杨新惠
- 作品数：4 被引量：18H指数：3
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- 甘草查尔酮A对小鼠黑色素瘤B16F10细胞体外迁移能力的影响被引量：2
- 2015年
- 目的：探讨甘草中黄酮类化合物甘草查尔酮A（licochalcone A,LCA）对小鼠黑色素瘤B16F10细胞株体外迁移能力的影响。方法：取对数生长期B16F10细胞按8 000个/孔接种于96孔板中,磺酰罗丹明B（SRB）法测定LCA（0,5,10,15,20μmol·L-^1）作用24 h对细胞活力影响;取对数生长期B16F10细胞按1×10^5个/孔接种于24孔板中,划痕实验检测LCA（0,5,10,15μmol·L^-1）作用24 h细胞体外迁移能力;取对数生长期B16F10细胞按5×10^5个/瓶接种于细胞培养瓶中,LCA（0,5,10,15μmol·L^-1）作用24 h后,明胶酶谱法检测细胞培养上清基质金属蛋白酶-2（MMP-2）和基质金属蛋白酶-9（MMP-9）活性;ELISA检测MMP-2和MMP-9蛋白含量;实时荧光定量PCR（Q-PCR）和半定量PCR（RT-PCR）法检测MMP-2和MMP-9基因表达水平。结果：5-15μmol·L-1的LCA对小鼠黑色素瘤B16F10细胞作用24 h,对细胞活力没有显著的影响;划痕试验结果说明,LCA可剂量依赖性地降低B16F10细胞的体外迁移能力;明胶酶谱结果显示,LCA可明显抑制B16F10细胞分泌MMP-2和MMP-9的活性;ELISA试验表明,LCA可明显降低MMP-2和MMP-9蛋白表达;Q-PCR和RT-PCR结果显示,LCA可明显降低MMP-2和MMP-9的mRNA基因表达量。结论：甘草查尔酮A能抑制B16F10小鼠黑色素瘤细胞体外转移侵袭作用,其机制可能与抑制MMP-2和MMP-9表达有关。
- 马晓懿杨新惠郑秋生
- 关键词：抗转移基质金属蛋白酶
- 异甘草素对人膀胱癌T24细胞ATP生成和乳酸代谢影响被引量：3
- 2015年
- 为探讨异甘草素对人膀胱癌T24细胞糖酵解水平的影响及其作用机制。本研究采用SRB法测定异甘草素对人膀胱癌T24细胞增殖的影响;试剂盒测定T24细胞中ATP含量变化;试剂盒检测细胞培养液中葡萄糖摄取和乳酸含量影响;用比色法测定己糖激酶和丙酮酸激酶活性,酶标仪法测定乳酸脱氢酶的活性。结果显示:异甘草素对T24细胞有显著增殖抑制作用,且呈剂量依赖性(P<0.01),经异甘草素处理的T24细胞出现明显的形态改变;异甘草素可浓度依赖性的抑制T24细胞ATP的生成(P<0.05或P<0.01);异甘草素可减少T24细胞对葡萄糖的摄取和乳酸的释放(P<0.05或P<0.01);与对照组相比,经过异甘草素处理的T24细胞的HK、PK和LDH活性均明显降低(P<0.05或P<0.01)。由此可知,异甘草素可抑制T24细胞糖酵解水平,其机制可能与减少葡萄糖摄取,下调糖酵解的关键性酶的活性有关。
- 杨新惠马晓懿卢宁王博王朋龙郑秋生
- 关键词：异甘草素T24细胞糖酵解
- 紫草素通过氧化胁迫诱导K562细胞凋亡被引量：7
- 2013年
- 目的:研究紫草素(shikonin)诱导人红白血病细胞(K562)凋亡作用并初步探讨其机制。方法:噻唑蓝(thiazolylblue,MTT)染色法检测紫草素对K562细胞的增殖抑制作用;Hoechst 33258和吖啶橙(acridine orange,AO)/溴化乙啶(ethidiumbromide,EB)染色法观察细胞凋亡形态;反转录酶-聚合酶链锁反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)法检测与凋亡相关基因:B细胞淋巴因子基因2相关X蛋白(B-cell lymphoma gene 2 associated X protein,Bax)、B细胞淋巴因子基因2同源3结构域相互作用基团死亡促进因子(BH3 interacting domain death agonist,Bid)、B细胞淋巴因子基因xL(B-celllymphoma gene xL,Bcl-xL)、p53上调凋亡调控因子(p53 up-regulated modulator of apoptosis,PUMA)、B细胞淋巴因子基因2同源拮抗因子(B-cell lymphoma gene 2 homologous antagonist,Bak)、B细胞淋巴因子-w(B-cell lymphoma-w,Bcl-w)、B细胞淋巴因子基因2相关死亡促进因子(B-cell lymphoma gene 2 associated death promoter,Bad)信使核糖核酸(Messenger RNA,mRNA)表达的变化;荧光染料二乙酸-2',7'-二氯荧光素盐(oxalic acid-2',7'-dichlorofluorescein,DCFHDA)分析细胞内总活性氧(ReactiveOxygen Species,ROS)的变化;荧光染料5-氯甲基二已酸荧光素(5-chloromethylfluorescein diacetate,CMFDA)分析细胞内还原型谷胱甘肽(reduced glutathione hormone,GSH)含量的变化。结果:①0.2～1.6 mg.L-1的紫草素对K562细胞增殖呈浓度依赖性抑制;②0.2～0.5 mg.L-1的紫草素处理组细胞出现明显凋亡特征;③0.2～0.5 mg.L-1的紫草素处理组促凋亡蛋白Bid,Bad,Bak,PUMA,Bax的mRNA表达显著增加,抑制凋亡蛋白Bcl-w和Bcl-xL的mRNA表达明显下调;④0.2～0.5 mg.L-1的紫草素处理组,细胞内总活性氧含量升高,还原型谷胱甘肽含量降低。结论:紫草素有较强的抑制K562细胞增殖并诱导其凋亡的作用,该过程伴随细胞内氧化还原状态的改变,紫草素诱导的K562细胞的凋亡与细胞内氧化胁迫有关。
- 冉芳蒋江涛赵虹杨新惠张波王振华郑秋生
- 关键词：紫草素K562细胞凋亡活性氧
- 甘草查尔酮B体外细胞毒作用研究被引量：6
- 2013年
- 为考察甘草查尔酮B(Licochalcone B)对不同肿瘤细胞增殖的抑制作用,初步探讨其作用机制,本研究采用MTT染色法检测甘草查尔酮B对5种肿瘤细胞人乳腺癌细胞(MCF-7)、人膀胱移行细胞癌细胞(T24)、人宫颈癌细胞(HeLa)、高转移性小鼠黑色素瘤细胞(B16F10)、小鼠黑色素瘤细胞(B16F0)的增殖抑制作用;台盼蓝拒染法测定甘草查尔酮B对B16F0细胞的致死率;相差显微镜观察细胞形态;JC-1染色测定线粒体膜电势(△Ψm)。结果表明:甘草查尔酮B(5、7.5、10、12.5、15μg/mL)可浓度依赖性地抑制5种不同肿瘤细胞的增殖,在最高浓度时,抑制率分别为67.52%、67.24%、65.41%、62.81%、68.13%;随甘草查尔酮B处理浓度的增加,B16F0细胞死亡率升高,细胞皱缩,脱落细胞增多;甘草查尔酮B可明显降低B16F0细胞的线粒体膜电势,且呈现浓度依赖性。以上结果显示:甘草查尔酮B对多种肿瘤细胞体外增殖均有明显的抑制作用,这可能与其所致的线粒体损害有关。
- 冉芳杨帆杨新惠王振华张波郑秋生
- 关键词：增殖抑制
