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王绍文

作品数：6 被引量：18H指数：3
供职机构：深圳大学更多>>
发文基金：国家自然科学基金深圳市基础研究计划项目广东省自然科学基金更多>>
相关领域：生物学轻工技术与工程化学工程更多>>

合作作者

文献类型

  • 6篇中文期刊文章

领域

  • 5篇生物学
  • 1篇化学工程
  • 1篇轻工技术与工...

主题

  • 3篇里氏木霉
  • 2篇蛋白
  • 2篇丝状真菌
  • 1篇代谢
  • 1篇代谢工程
  • 1篇蛋白质
  • 1篇蛋白质组
  • 1篇蛋白质组学
  • 1篇电泳
  • 1篇电泳技术
  • 1篇丁醇
  • 1篇多头绒泡菌
  • 1篇氧化酶
  • 1篇荧光
  • 1篇荧光蛋白
  • 1篇双向电泳
  • 1篇双向电泳技术
  • 1篇糖苷
  • 1篇糖苷酶
  • 1篇组成型

机构

  • 6篇深圳大学
  • 1篇合肥师范学院
  • 1篇华南农业大学
  • 1篇深圳市微生物...

作者

  • 6篇王绍文
  • 4篇刘刚
  • 3篇田生礼
  • 3篇邢苗
  • 2篇王娟
  • 1篇刘士德
  • 1篇欧阳秋玲
  • 1篇李洁璇
  • 1篇谢钧
  • 1篇张建华
  • 1篇方雪
  • 1篇刘刚

传媒

  • 1篇生物技术通报
  • 1篇食品与发酵工...
  • 1篇微生物学通报
  • 1篇微生物学杂志
  • 1篇深圳大学学报...
  • 1篇菌物学报

年份

  • 1篇2016
  • 3篇2014
  • 1篇2011
  • 1篇2006
共 6 条 记 录，以下是 1-6
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排序方式：
基于双向电泳技术的里氏木霉高效组成型启动子筛选被引量：2
2014年
获得强启动子是建立高效表达系统的基础。通过蛋白质双向电泳技术从蛋白质水平全面筛选里氏木霉的组成型启动子,获得了3个表达效率较高的启动子,分别是葡萄糖/核糖醇脱氢酶基因的启动子(grdh)、微体蛋白基因的启动子(hex1)和FAD相关蛋白基因的启动子(flo)。通过木聚糖酶Ⅱ(XYN2)的高效同源表达对这些启动子的功能进行了验证,为在里氏木霉中进行同源或异源蛋白的组成型表达提供了有效的工具。
禹建腾谢钧王绍文王娟刘刚
关键词：里氏木霉蛋白质组学二维电泳木聚糖酶
丙酮丁醇梭菌代谢工程菌的构建及其发酵性能被引量：2
2014年
丙酮丁醇梭菌Clostridium acetobutylicum可以利用葡萄糖、木糖、阿拉伯糖、纤维二糖等多种底物,发酵糖获得丙酮、丁醇、乙醇等产物,是一种优良的木质纤维素同步糖化发酵菌种。为获得具有更优良发酵性能的木质纤维素发酵菌株,使用代谢工程技术对丙酮丁醇梭菌进行改造。将乙酰乙酰CoA硫解酶基因(thl)的启动子和末端两个同源片段以及醛/醇脱氢酶基因(adhE)的开放阅读框连接到pUC18上,构建成整合型质粒pTAEE,电转化丙酮丁醇梭菌后在红霉素抗性平板筛选转化子。通过PCR扩增及产物序列分析表明,质粒pTAEE中的adhE基因以单交换的方式整合到转化子基因组中,增强adhE的表达。重组菌T4的乙醇得率为2.3%,比野生菌提高了15%,乙醇浓度为0.39 g/L,与野生菌相当;丁醇得率为41.6%,比野生菌提高了69%,丁醇浓度为6.9g/L,比野生菌提高了41%,获得了发酵性能更高的丙酮丁醇梭菌代谢工程菌株。
方雪刘刚邢苗王绍文
关键词：丙酮丁醇梭菌代谢工程丁醇
里氏木霉GH61家族糖苷酶的高效表达及酶学特性研究被引量：4
2014年
【目的】GH61家族糖苷水解酶具有葡聚糖氧化酶活性,通过对葡聚糖链的随机氧化而破坏木质纤维素的结晶结构,从而使木质纤维素容易被纤维素酶降解。重组表达、纯化获得里氏木霉的GH61家族糖苷水解酶(TrGH61,原名为EGⅣ),并研究其在纤维素酶水解木质纤维素中的作用。【方法】通过Overlap PCR将里氏木霉丙酮酸脱羧酶的启动子、纤维二糖水解酶cbh1的信号肽、EGⅣ基因和PDC终止子依次连接构建了里氏木霉的表达盒,通过该表达盒使TrGH61蛋白基因整合到里氏木霉的基因组DNA上进行同源表达。研究表达产物TrGH61的水解活性、与纤维素酶水解协同效应,以及TrGH61作为金属氧化酶的特性研究。【结果】在PDC启动子的作用下,TrGH61得到高效表达,摇瓶培养的表达量达到2.33 g/L。TrGH61有微弱的内切葡萄糖苷酶活性,比活力为0.02 IU/mg,但能显著提高纤维素酶水解稻草粉的活性,协同度最高可达1.998。低浓度的金属离子Cu2+、Co2+和还原性电子供体还原型谷胱甘肽、L-抗坏血酸、焦性没食子酸均能显著促进其水解效应。TrGH61能够降低稻草粉纤维素聚合度和结晶度。【结论】通过PDC启动子可以实现TrGH61蛋白高效组成型表达,TrGH61作为纤维素酶活性促进因子,通过破坏纤维素结晶结构作用机制协同增强纤维素酶水解木质纤维素。
冯飞王绍文王娟刘刚
关键词：里氏木霉纤维素酶
丝状真菌中的RNA干扰及其应用技术被引量：6
2011年
RNA干扰是真核生物中相对保守的一种基因转录后表达调控机制,它通过双链RNA介导细胞内mRNA发生特异性降解或翻译抑制,从而调控靶基因的表达。对丝状真菌中RNA压制和减数分裂沉默等现象的研究表明,与动、植物一样,丝状真菌中也存在RNA干扰现象。通过对RNA压制缺失突变株和减数分裂沉默缺失突变株的一系列分子生物学研究,获得了与之密切相关的一系列蛋白,而这些蛋白在结构和功能上与动、植物RNA干扰途径的蛋白高度相似,这些结果证明了丝状真菌中的RNA存在干扰现象。RNA干扰技术作为丝状真菌分子生物学研究或遗传改造的工具具有特殊的意义,因为丝状真菌具有多核和发生非同源重组频率高的特点,难以用基因敲除手段进行改造。系统地介绍丝状真菌中的RNA干扰途径以及使用RNA干扰对真菌进行遗传改造的方法。
王绍文刘刚邢苗田生礼
关键词：RNA干扰SIRNA丝状真菌
采用酵母双杂交法筛选PSRPK相关蛋白基因被引量：3
2006年
本课题组在前期研究中,从多头绒泡菌中分离到一个SR蛋白激酶基因psrpk,并将其编码蛋白命名为PSRPK(SR protein kinase ofPhysarum Polycephalum).为分离PSRPK相关蛋白基因以了解PSRPK的功能,构建了转化率为2×106转化子/3μg pGADT7-Rec、密度为5.35×108cells/mL、滴度为2.34×109cfu/mL的多头绒泡菌酵母双杂交AD库.以PSRPK为饵蛋白筛选该文库得到接合率为41.18%的杂交酵母,在SD/-Leu/-Trp/-Ade/-H is培养板上筛选获得1476个杂交克隆,其中,X-gal滤纸显色呈强蓝色的克隆有342个.对大于500 bp的67个克隆测序获得35个cDNA片段,其中编码Plasm in C、branched-chain am inoacid am inotransferase(BCAT)类似蛋白、MSF1类似蛋白、m ixed-linked glucanase precursor类似蛋白、FCY1p类似蛋白和40S ribosomal protein S2类似蛋白等7个cDNA片段在阳性杂交酵母克隆中出现多次,其余仅出现一次.在35个cDNA片段的编码序列中有15个具有同源蛋白,31个编码序列的丝氨酸含量大于或等于6%,符合激酶底物的组成特征.
欧阳秋玲刘士德张建华王绍文田生礼邢苗
关键词：多头绒泡菌酵母双杂交PLASMINGLUCANASERIBOSOMALPROTEIN
丝状真菌里氏木霉中shRNA沉默红色荧光基因被引量：1
2016年
报道了在里氏木霉中建立的一种以红色荧光蛋白(DsRed)为报告基因的RNA干扰方法。首先,将构建的表达DsRed质粒p ANRed1转化里氏木霉QM9414,得到抗潮霉素B抗性并能稳定表达DsRed的菌株DsRed-T.reesei。其次,以丙酮酸脱氢酶启动子Ppdc和纤维二糖水解酶I终止子cbh I为原件,克隆到载体p PHL上构建质粒p PHL-Ppdc-Tcbh1。根据DsRed基因序列设计特定的siRNA干扰序列和另一条无同源序列的siRNA作为阴性对照,克隆到载体p PHL-Ppdc-Tcbh1得到重组质粒。将其转化到DsRed-T.reesei中,用含有100μg/m L潮霉素B和250μg/m L腐草霉素的PDA平板筛选转化子。结果表明,约79%的转化子出现红色荧光沉默现象,其中一些转化子DsRed的表达几乎完全被抑制。荧光定量PCR和Western印迹分析显示DsRed基因的表达受到不同程度的下调。以上结果提示,在里氏木霉中可用此方法研究基因表达调控。
李洁璇刘雯莉梁智成王绍文梁秀怡佘炜怡刘刚田生礼
关键词：SHRNA里氏木霉
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