学比较无差异(P>0.05)。与CD80嵌合抗体ch4E5联合应用抑制率可达56.3%,明显高于ch1D1单独作用的抑制率(P<0.05)。ch1D1作用4小时后,Raji细胞表达FasL水平开始升高,处理72小时阳性表达率为6.8%,较亲本抗体1D1组(阳性表达率3.2%)升高,但统计学比较无显著差异(P>0.05);经ch1D1作用24小时,Raji细胞Fas表达水平开始上调,阳性率为6.1%,较1D1组(阳性表达率4.8%)升高,但无统计学差异(P>0.05)。与ch4E5联合应用均较ch1D1单独作用Fas及FasL的表达水平升高,但统计学比较仍无显著差异(P>0.05)。经ch1D1处理4、24、48、72小时,介导PBMC对Raji细胞杀伤率分别为25.0%、52.0%、71.3%、72.7%,与人IgG1及鼠源亲本抗体对照组相比均明显升高,具有显著差异(P<0.05)。结论:抗人CD86嵌合抗体可抑制高表达CD86分子的肿瘤细胞增殖并诱导其凋亡,与嵌合抗体Fc段介导的ADCC效应具有协同抗肿瘤作用。
- 刘玉华孙杰胡玲玲王艳茹马鸿冰程钢徐耀瑜杜阳阳陈明心邱玉华
- 关键词：CD86嵌合抗体淋巴瘤凋亡ADCC效应
- GL50／ICOS在活化T细胞上的共表达及其生物学意义
- 目的:探讨GL50／ICOS在活化T细胞上的共表达及其生物学意义。方法:利用科室成功研制的阻断性GL50单抗(已被澳大利亚第八届白细胞分化抗原大会命名)的基础上,采用激发型anti-CD3联合anti-CD28、自体DC...
- 孙中文邱玉华王凤鸣孙玮丽程钢徐耀瑜胡玲玲张学光
- 关键词：活化T细胞共表达生物学意义
- 文献传递
- 鼠抗人B7-2单克隆抗体的研制及生物学特性研究被引量：11
- 2006年
- 以天然高表达膜型B7-2分子的人恶性B淋巴瘤经胞株Daudi和B7-2基因转染细胞株L929-B7-2为免疫原及检测细胞株,采用B细胞杂交瘤技术建立了1株稳定分泌抗人B7-2单抗的杂交瘤,命名为6A5。快速定性试纸法鉴定6A5属小鼠IgG1亚类。经体内诱生腹水法制备单抗,小鼠腹水形成的阳性率为80%,腹水的收获量平均为5.9 ml/只小鼠。经免疫亲和层析法纯化,腹水中抗体蛋白的得率为1.1 mg/ml。采用间接免疫荧光法及流式细胞仪分析,单抗6A5与L929-B7-2、PBTC、Raji和Daudi的阳性结合率分别为99.9%、4.6%、90.6%和99.1%。将6A5(终浓度为5μg/ml)加入到Daudi细胞的培养体系中,经显微镜观察及MTT法分析,6A5对Daudi细胞的生长在24 h内具有抑制作用(P<0.05)。以丝裂霉素处理的L929-B7-2为刺激细胞,PBTC为反应细胞,加入6A5共同培养。经MTT法分析,6A5能阻断B7-2介导的协同刺激信号,抑制PBTC增殖(P<0.05)。提示6A5是一株功能性抗体,在B7-2分子相关的基础和应用研究中具有重要的价值。
- 陶然石云杰孙中文马泓冰徐颖程钢孙玮丽周立峰邱玉华张学光
- 关键词：B7-2基因转染细胞协同刺激分子单克隆抗体腹水
- 重组人可溶性gp130的纯化及生物学活性鉴定
- 2006年
- 采用转瓶培养可溶性gp130基因转染细胞。运用免疫亲和层析法，将抗人可溶性gp130的单克隆抗体偶联于CNBr活化的Sepharose 4B。收获基因转染细胞的培养上清，经抗gp130单抗／Sepharose 4B亲和层析柱吸附，用pH2．8、0．1mol／1．甘氨酸溶液洗脱，获取可溶性gp130重组蛋白纯品。基因转染细胞培养上清中可溶性gp130的表达量为100～120μg／ml，纯化后的回收率为70％～75％，SDS-PAGE电泳后出现一条蛋白曲带。经Western blot分析，纯化的可溶性gp130能与特异性抗体结合。将可溶性gp130（终浓度为5μg／m1）与IL-6依赖性生长细胞株XG2共同培养，细胞的生长与增殖出现抑制。提示经免疫亲和层析法纯化的可溶性gp130具有良好的生物学活性。
- 邱玉华马泓冰程钢孙玮丽孙中文周立峰张学光
- 关键词：可溶性GP130单克隆抗体生物学活性
- 抗人CD86人-鼠嵌合抗体的构建及在CHO细胞的表达被引量：9
- 2008年
- 从分泌鼠抗人CD86单克隆抗体的杂交瘤细胞株(克隆号:1D1)中抽提总RNA,采用简并引物,经RT-PCR扩增单抗VH和VL的DNA编码区基因。通过SMART-PCR扩增VH和VL基因相应的信号肽序列。采用基因重组技术,将单抗VH、VL基因及其相应信号肽序列,与人IgG1的CH基因、Cκ链基因进行拼接,构建人-鼠嵌合抗体基因的表达质粒pIRES/1D1。转染293T细胞进行瞬时表达,采用流式细胞术分析,转染上清与L929-CD86基因转染细胞的阳性结合率为97.6%。既而转染CHO细胞,经G418筛选,获取稳定分泌嵌合抗体的基因转染细胞株(CHO-ch1D1)。收集无血清培养基的培养上清,采用Protein G亲和层析柱分离纯化,经Lowr法定量。从上清中获取的嵌合抗体蛋白的得率为3.066 mg/L。经进一步间接免疫荧光及流式细胞术分析,纯化嵌合抗体与L929-CD86基因转染细胞,及Daudi细胞膜型CD86分子的阳性结合率分别为98.5%和95.7%。将嵌合抗体(终浓度为5μg/ml)加入到Daudi细胞的培养体系中,经显微镜观察及MTT法分析,嵌合抗体对Daudi细胞的生长具有抑制作用(P<0.05)。本研究获取的嵌合抗体在CD86分子的基础和应用研究中具有重要的价值。
- 胡玲玲徐耀瑜陈永井马泓冰程钢刘玉华王艳茹孙杰陈明心邱玉华
- 关键词：CD86单克隆抗体嵌合抗体
