李志刚
- 作品数：8 被引量：8H指数：2
- 供职机构：中山大学附属第三医院更多>>
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- 长期培养的大鼠原代肝细胞功能和形态学观察
- 目的研究大鼠原代肝细胞长期体外培养后功能和形态的变化。方法采用两步胶原酶原位灌流法分离大鼠肝细胞,并用Percoll分离液进行密度梯度离心进一步纯化肝细胞,采用0．4％台盼蓝染色观察细胞活力。然后将细胞接种于Hepato...
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- 文献传递
- HBV X／GFP融合蛋白的构建表达及对UV诱导的细胞凋亡的抑制
- 目的建立稳定表达人乙型肝炎病毒(HBV)X／GFP融合蛋白的HepG2细胞系,并探讨HBV X蛋白对细胞凋亡及细胞信号通路的影响。方法应用HindⅢ和ApaⅠ双酶切HBV X表达载体pHBx以获取 HBV X基因片段,并...
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- 文献传递
- HBV S基因、PreS2/S基因真核重组载体的构建与鉴定被引量：3
- 2004年
- [目的]构建包含人乙型肝炎病毒(HBV)S基因与PreS2／S基因的重组载体。[方法]设计合成2对寡核苷酸引 物,以adr亚型HBV质粒pHBV DNA为模板,采用PCR法分别扩增HBV S基因、PreS2／S基因片段;用HindⅢ和BamHⅠ双酶 切后,分别连接到质粒pcDNA3.1相应酶切位点,转化宿主菌JM109,分别用上述内切酶双酶切及DNA测序鉴定重组质粒。 [结果]酶切鉴定示所切下的片段大小均与预计相符。测序结果与文献报道序列及预计结果一致。[结论]成功构建了S基因与 PreS2／S基因的重组载体。
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- 关键词：S基因HBV质粒真核酶切位点DNA测序
- HBV大分子表面蛋白基因真核重组载体的构建和体外表达的初步研究
- 目的探索HBV大分子表面蛋白基因（preS1/S2/S基因）真核重组载体在细胞中的表达及对细胞丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）p38等信号传导通路的影响.方法设计合成2对寡核苷酸引物,以adr亚型HBV质粒pHBV DNA...
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- 关键词：肝炎病毒乙型丝裂原活化蛋白激酶
- 长期培养的大鼠原代肝细胞功能和形态学观察
- 目的研究大鼠原代肝细胞长期体外培养后功能和形态的变化.方法采用两步胶原酶原位灌流法分离大鼠肝细胞,并用Percoll分离液进行密度梯度离心进一步纯化肝细胞,采用0.4%台盼蓝染色观察细胞活力.然后将细胞接种于Hepato...
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- 关键词：肝细胞细胞培养
- HBV转录激活蛋白HBx、MHBs^(t78)MHBs^(t155)真核重组载体构建
- 2004年
- 目的分别构建人乙型肝炎病毒(HBV)X蛋白、羧基端截断的中分子表面蛋白MHBst78、MHBst155编码基因的真核重组表达载体,以便进一步研究其转录激活功能及对宿主细胞信号传导通路的影响。方法设计合成3对寡核苷酸引物,以adr亚型HBV质粒pHBVDNA为模板,采用PCR法分别扩增HBVX基因、MHBst78与MHBst155编码基因片段;用HindⅢ,KpnⅠ双酶切HBVⅩ基因;用HindⅢ和BamHⅠ双酶切MHBst78与MHBst155编码基因片段后,分别定向插入到真核表达载体pcDNA3.1相应酶切位点,转化宿主菌JM109,提取质粒,分别用上述内切酶酶切及DNA测序鉴定重组质粒。结果酶切重组体显示所切下的片段大小均与预计相符,测序结果与文献报道序列及预计结果一致。结论成功构建了HBVX基因、羧基端截断的HBV中分子表面蛋白MHBst78、MHBst155编码基因的真核重组表达载体,为进一步研究HBV转录激活蛋白HBx、MHBst78MHBst155对宿主细胞信号转导通路的影响奠定基础。
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- 关键词：X蛋白真核表达载体PCDNA3.1
- HBV大分子表面蛋白基因真核重组载体的构建与鉴定被引量：1
- 2005年
- 目的构建包含人乙型肝炎病毒(HBV)大分子表面蛋白基因的重组载体,以便进一步研究其基因免疫以及对宿主细胞丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)p38等信号传导通路的影响。方法设计合成2对寡核苷酸引物,以adr亚型HBV质粒pHBVDNA为模板,采用PCR法分别扩增HBV大分子表面蛋白基因(preS1/S2/S基因)片段;用HindⅢ和BamHI双酶切后,连接到质粒pcDNA3.1(+)相应酶切位点,转化宿主菌DH5α,分别用上述内切酶双酶切及DNA测序鉴定重组质粒。结果酶切鉴定示所切下的片段大小均与预计相符。测序结果与文献报道序列及预计结果一致。结论成功构建了HBV大分子表面蛋白基因的重组载体。
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- 关键词：乙型肝炎病毒
- 长期培养的大鼠原代肝细胞功能和形态学观察被引量：4
- 2005年
- 目的研究大鼠原代肝细胞长期体外培养后功能和形态的变化。方法采用两步胶原酶原位灌流法分离大鼠肝细胞,并用Percoll分离液进行密度梯度离心进一步纯化肝细胞,采用0.4%台盼蓝染色观察细胞活力。然后将细胞接种于HepatoZYME-SFM培养基中培养,定期收集肝细胞培养液上清检测丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、白蛋白、尿素氮的水平。采用乙氧基试卤灵O-脱乙基酶活性(EROD)方法检测肝细胞P450的CYPⅠA1功能。结果新鲜分离的大鼠肝细胞总数(2-3)×108cells/wholeliver,Percoll分离液纯化后活力和纯度在90%以上。HepatoZYME-SFM培养下肝细胞生长良好并保持正常形态。AST、ALT水平在培养3d后下降显著,6-9d后趋于相对稳定的低水平。白蛋白的分泌功能、尿素合成能力在18d内维持在较高水平。可在3-6d检测到CYPⅠA1酶活性。结论Percoll液纯化新分离肝细胞可提高其活率和纯度,HepatoZYME-SFM培养条件下肝细胞可有效保持良好形态结构和一定的生物合成代谢能力,适合肝细胞的体外长期培养和功能研究。
- 庄鹏江元森马会慧李志刚麦丽杨林姚集鲁
- 关键词：肝细胞细胞培养
