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融合蛋白DT389-hIL-13的克隆表达及其抗胶质瘤作用的初步研究被引量：3: 2004年; 目的　构建白喉毒素N端 389个氨基酸 (DT389)与人白细胞介素 13(hIL 13)的融合蛋白DT389 hIL 13,并检测其生物学活性。方法　通过聚合酶链反应 (PCR)扩增得到hIL 13的cDNA ,将序列正确的hIL 13及DT389的cDNA片段串联插入表达载体pET30a ,构建表达质粒pET30a/DT389 hIL 13,并对表达产物进行鉴定及初步纯化。该融合蛋白加入培养的U2 51胶质细胞中 ,应用MTS方法检测其对多型性胶质母细胞瘤细胞的杀伤作用。结果　得到序列正确的融合蛋白DT389 hIL 13的表达质粒pET30a/DT389 hIL 13,该质粒在大肠杆菌成功表达 ,经初步纯化后 ,十二烷基磺酸钠聚丙烯酰胺 (SDS PAGE)凝胶电泳及Western印迹分析表明 ,该融合蛋白对白喉毒素多克隆抗体及hIL 13多克隆抗体都有很好的免疫反应性 ,相对分子质量约为 5 5 0 0 0 ;进一步活性检测发现 ,该融合蛋白对多型性胶质母细胞瘤细胞系U2 5 1的生长有较强的抑制作用 ,且作用存在剂量相关性 ,其半数抑制浓度(IC50 )约为 5× 10 -11mol/L。结论　成功构建了融合蛋白DT389 hIL 13的表达质粒 ,在细胞水平对表达产物进行了初步的活性检测 ,为进一步研制特异性的抗胶质瘤药物打下了基础。; 脱厚珍王健伟王得新李继梅欧阳晶洪涛; 关键词：白细胞介素13

提高免疫毒素DT_(386)-GMCSF在E.coli中表达量的研究: 2007年; 以人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)受体(GM-CSFR)为靶向的白喉毒素(DT)与GM-CSF免疫毒素DT386-GMCSF为急性髓系白血病提供了一种新的替代治疗途径,但该蛋白在E.coli中的表达量很低,难以进行工业化生产。为探索造成其低表达的关键影响因素,对DT386-GMCSF中的GM-CSF进行了C端的截短表达,发现GM-CSF中L114编码序列可明显影响融合蛋白的表达量。在此基础上,构建了一系列突变体,发现保留GM-CSF1-123位氨基酸且将L114L115V116突变为G114V115T116的突变体DF123GVT的表达量高于DT386-GMCSF,且对来源于高表达GM-CSF受体的HL60细胞的肿瘤单细胞具有相似的细胞毒作用。DF123GVT突变体的获得为GM-CSFR靶向的免疫毒素的开发应用打下了基础。; 王健伟欧阳晶崔婷屈建国洪涛; 关键词：免疫毒素白喉毒素粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子

白喉毒素与GM－CSF突变体的融合蛋白及其编码基因与应用: 本发明公开了一种白喉毒素与GM-CSF突变体的融合蛋白及其编码基因与应用。该白喉毒素与GM-CSF突变体的融合蛋白的氨基酸残基序列如序列表中序列2所示。该白喉毒素与GM-CSF突变体的融合蛋白不但表达量高，同时还保持了杀...; 欧阳晶王健伟洪涛; 文献传递

靶向GM-CSFR的白喉毒素免疫毒素的表达纯化与细胞毒性: 急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)在成人白血病中发病率位居第一、儿童中发病率居第二,而且多数患者最终死于复发或治疗相关的并发症,造成严重的社会负担和影响。免疫毒素可识别并结合肿瘤细胞表...; 欧阳晶王健伟洪涛; 文献传递

重组白喉毒素-人白细胞介素13嵌合毒素诱导胶质瘤细胞凋亡作用的初步研究: 2004年; 目的探讨重组白喉毒素-人白细胞介素13嵌合毒素DT389-IL13对胶质瘤细胞的杀伤作用机制。方法在U251细胞中加入不同浓度的嵌合毒素DT389-IL13,作用72 h后分别进行H33342染色,观察胶质瘤细胞核形态,电镜观察细胞超微结构,用流式细胞仪计数亚二倍体细胞百分数等。结果 3种检测结果均表明,嵌合毒素DT389-IL13可诱导U251胶质瘤细胞发生凋亡,1×10-9mol/L嵌合毒素作用72 h后亚二倍体细胞百分比为38％,1×10-8mol/L.作用后亚二倍体细胞百分比为99％,明显高于对照组(3.63％),与荧光染色观察的结果一致;电镜下还可见固缩的线粒体。结论嵌合毒素DT389-IL13可诱导胶质瘤细胞凋亡。; 脱厚珍王健伟王得新欧阳晶赵伟秦洪涛; 关键词：胶质瘤细胞凋亡流式细胞仪纯化

一种简单高效扩增人杯状病毒ORF2区RT-PCR方法的建立及其意义: 2006年; The capsid protein encoded by ORF2 of human calicivirus(HuCV) expressed in the baculovirus expression system can self-assembled into virus-like particles(VLPs),which would be important for the development of improving diagnostic methods.The RT-PCR procedures routinely used to amplify the RNA polymerase region have usually been inefficient for amplification of ORF2,which would bring obstacle for the development of new diagnostic reagents.Through optimization of RT-PCR conditions,we established a simple and high performance RT-PCR method to amplify ORF2,and by which demonstrated a corresponding relationship between the genotype and the antigenic type.It provides conditions for developing diagnostic reagent which accommodates to diagnosis of HuCVs prevailing in China,and also provides the basis for studying the genetic variance and the pathogenesis of HuCV.; 谢华萍方肇寅章青欧阳晶Weiming ZhongXi Jiang; 关键词：人杯状病毒诺如病毒 ORF2 RT-PCR

诺如病毒34601株VP1基因在昆虫细胞sf9中表达及抗原性鉴定: 目的：利用杆状病毒表达系统对诺如病毒GII-4基因型毒株34601株VP1基因进行表达，并利用Western-blotting进行抗原性分析。方法：以PCR法扩增VP1全长基因，并将其克隆到pFastBac1载体中，通过...; 靳淼谢华萍欧阳晶章青杨学梅段招军; 关键词：诺如病毒急性胃肠炎 VP1基因衣壳蛋白杆状病毒表达; 文献传递

白喉毒素与GM－CSF的融合蛋白及其编码基因与应用: 本发明公开了一种白喉毒素与GM－CSF的融合蛋白及其编码基因与应用。该白喉毒素与GM－CSF的融合蛋白，是如下(a)或(b)的蛋白质：(a)由序列表中序列2的氨基酸残基序列组成的蛋白质；(b)将序列表中序列2的氨基酸残基...; 欧阳晶王健伟洪涛; 文献传递

白喉毒素与GM－CSF突变体的融合蛋白及其编码基因与应用: 本发明公开了一种白喉毒素与GM－CSF突变体的融合蛋白及其编码基因与应用。该白喉毒素与GM－CSF突变体的融合蛋白，是如下(a)或(b)的蛋白质：(a)由序列表中序列2的氨基酸残基序列组成的蛋白质；(b)将序列表中序列2...; 欧阳晶王健伟洪涛; 文献传递

丝氨酸蛋白酶抑制剂Ea的表达纯化与活性分析被引量：2: 2003年; Ea是一种植物来源的丝氨酸蛋白酶抑制剂 ,分子量为 1 8kD。利用其与丝氨酸蛋白酶家族成员的结合特性 ,可用于丝氨酸蛋白酶的结构与功能研究 ,也可作为亲和层析的配体而用于丝氨酸蛋白酶的纯化。将Ea基因插入大肠杆菌表达载体pET1 1a ,在BL2 1 (DE3)菌中以包涵体形式表达出重组蛋白质 ,表达量可占菌体蛋白质总量的 30 %。将包涵体变性、复性 ,得到具有天然抑制活性的rEa。经两步纯化所得rEa的纯度达到 96 7%以上。活性分析表明 ,rEa对胰蛋白酶和人组织型纤溶酶原激活剂均有抑制作用。制备成rEa Sepharose亲和柱可有效结合胰蛋白酶。; 欧阳晶王健伟杨晓梅屈建国洪涛; 关键词：活性分析 EA

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