李鸣
- 作品数：1 被引量：2H指数：1
- 供职机构：华中科技大学同济医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- FADD缺失突变重组体转染的人β胰岛细胞株的建立及其生物学特性的研究被引量：2
- 2001年
- 目的 建立Fas相关死亡域 (FADD)缺失突变体的表达细胞系 ,阻断Fas死亡信号传导 ,以便今后更深入的探讨通过基因水平修饰靶细胞 ,改变靶细胞的反应状态 ,对移植免疫和自身免疫性疾病的可能的影响。方法 用RT PCR从感染患者外周血淋巴细胞中获得缺失FADD死亡域目的基因片段 (FADDdel) ,利用双酶切将FADDdel定向导入真核表达载体pUC pIC ;用电穿孔法将重组子导入人 β胰岛细胞株 (NIT)中 ,采用FACS法检测sFasL所引起的转染前后NIT凋亡情况。同时在In ternet中通过计算机数字化分子模型技术 ,成功模建FADDdel的 3D结构并与FADD的立体结构进行比较与分析。结果 RT PCR法得到约 5 0 0bp的目的基因片段 ,转化子用BglⅡ ,XbaⅠ酶切后得到 3个特异性片段 ,经酶切和测序鉴定为FADD缺失突变的重组体 (pFADDdel)。将pFADDdel导入NIT后 ,筛选出高表达细胞系F15 ,在IFN γ和TNF α存在时F15仍能有效拮抗sFasL诱导的凋亡 ;并对FADD和FADDdel功能结合域和结合位点分析 ,阐明了FADDdel蛋白质分子在阻断细胞凋亡胞内信号传导通路的分子机制。结论 成功建立了FADDdel稳定表达的人胰岛细胞株 ;pFADDdel能有效抑制Fas和TNFR1介导的胞内凋亡信号通路 ;
- 周华蓉李鸣张悦周新荣沈关心
- 关键词：移植免疫自身免疫性疾病
