王翠翠
- 作品数：2 被引量：2H指数：1
- 供职机构：上海交通大学医学院附属瑞金医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金上海市科学技术委员会资助项目上海市基础研究重大（重点）项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 蛋白磷酸酶2A调节亚基PR55-γ基因克隆及真核细胞表达被引量：1
- 2014年
- 目的:构建蛋白磷酸酶2A(PP2A)调节亚基PR55-γ(PPP2R2C)慢病毒过表达质粒,并在U87细胞株中稳定过表达PPP2R2C,探讨PPP2R2C对PP2A活性的影响。方法:通过反转录(RT)-PCR扩增PPP2R2C的编码序列并克隆至慢病毒载体PWPIR-增强型绿色荧光蛋白(EGFP)中,获得PWPIR-EGFP-PPP2R2C载体,通过酶切鉴定、质粒测序确定质粒克隆成功,用磷酸钙沉淀法将质粒转导至U87细胞中,流式细胞分析术检测U87细胞转导效率,蛋白质印迹法检测目的蛋白表达,通过PP2A蛋白免疫共沉淀法检测PP2A活性。结果:PWPIR-EGFP-PPP2R2C载体构建及U87细胞株稳转过表达PPP2R2C成功,并且细胞转导效率超过90%,外源性PPP2R2C表达率上升近23倍,过表达PPP2R2C能够增强PP2A活性。结论:PWPIR-EGFP-PPP2R2C载体构建成功,并通过慢病毒转导细胞U87细胞株表达PPP2R2C成功,过表达PPP2R2C能够增强PP2A活性,为进一步研究PPP2R2C功能奠定基础。
- 魏波华梁惠欣王翠翠陈连祥叶静陆一鸣
- 关键词：蛋白磷酸酶2A真核表达
- RHPS4限制端粒重复序列结合因子2蛋白的端粒保护作用被引量：1
- 2015年
- 目的 :探讨抗肿瘤药物RHPS4影响端粒重复序列结合因子2(TRF2)对端粒保护作用的机制。方法:在过表达TRF2的A375细胞体系中加入RHPS4,通过蛋白质印迹及免疫荧光结合共聚焦显微镜成像技术检测细胞DNA损伤情况,通过流式细胞技术及细胞增殖实验检测药物对细胞增殖的影响。结果 :在A375细胞中过表达外源性TRF2能抑制DNA损伤的修复,但过表达TRF2不能抑制RHPS4诱导端粒损伤,RHPS4诱导的细胞周期停滞和细胞衰老过表达不依赖于TRF2的表达量。结论:TRF2高水平表达不能拮抗RHPS4的致端粒损伤和细胞周期抑制的作用,肿瘤细胞中高表达TRF2不是应用RHPS4药物的反指征。
- 王翠翠应亦林陈连祥魏波华梁惠欣叶静陆一鸣
- 关键词：端粒抗肿瘤治疗DNA损伤
