杨国庆
- 作品数：15 被引量：56H指数：3
- 供职机构：河南农业大学生命科学学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金河南省自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生文化科学更多>>
- 猪流行性腹泻病毒coe基因的克隆表达及卵黄抗体的制备被引量：5
- 2018年
- 通过RT-PCR技术扩增猪流行性腹泻病毒(Porcine Epidemic Diarrhea Virus,PEDV)coe基因,将其克隆至原核表达载体p ET32a中,构建重组表达质粒p ET32a-coe,鉴定正确后进行诱导表达。结果表明,重组菌可表达相对分子量约为33 k D的融合蛋白;Western-Blotting结果显示,COE蛋白能与抗PEDV的阳性血清发生特异性结合反应,表明研究的COE蛋白具有良好的反应原性。纯化后的COE蛋白与弗氏佐剂按比率混合作为免疫抗原,免疫产蛋鸡,获得特异性抗猪流性腹泻病毒COE蛋白的卵黄抗体(Ig Y)。氯仿抽提法提取卵黄抗体,通过SDSPAGE、Western-Blotting对提取的卵黄抗体进行鉴定并用间接酶联免疫吸附实验(ELISA)对其进行效价检测。结果显示,纯化后的卵黄抗体Ig Y具有高度的特异性,其抗体效价可达1∶1 000。研究结果表明,表达的COE蛋白具有良好的免疫原性,作为免疫抗原制备的卵黄抗体具有较高的抗体效价。
- 朱文姣常琛朱玉虎周国丽尹志安杨国庆刘慧敏
- 关键词：猪流行性腹泻卵黄抗体
- 板蓝根多糖对缺乳仔鼠十二指肠形态学的影响被引量：2
- 2019年
- 为研究板蓝根多糖对缺乳仔鼠肠道形态的影响,将刚出生的仔鼠,根据不同处理方法分为4组:对照组不做处理,正常饲养;其余3组每天分别灌注0.9%生理盐水、20mg/kg板蓝根多糖、40mg/kg板蓝根多糖.在仔鼠0、7、14、21、28日龄时分别取样.通过大体解剖技术、常规石蜡切片、HE染色等方法,经Moticom成像系统测量不同组别仔鼠十二指肠的绒毛长度和隐窝深度,计算V/C值.结果显示:0~21日龄仔鼠使用中浓度板蓝根多糖灌胃可以使其十二指肠绒毛长度显著性增长,隐窝深度降低,V/C值增大;21~28日龄仔鼠高浓度板蓝根多糖灌胃可使其十二指肠绒毛长度显著性增长,隐窝深度降低,V/C值增大;对照组和0.9%生理盐水灌胃组十二指肠的绒毛长度和隐窝深度变化不大,V/C值亦无明显增大.可得结语,板蓝根多糖可以促进缺初乳仔鼠小肠形态发育,使其十二指肠绒毛长度显著性增长,隐窝深度降低,V/C值增大,且板蓝根多糖对缺初乳仔鼠小肠形态发育的促进作用随其日龄增加而增加.
- 路万平肖传斌杨国庆商艳红
- 关键词：板蓝根多糖仔鼠绒毛长度隐窝深度
- FoxO1在病毒感染和炎症发生中的作用被引量：2
- 2021年
- FoxO1是Foxs家族的成员,该家族大多数为转录因子。FoxO1作为Foxs家族的重要转录因子之一,它不仅具有调控转录的作用,也参与许多生理过程,例如糖代谢、细胞凋亡、脂肪代谢、肌细胞的分化、生殖和肿瘤的发生等。近些年,也有越来越多的研究证实FoxO1在病毒感染和炎症发生等过程也具有重要作用,但其中机制还不清楚。本文主要讲述了几种病毒感染及炎症发生期间,FoxO1在其中发挥的重要作用。
- 张稳稳岳岩磊马振玲姚文杨国庆刘薇
- 关键词：FOXO1转录因子病毒感染
- FoxO1突变体转基因小鼠的建立被引量：1
- 2018年
- 为探究FoxO1对瘦素信号传导的调节机制,本研究构建了重组质粒pEF1α-myc-FoxO1ΔDBD,并将其转染于293Rb细胞,应用Western blotting检测突变体FoxO1ΔDBD的表达;然后采用DNA原核显微注射的方法制备含有突变体FoxO1ΔDBD的转基因小鼠模型,以鼠尾基因组DNA为模板,PCR扩增鉴定基因型;采用实时荧光定量PCR和免疫共沉淀方法检测FoxO1ΔDBD在转录水平和翻译水平的表达,并对FoxO1ΔDBD转基因鼠进行表型分析。结果显示,试验成功构建了重组质粒pEF1α-myc-FoxO1ΔDBD,并在293Rb细胞中检测到了突变体FoxO1ΔDBD的表达,继而获得了10只首建鼠,建立了10个繁育系。试验建立了高G-C含量PCR扩增产物的基因型鉴定方法,并成功地应用于转基因小鼠中。实时荧光定量PCR和免疫共沉淀结果显示,在转录水平和翻译水平上成功地检测出FoxO1ΔDBD的表达,表型分析结果显示,转基因小鼠体重显著低于野生型小鼠(P<0.05),提示瘦素的作用增强。综上所述,本试验成功构建了FoxO1ΔDBD转基因小鼠,为探究FoxO1对瘦素信号传导的调节机制提供研究模型。
- 周国丽李浩路万平徐良杨冉杨国庆
- 关键词：转基因小鼠基因型鉴定瘦素
- Foxo1突变体转基因,ob/ob小鼠建立与表型分析
- 2019年
- Foxo1是瘦素作用的负调控因子,实验室前期工作发现,其突变体Foxo1ΔDBD可导致转基因小鼠体重降低等表现型,本实验旨在研究转基因小鼠此表型与瘦素作用的关系.首先采用ALZET■渗透泵的方法对成年雄性的具有瘦素基因缺陷(ob/ob)小鼠进行10 d的瘦素处理,使其获得生育能力,然后采用动物杂交的方法制备双基因改造鼠,即ob/ob基因遗传背景的Foxo1ΔDBD转基因小鼠(Foxo1ΔDBD/+,ob/ob).经PCR扩增的方法进行基因型鉴定后,对双基因改造鼠的体重、体温等表型进行分析.结果显示:①植入含瘦素溶液的ALZET■渗透泵10 d后的4只雄性ob/ob小鼠全部获得了生育能力.②成功制备了46只双基因改造鼠,39只ob/ob小鼠等.③表型分析结果显示,无ob/ob遗传背景的转基因Foxo1ΔDBD小鼠(Foxo1ΔDBD/+)与野生型小鼠相比,体重显著性降低(P<0.05),棕色脂肪内的UCP1转录水平显著升高(P<0.05);而双基因改造鼠和ob/ob小鼠相比,体重、体温、空腹血糖和采食量均无显著性差异(P>0.05),且UCP1转录水平上的表达也无显著性差异(P>0.05).本实验成功制备了双基因改造鼠,并进行了表型分析,结果表明Foxo1ΔDBD转基因小鼠的体重降低和棕色脂肪UCP1转录升高等表现依赖瘦素的作用。
- 路万平李浩刘慧敏肖传斌杨国庆
- 关键词：转基因小鼠瘦素表型分析
- 抗猪流行性腹泻病毒纳米单链抗体CNC-CBD-scFv的制备及鉴定被引量：3
- 2019年
- 为防治猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV),本文制备纳米化抗PEDV单链抗体(singlechain fragment,scFv)并验证其生物学特性。通过PCR方法扩增含有纤维素结合结构域(cellulose binding domain,CBD)的单链抗体基因CBD-scFv,构建抗PEDV的原核重组表达载体pET19b-CBD-scFv,鉴定正确后进行蛋白表达与鉴定。经硫酸水解法制备纳米纤维素(cellulose nanocrystal,CNC)后,将纯化复性后的CBD-scFv蛋白与CNC孵育结合得到纳米抗体CNC-CBD-scFv,通过SDS-PAGE和透射电镜鉴定复合物的结合效果。SDS-PAGE与Westernblot结果表明抗体蛋白CBD-scFv正确表达;制备的纳米纤维素粒度均达到纳米材料级别;CNC与CBD-scFv结合后SDS-PAGE与透射电镜结果说明CNC与CBD-scFv在室温条件下可高效结合。本试验在高效表达合成复合纳米抗体材料的同时为PEDV的防治及应用奠定了一定的试验基础。
- 刘慧敏李浩朱文娇常琛路万平杨国庆
- 关键词：猪流行性腹泻病毒纳米纤维素
- PK-15细胞的ISG15基因敲除促进PRV的复制被引量：1
- 2022年
- 本试验旨在研究干扰素刺激基因15(interferon-stimulated gene 15,ISG15)敲除对猪伪狂犬病病毒(PRV)复制的影响。通过CRISPR/Cas9技术构建猪ISG 15基因敲除猪肾上皮(PK-15)细胞系,利用CCK-8试剂盒检测PK-15敲除ISG 15基因对细胞活力的影响,采用间接免疫荧光技术检测PK-15以及PK15-ISG15-/-细胞感染PRV的增殖差异,通过RT-qPCR检测PRV-EP 0、PRV-gE、PRV-VP 16和IFN-β的转录水平,Western blot检测PRV-gE和ISG15的蛋白表达水平,以及通过病毒噬斑检测对子代病毒感染力的影响。结果表明,sgRNA1和sgRNA2均成功敲除ISG 15基因;CCK-8试剂盒检测细胞活力结果表明,敲除ISG 15基因对PK-15细胞活力无影响;间接免疫荧光检测结果表明,PRV感染后,PK15-ISG15-/-细胞中的荧光强度明显高于PK-15细胞;RT-qPCR和Western blot结果表明,敲除ISG 15可以促进PRV的转录和蛋白表达;病毒噬斑试验进一步显示,敲除ISG 15可以促进PRV的复制。另外,RT-qPCR结果显示,敲除ISG 15可以抑制PRV感染引起的IFN-β转录上调。本研究成功构建了PK15-ISG15-/-细胞系,并通过PRV感染试验证实ISG 15基因可以抑制PRV在PK-15细胞中的增殖,并推测这种抑制作用可能与IFN通路有关。
- 李琛何文峰赵丽娜凡启杨国庆刘慧敏
- 关键词：ISG15猪伪狂犬病病毒基因敲除
- 高G-C含量突变型Foxo1转基因动物基因型鉴定PCR方法的建立被引量：2
- 2017年
- 为解决因目的基因G-C(鸟嘌呤-胞嘧啶碱基对)含量过高导致的目的基因扩增困难,以及操作过程中多环节引起的DNA污染导致的假阳性问题.本研究以突变型Foxo1(Forkhead转录因子1)转基因小鼠作为对象,就高G-C含量转基因的PCR方法和多个环节避免DNA污染进行了探索,结果显示,实验中消除了PCR的假阴性和假阳性现象,得到了准确的突变型Foxo1转基因小鼠的基因型鉴定结果.
- 张赟周国丽杨冉刘慧敏杨国庆
- 关键词：基因型鉴定转基因小鼠
- 抑制伪狂犬病病毒复制的宿主蛋白的筛选与鉴定被引量：1
- 2023年
- 本试验旨在利用TMT蛋白组学分析并筛选出抑制伪狂犬病病毒(pseudorabies virus, PRV)复制的关键宿主蛋白。前期通过TMT定量蛋白组学技术筛选出241个差异蛋白,Western blot和RT-qPCR验证4个差异表达的蛋白,结果与蛋白组学结果一致,表明蛋白组学结果真实可信。通过构建4个差异表达蛋白的真核表达载体,Western blot、RT-qPCR、病毒噬斑结果显示这4个宿主蛋白均可抑制PRV的复制;然后通过双荧光素报告基因检测IFN-β启动子活性,结果显示,MCCC1、STRAP促进IFN-β启动子活性效果更为显著;针对MCCC1和STRAP设计siRNA,Western blot和病毒噬斑结果显示,敲低STRAP显著促进PRV的复制。本试验最终筛选出显著影响PRV复制的宿主蛋白STRAP,为研究PRV与宿主互作的分子机制奠定基础。
- 何文峰李琛常洪涛李隆熙陈静杨国庆刘慧敏
- 关键词：蛋白组学伪狂犬病病毒差异蛋白STRAP
- 柠檬醛对小鼠生长性能、肌内脂肪含量及脂肪酸代谢酶的影响被引量：6
- 2021年
- 本试验目的是探究柠檬醛对小鼠生长性能、肌内脂肪(Intramuscular fat,IMF)含量,调控IMF关键基因及脂肪酸代谢酶的影响。选取40只5周龄雄性小鼠,随机分为对照组和试验组,对照组饲喂基础饲料,试验组在基础饲料中添加3.5%的柠檬醛,经过7 d试验环境适应后,饲喂期维持18 d。结果表明,与对照组相比,1)试验组小鼠生长速度显著加快,采食量无显著差异;2)股四头肌IMF含量显著升高(P<0.05),同时与IMF沉积相关基因脂肪酸结合蛋白(A-FABP)(P<0.05)、过氧化物酶体增殖物激活受体PPARα(P<0.01)、PPARγ(P<0.05)转录和翻译水平显著上升;3)脂肪酸合成代谢酶基因FASN、ACC的转录水平显著升高(P<0.05),分解代谢酶基因CPT-1、ACOX1、AMPK的转录水平显著下降(P<0.05)。
- 陈静尤瑞国刘慧敏杨国庆
- 关键词：柠檬醛小鼠肌内脂肪脂肪酸结合蛋白
