林小琼
- 作品数：13 被引量：24H指数：3
- 供职机构：华南理工大学生物科学与工程学院更多>>
- 发文基金：广东省自然科学基金广东省科技攻关计划广东省工业攻关项目更多>>
- 相关领域：轻工技术与工程生物学化学工程更多>>
- 木聚糖酶的基因、质粒、菌株及应用
- 本发明提供一种耐高温耐强碱、高效稳定的木聚糖酶的基因、表达载体、生产菌株及其在纸浆漂白的用途。本发明提供的木聚糖酶基因利用密码子优化、多拷贝技术实现在毕赤酵母中的高表达；表达的木聚糖酶无纤维素酶活性，具有耐高温、耐高碱性...
- 林影韩双艳林小琼郑穗平廖超登
- Lysine 21突变对树干毕赤氏酵母木糖还原酶辅酶依赖性的影响
- 木糖还原酶是重组酿酒酵母工程菌利用木糖生成乙醇代谢途径中的关键酶,该关键酶在利用木糖时依赖NADPH而不是NADH是导致酿酒酵母代谢木糖生成乙醇的最终产率低的主要原因之一。本研究利用质粒载体pET28b分别将突变后的基因...
- 曾琦锴杜红丽翟志臣林小琼林影
- 关键词：发酵微生物木糖还原酶基因表达
- 文献传递
- 碱性木聚糖酶在毕赤酵母中高效表达体系的构建及其机理研究
- 本研究基于毕赤酵母基因组、转录组以及蛋白质等组学技术研究的基础，采用密码子优化技术，增加基因剂量以及分泌途径改造技术实现规模化，在毕赤酵母中高效表达应用于纸浆漂白的耐热耐碱性木聚糖酶，同时，通过iTR.AQ(isobar...
- 林小琼王蓓蓓韩双艳林影
- 关键词：造纸工业碱性木聚糖酶毕赤酵母基因表达
- 文献传递
- 利用rDNA整合实现木聚糖酶的高效表达
- ＜正＞木聚糖酶应用于纸浆生物漂白的潜力巨大,经济效益和环境效益显著。但是制浆造纸对木聚糖酶的要求比较苛刻:耐热、耐碱性及良好的稳定性。此外,提高表达降低成本也是工业上追求的目标之一。大量的例子表明,外源蛋白的表达量与其基...
- 王蓓蓓林小琼韩双艳林影
- 文献传递
- Lysine 21突变对树干毕赤氏酵母木糖还原酶辅酶依赖性的影响被引量：2
- 2008年
- 木糖还原酶是重组酿酒酵母工程菌利用木糖生成乙醇代谢途径中的关键酶,该关键酶在利用木糖时依赖NADPH而不是NADH是导致酿酒酵母代谢木糖生成乙醇的最终产率低的主要原因之一。为了改变树干毕赤氏酵母木糖还原酶的辅酶依赖性,对它的第21位赖基酸Lys进行了突变。利用质粒载体pET28b分别将突变后的基因K21A-XYL1、K21R-XYL1及野生基因WT-XYL1在大肠杆菌E.coliBL21(DE3)中进行表达,表达后的蛋白经His-Tag纯化柱纯化后测定酶学性质。结果表明:K21R突变子的辅酶依赖性没有改变,但K21A突变子的辅酶依赖性由NADPH完全逆转为NADH。
- 曾琦锴杜红丽翟志臣林小琼林影
- 关键词：木糖还原酶定点突变
- 枯草芽孢杆菌B2(Bacillus subtilis B2)木聚糖酶在毕赤酵母中的表达被引量：4
- 2009年
- 木聚糖酶是主要工业用酶制剂之一,在食品行业应用广泛。将编码枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis B2)木聚糖酶XYN的基因克隆到pPIC9K载体中,构建了分泌型表达载体pPIC9K-XYN,载体经线性化后转化Pichia pastoris GS115,G筛选获得了分泌表达XYN的重组毕赤酵母工程菌GS115/pPIC9K-XYN。初步研究表明:以山毛榉木聚糖为底物时,重组毕赤酵母工程菌摇瓶水平发酵上清液中木聚糖酶酶活可达1542.6U/mL,重组木聚糖酶最适温度为50℃,最适pH值为6.0,并显示出较好的热稳定性和宽pH适应性。
- 韩双艳林小琼张溪林影
- 关键词：枯草芽孢杆菌木聚糖酶毕赤酵母分泌表达
- 木聚糖酶的基因、质粒、菌株及应用
- 本发明提供一种耐高温耐强碱、高效稳定的木聚糖酶的基因、表达载体、生产菌株及其在纸浆漂白的用途。本发明提供的木聚糖酶基因利用密码子优化、多拷贝技术实现在毕赤酵母中的高表达；表达的木聚糖酶无纤维素酶活性，具有耐高温、耐高碱性...
- 林影韩双艳林小琼郑穗平廖超登
- 文献传递
- 基于iTRAQ技术的高效表达木聚糖酶重组毕赤酵母细胞的蛋白组学研究
- 毕赤酵母表达系统是通用的、高效的外源蛋白表达系统，广泛地应用于生产和表达各种外源蛋白、研究蛋白的表达和分泌机制。随着基因测序技术的发展，转录组学研究成为基因表达调控的主要方法。然而，基因的转录水平和蛋白表达水平并不是完全...
- 林小琼
- 关键词：毕赤酵母木聚糖酶蛋白质组
- 树干毕赤酵母木糖还原酶Lysine270定点突变的理性设计被引量：1
- 2009年
- Lysine270是树干毕赤酵母木糖还原酶(PsXR)与还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷磷酸(NADPH)或还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADH)形成结合口袋的关键氨基酸之一.为研究该位点对PsXR辅酶偏好性的影响,用其它19种氨基酸替代Lysine270,构建19种不同的木糖还原酶(XR)突变子,利用同源建模和分子对接的方法评价不同突变子与NAD+或NADP+之间的相互作用,并从中选择突变子K270R和K270N进行实验验证.突变基因及野生基因用异丙基-β-d-硫代半乳糖苷(IPTG)在大肠杆菌内进行诱导表达,经纯化后进行酶学性质研究.结果发现:K270R突变使得XR与NADP+的结合能力降低,米氏常数Km由0.025mmol/L升高到0.050mmol/L;K270N突变使得XR与NADP+不能结合.实验结果亦证实,通过理性选择得到的K270N突变子的辅酶依赖性由NADPH完全逆转为NADH.
- 曾琦锴林影翟志臣林小琼杜红丽
- 关键词：木糖还原酶定点突变生物信息学
- 抗辐射不动杆菌碱性脂肪酶基因在毕赤酵母中的表达被引量：3
- 2013年
- 本研究将来自抗辐射不动杆菌CMC-1的碱性脂肪酶基因去掉信号肽,经密码子优化及全基因合成后克隆到pPICZαA载体,构建了重组质粒pPICZαA-ARL,质粒线性化后转化毕赤酵母X33,筛选得到分泌表达碱性脂肪酶的重组毕赤酵母X33/pPICZαA-ARL。摇瓶发酵液上清酶活最高达65 U/mL,初步研究了该脂肪酶的酶学性质,其最适作用温度为50℃,最适pH为9.0,最适底物是对硝基苯酚辛酸酯。
- 韩双艳赵小兰林小琼郑穗平林影
- 关键词：碱性脂肪酶密码子优化毕赤酵母
