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抗t-PA单克隆抗体的制备及初步应用: 1996年; 用猪心t-PA和人黑色素瘤细胞分泌的t-PA作抗原,经腹腔及脾内免疫Bal b/c小鼠。用细胞融合技术制备杂交瘤细胞,细胞融合串达85％,获得4株抗t-PA杂交瘤细胞株,鼠腹水抗体效价达1∶10~5;Western Blot结果表明该单抗所结合的抗原分子量与t-PA相符,证明所获得的单抗为特异的抗t-PA单抗;对t-PA的纤溶活性中和抑制试验结果表明,4株单抗中的1株能完全抑制st-PA的纤溶活性,另外3株表现出程度不等的抑制;其中1株亚类为IgG,另外3株为IgM。杂交瘤细胞株无支原体污染;染色体数目正常。对该抗体进行初步纯化后,将其应用于rt-PA的研究中。; 徐秀英陈琳王少飞刘农乐赵立权黄培堂; 关键词：单克隆抗体杂交瘤

抗t-PA单克隆抗体的制备及初步应用: 1997年; 应用猪心ｔ－ＰＡ和人黑色素瘤细胞分泌的ｔ－ＰＡ作抗原，经腹腔及脾内免疫ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠。用细胞融合技术制备杂交瘤细胞，细胞融合率达８５％，获得四株抗ｔ－ＰＡ杂交瘤细胞株，鼠腹水抗体效价达１１０５；Ｗｅｓｔｅｒｎ－Ｂｌｏｔ结果表明该单抗所结合的抗原分子量与ｔ－ＰＡ相符，证明所获得的单抗为特异的抗ｔ－ＰＡ单抗；对ｔ－ＰＡ的纤溶活性中和抑制试验结果表明：四株单抗中的一株能完全抑制ｓｔ－ＰＡ的纤溶活性，另外三株表现出程度不等的抑制；其中一株亚类为ＩｇＧ，另外三株为ＩｇＭ。杂交瘤细胞株无支原体污染；染色体数目正常。对该抗体进行初步纯化后，将其应用于ｒｔ－ＰＡ的研究中。; 徐秀英陈琳王少飞赵立权黄培堂; 关键词：纤溶酶原激活剂 T-PA 单克隆抗体

利用杆状病毒早期启动子在昆虫细胞中持续表达人β－干扰素: 1994年; 在含苜蓿尺蠖核多角体病毒（ＡｃＮＰＶ）早期基因启动子的载体ｐＡｃＩＥ１中，插入人β－干扰囊（ＨｕＩＦＮ－β）基因，构建成转移载休ｐＩＥ１－ＩＢ；ｐＩＥ１－ＩＢ与含新霉素抗性基因（ＮＥＯ￣ｒ）的质粒ｐＩＥＩ－ＮＥＯ共转染秋粘虫细胞（Ｓｆ９细胞），使ＨｕＩＦＮ－β基因和ＮＥＯ￣ｒ基因整合到细胞基因组上产生转化细胞，含Ｇ４１８的培基分离新霉素抗性克隆，并增殖传代；转化细胞株传至５０代以上，不同传代水平细胞ＤＮＡ的点杂交证实ＨｕＩＦＮ－β基因已整合在细胞ＤＮＡ分子上，同时检测出干扰素（ＩＦＮ）的持续稳定表达，活性为５００—４０００ＩＵ／１０￣６细胞。抗天然ＨｕＩＦＮ－β抗体能完全中和所表达ＩＦＮ的抗病毒活性。; 杨琴邓继先王少飞程萱; 关键词：杆状病毒干扰素

用构建的新型BmNPV载体在家蚕高效表达人β-干扰素: 1994年; 家蚕核多角体病毒(Bombyx mori Nuclear Polyhedrosis Virus.BmNPV)和家蚕细胞已成功地用来大量生产具有生物活性的重组蛋白。但是BmNPV的通用载体的类型较少。因此,本实验构建了BmNPV新型载体pBm92,该载体将多角体蛋白基因的起始密码ATG改变为ATT,然后在多角体蛋白基因的+12位外连接有5个外源基因的克隆位点。将HuIFN-β基因克隆在多角体蛋白基因的+12位后,构建了pBmIFN+12;同时构建HuIFN-β克隆在-3位后的转移栽体pBmIFN-3。将两种转移载体DNA分别与BmNPV基因组DNA共转染Bm-N细胞。利用重组病毒不产生多角体蛋白的特征,筛选重组病毒。用HuIFN-β基因探针与重组病毒DNA进行杂交鉴定。重组病毒BmIFN+12感染Bm-N细胞,其上清IFN活性最高时可达2.0×10~6IU/ml,将BmIFN+12注射5龄家蚕虫体,表达水平为50×10~7IU/ml,是HuIFN-β基因克隆在多角体蛋白基因的-3位后获得的重组病毒的表达量的2～4倍。家蚕体生产的rHulFN-β为糖基化蛋白具有天然HuIFN-β的抗原性。; 邓继先王少飞杨琴卢建申程萱李琳周耐明肖成祖; 关键词：BMNPV

用构建的新型BmNPV载体在家蚕高效表达人β-干扰素被引量：8: 1995年; 构建了家蚕核多角体病毒新型载体ｐＢｍ９２，该载体将多角体蛋白基因的起始密码ＡＴＧ改变为ＡＴＴ，然后在多角体蛋白基因的＋１２位后连接有５个外源基因的克隆位点。将ＨｕＩＦＮ－β基因克隆在多角体蛋白基因的＋１２位后，构建了ｐＢｍＩＦＮ＋１２；同时构建了ＨｕＩＦＮ－β克隆在－３位后的转移载体ｐＢ－ｍＩＦＮ－３。; 邓继先王少飞杨琴程萱李琳; 关键词：BMNPV Β-干扰素基因表达

人β－干扰素在杆状病毒载体与Sf细胞体系中的表达被引量：2: 1994年; 采用苜蓿尺蠖核多角休病毒（Ａｕｔｏｇｒａｐｈａｃａｌｉｆｏｒｎｉｃａｎｕｃｌｅａｒｐｏｌｙｈｅｄｒｏｓｉｓｖｉｒｕｓ，ＡｃＮＰＶ）ＤＮＡ中多角体蛋白基因启动子及其前后序列作为转移载体，将人β－干扰素（ＨｕＩＦＮ－β基因插入转移载体ｐＵＡｃ－５，构建成ｐＡｃ－ＩＦＮ－β载体。该质粒ＤＮＡ与野生型ＡｃＮＰＶＤＮＡ经ｌｉｐｏｆｅｃｔｉｎ共转染秋粘虫（Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ）传代细胞（Ｓｆ９细胞），利用重组病毒不产生多角体蛋白的特征，进行病毒空斑筛选。用核酸杂交方法鉴定出携带ＨｕＩＦＮ－β基因的主组病毒。用重组病毒感染Ｓｆ９细胞，可表达ｒＨｕＩＦＮ－β。在１．０×１０￣６细胞／ｍｌ感染上清中测定ｒＨｕＩＦＮ－β最高活性为３．０×１０￣６ＩＵ／ｍｌ，抗天然ＨｕＩＦＮ－β抗体能完全中和ｒＨｕＩＦＮ－β的抗病毒活性。; 邓继先卢建申杨琴程萱王少飞李琳陈琳肖成祖宓怡德吴祥甫李载平; 关键词：干扰素杆状病毒昆虫细胞

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王少飞