王前
- 作品数：3 被引量：0H指数：0
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- 8携带RyR2RNAi重组慢病毒载体的构建及小鼠心肌细胞RyR2基因的表达
- 王前穆永慧朱涵杨春王志举章茜
- 文献传递
- RyR2-shRNA重组慢病毒载体的构建及其对离体心肌细胞RyR2基因表达的影响
- 2012年
- 目的构建携带RyR2-shRNA的慢病毒载体,并检测其对小鼠离体心肌细胞中RyR2的基因沉默效果。方法设计并合成针对小鼠RyR2基因的shDNA,克隆入含U6启动子和EGFP报告基因的慢病毒载体psiHIV-U6-eGFP,构建表达RyR2-shRNA的慢病毒载体,通过将慢病毒转移质粒和包装质粒共转染293T细胞,得到重组慢病毒载体颗粒,然后离体感染小鼠心肌细胞,采用Real-timePCR检测RyR2在mRNA水平的沉默效应。结果经测序证实RNAi慢病毒载体构建成功并成功包装。流式细胞仪测得重组慢病毒感染小鼠心肌细胞的阳性率达80%以上。Real-timePCR证实,重组慢病毒Lenti-siRyR2感染的小鼠心肌细胞中RyR2在mRNA水平基因抑制率达90%以上。结论成功构建了表达RyR2-shRNA的重组慢病毒表达载体,并在小鼠心肌细胞中实现有效的基因沉默效应。
- 王前段萍朱涵穆永慧赵伟达王志举章茜
- 关键词：慢病毒载体RNA干扰新生小鼠
- 携带RyR2RNAi重组慢病毒载体的构建及小鼠心肌细胞RyR2基因的表达
- 目的:采用RNA干扰（RNA interference,RNAi）技术检测RNAi重组慢病毒对原代培养小鼠心肌细胞中RyR2基因表达的影响,为后续进一步研究RyR2的功能奠定基础。方法:设计合成四对针对小鼠RyR2基因不...
- 王前穆永慧朱涵杨春王志举章茜
- 文献传递
