李富祥
- 作品数：70 被引量：190H指数：7
- 供职机构：云南省热带亚热带动物病毒病重点实验室更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金云南省农业科技创新工程项目云南省现代农业生猪产业技术体系建设项目更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生轻工技术与工程化学工程更多>>
- 奶牛源反刍动物链球菌的分离鉴定及致病性研究
- 2025年
- 为了鉴定云南省某养殖场患呼吸道疾病奶牛的细菌性病原,本研究将2份奶牛鼻腔拭子样品接种含5%牛血清的营养琼脂,并观察分离菌的菌落形态和经革兰氏染色特性,结果显示分离到2株革兰氏阳性链状球菌YN240515和YN240516。采用Rapid ID32 STREP kit对2株分离菌进行生化鉴定,采用PCR扩增分离菌16S rDNA基因序列并测序,采用MegAlign软件分析16S rDNA基因序列的同源性,采用MEGA软件构建16S rDNA基因序列的遗传进化树并分析2株分离菌的遗传进化特征,采用小鼠腹腔接种方法分析2株分离菌的致病性,采用纸片琼脂扩散法测定2株分离菌对8大类14种抗菌药物的敏感性。细菌的生化、16S rDNA基因序列同源性和遗传进化鉴定结果显示,2株分离菌生化特征与反刍动物链球菌(Streptococcus ruminantium)模式菌株DSM104980T以及其他链球菌参考株基本一致。分离菌YN240515和YN240516与S.ruminantium DSM104980T 16S rDNA基因序列的同源性分别为100%和99.9%,与其他S.ruminantium参考株16S rDNA基因序列的同源性为98.8%~100%。2株分离菌在16S rDNA基因序列遗传进化树中与全部S.ruminantium参考株形成同一进化分支。基于上述特征,将2株分离菌鉴定为S.ruminantium。致病性实验结果显示,2株分离菌以4.0×107 cfu经腹腔接种小鼠均能导致小鼠100%死亡率,对小鼠的致病性均较强。药敏试验结果显示,2株分离菌均对青霉素类的青霉素和阿莫西林-克拉维酸以及头孢菌素类的头孢噻吩和头孢曲松等7种抗菌药物敏感,对氨基糖苷类的链霉素和卡那霉素等5种抗菌药物耐药。本研究是国内首次从患呼吸道综合征的奶牛中分离到S.ruminantium,证实我国奶牛存在S.ruminantium的感染,为我国奶牛S.ruminantium感染的防治提供基础数据。
- 李富祥高华峰赵文华
- 关键词：奶牛
- 云南省库蠓源蓝舌病病毒16型的分离鉴定
- 2025年
- 为了解云南省部分地区库蠓源蓝舌病病毒(BTV)流行情况,本试验于2023年7—10月分别从云南省昆明市宜良县和保山市龙陵县采集昆虫样品进行种属鉴定和虫媒病毒分离鉴定。基于昆虫的线粒体细胞色素氧化酶亚基Ⅰ(COⅠ)基因序列进行BLAST序列比对和种属鉴定。通过反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测、病毒分离培养、间接免疫荧光试验和病毒毒价测定对所获得的虫媒病毒进行分离和鉴定,以及遗传进化分析。结果显示,采集的昆虫样品分别属于尖音库蚊、隐匿库蠓、拜氏铗蠓和蠓科。其中,采自云南省保山市龙陵县的样品RT-PCR检测结果为BTV阳性,经BHK-21细胞连续传代培养,得到1株BTV分离株;间接免疫荧光试验结果显示,分离株能与BTV-16标准阳性血清发生特异性反应,初步确定该分离株为BTV-16,将其命名为YNLL-BTV16-2023,其毒价为10-5.1/0.1 mL。遗传进化分析结果显示,分离株VP2基因序列与2株日本分离株基因序列(GenBank登录号:LC586239.1和AB686220.1)核苷酸同源性最高,分别为97.20%和96.87%,VP3基因序列与中国云南省分离株VP3基因序列(GenBank登录号:MG564322.1)核苷酸同源性为99.26%,VP5基因序列与日本分离株(GenBank登录号:AB686236.1)核苷酸同源性为97.77%,VP7基因序列与2株中国分离株(GenBank登录号:AF172831.1和KT002584.1)核苷酸同源性均为98.80%。结果表明,云南省保山市龙陵县边境地区存在BTV-16毒株,该血清型病毒可通过隐匿库蠓携带。本试验为云南省边境地区BTV及其传播媒介的分布提供参考。
- 付嘉佳李富祥王金萍何于雯谢佳芮高华峰李小兵
- 关键词：遗传进化分析
- 牛结核病两种活体诊断方法检测结合病原学诊断的研究被引量：4
- 2012年
- 本文报道应用两种活体诊断方法检测牛结核病的试验结果。2010～2011年度,应用PPD皮内变态反应方法分3批次对5156头奶牛和奶水牛实施监测,监测阳性数57头,阳性率1.11%。采集该57头牛抗凝全血,应用γ-干扰素酶联免疫吸附试验进行检测,检出阳性样品3份,阳性率5.26%。对14头第一批PPD皮内变态反应阳性牛进行病理检验和进行细菌分离培养和PCR检测,结果3份样品分离培养呈阳性,其中1份PCR鉴定为结核分枝杆菌,2份为非分枝杆菌。PCR方法检测的14份组织样品中,2份为结核分枝杆菌阳性,1份为牛结核分枝杆菌阳性。结合病理剖检和病原PCR诊断,分析比较PPD皮内变态反应试验和γ-干扰素酶联免疫吸附试验的敏感性和特异性,由于PPD纯度、非特异性反应、结果判定的主观性等因素,导致PPD皮内变态反应监测检出假阳性率较高。
- 王秀琼王秀琼李富祥赵文华王金萍
- 关键词：牛结核病PPD试验PCR鉴定
- 高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒云南株的分离鉴定及遗传变异分析
- 2023年
- 2018年云南省边境地区某猪场猪群出现高热等症状,部分猪只死亡。为确认发病原因,采集死亡猪只肺脏组织样品进行猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)RT-PCR检测,然后将阳性样品接种Marc-145细胞,连续传代3次后发现产生稳定的细胞病变效应(CPE)。经间接免疫荧光试验(IFA)、毒价测定及病毒全基因组测序,最终确定病原为PRRSV,将其命名为YNML-2018株,毒价测定为10-4.88 TCID50/0.1 mL。全基因组序列分析显示,YNML-2018毒株基因组全长15357 bp,包含8个开放阅读框(ORF),其中非结构蛋白2编码基因(NSP2)缺失90个碱基。病毒全基因组遗传进化分析显示,该毒株序列与国内分离的高致病性PRRSV同源性为95.3%~99.3%;其NSP2高变区序列与国内分离的高致病性PRRSV同源性为92.1%~97.8%;结构蛋白GP3、GP5氨基酸序列与国内分离的高致病性PRRSV毒株同源性分别为84.3%~99.6%和83.1%~99.0%。结果表明,YNML-2018株与近年来我国PRRSV流行株相比存在一定变异,但变异程度较低,仍与首次报道的高致病性毒株JXA1同属于亚群V。本研究为掌握云南省边境地区PRRSV流行毒株的遗传变异特征提供了技术支撑,并可为疫苗选用提供数据参考。
- 王金萍付嘉佳李富祥何于雯宋建领高华峰
- 关键词：高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒
- 副猪嗜血杆菌的分离鉴定及16S rRNA序列分析被引量：11
- 2012年
- 从云南某规模化养猪场病猪肺脏分离到1株革兰氏阴性小杆菌,经细菌生化鉴定、PCR鉴定和16S rRNA序列比对鉴定为副猪嗜血杆菌。抗生素药物敏感试验结果表明,分离菌株对四环素、红霉素、氯霉素、头孢噻吩高敏;对庆大霉素、氧氟沙星、诺氟沙星中敏;对磺胺甲唑耐药。16S rRNA分析结果表明,该分离株与GenBank中的Hps参考株AB078973(基因登录号)同源性为100%,将分离菌株鉴定为副猪嗜血杆菌。16S rRNA遗传进化关系表明,分离株与副猪嗜血杆菌3株血清5型参考株AB078972、AB078973、AB078974的16S rRNA序列位于一个分支上,遗传进化关系最近,它们之间的核苷酸同源性在99.0%～99.4%之间,初步鉴定为血清5型副猪嗜血杆菌,致病性试验结果表明,分离菌株对小白鼠有强致病性,命名为YN-1株。
- 李富祥李华春宋建领杨仕标朱建波廖德芳姚俊高华峰
- 关键词：副猪嗜血杆菌RRNA
- 2017-2019年云南边境地区PPRV/RVFV/SBV血清学监测研究被引量：1
- 2020年
- 为了解云南边境地区PPRV/RVFV/SBV三种外来动物疫病血清学流行状况,2017—2019年自芒市、陇川县、瑞丽市、盈江县、腾冲市、普洱市以及嵩明县采集牛、羊及猪血清样品共计2381份,用购买的PPRV/RVFV/SBV进口ELISA检测试剂盒进行相应抗体检测。检测结果显示:牛、羊、猪血清中均未检测到RVFV/SBV抗体阳性血清;牛、羊血清中检测到PPRV抗体,其中羊血清中总体PPRV抗体阳性率为38.36%;牛血清中总体PPRV抗体阳性率为1.18%。
- 赵文华李富祥杨仕标
- 关键词：小反刍兽疫病毒施马伦贝格病毒抗体检测阳性率
- 大理市腹泻犊牛粪便中细菌的分离鉴定及致病性分析
- 2024年
- 为调查云南大理市某牛场犊牛腹泻与粪便中细菌的相关性,从5份粪便中分离到5株细菌分离株(YN240264~YN240268),对5株细菌分离株进行16S rDNA基因序列分析鉴定并分析其致病性、药物敏感性和耐药基因特征。16S rDNA基因同源性鉴定结果显示,分离株YN240264与费氏志贺氏菌模式菌株ATCC 29903^(T)的同源性为99.7%,鉴定为费氏志贺氏菌。分离株YN240265~YN240268与大肠杆菌模式菌株ATCC 11775^(T)的同源性为99.4%~99.9%,鉴定为大肠杆菌。致病性实验结果显示,5株细菌分离株腹腔接种2.4×10^(6) cfu菌液均可导致小鼠死亡,病死率为80%~100%,费氏志贺氏菌YN240264能导致小鼠出现神经症状和严重的肝脏坏死。5株细菌分离株均对头孢哌酮和诺氟沙星敏感,对青霉素、链霉素和红霉素耐药。耐药基因PCR检测结果显示,5株细菌分离株中检测到了磺胺类耐药基因sul1、sul2和sul3,氨基糖苷类耐药基因aadA1和aadA2,β-内酰胺酶类耐药基因blaTEM,四环素类耐药基因tetA和tetB,喹诺酮类耐药基因qnrS以及氯霉素类耐药基因floR。研究结果表明:分离到的费氏志贺氏菌和大肠杆菌对小鼠具有强致病性,是该起犊牛腹泻的致病菌,其耐药性和耐药基因特征为大理市犊牛腹泻的治疗和预防提供参考依据。
- 李富祥赵文华高华峰宋建领
- 关键词：犊牛腹泻耐药基因
- 副鸡嗜血杆菌的分离鉴定及16SrRNA序列分析被引量：12
- 2012年
- 从云南省和四川省规模化养鸡场鸡传染性鼻炎疑似病例鸡鼻窦分离到2株革兰氏阴性小杆菌,并对其进行生化鉴定、PCR鉴定和16SrRNA序列比对鉴定。16SrRNA分析表明两分离株与GenBank中的其他副鸡嗜血杆菌（Haemophilus paragallinarum,HPg）参考株核苷酸同源性为94.2%~99.2%。两分离菌株鉴定为副鸡嗜血杆菌,分别命名为YNAN20120110和SCPZH20120120株。16SrRNA遗传进化关系表明：分离株与NAD非依赖型副鸡嗜血杆菌血清A型代表株GU951543（HP105strain）的16SrRNA序列位于一个分支上,遗传进化关系最近,它们之间的核苷酸同源性为99.2%;与副鸡嗜血杆菌血清A型参考株AY498867（0083株）核苷酸同源性为96.9%。致病性实验表明分离菌株对成年产蛋鸡有强致病性。抗生素药物敏感试验表明：分离菌株对头孢吡肟、头孢噻吩、氯霉素、卡那霉素和氧氟沙星高敏,对四环素中敏,对磺胺甲唑耐药。
- 李富祥李华春许琳覃袖伟杨仕标朱建波
- 关键词：副鸡嗜血杆菌
- 抗龋齿变形链球菌表面蛋白PAc复合抗原制备及奶牛免疫
- 变形链球菌(S.mutans)是引起龋齿的主要致病菌,其表面蛋白PAc复合抗原与其它型的S.mutans,及人的心肌交叉抗原无交叉反应,因此PAc作为检测和免疫抗原对龋齿有重要的意义。本文对S.mutans表面蛋白pac...
- 杜小刚李富祥张以芳
- 关键词：抗原制备PAC变形链球菌
- 羊口疮病毒SYBR GreenⅠ染料法实时荧光定量PCR的建立及运用被引量：6
- 2013年
- 为了建立一种特异、灵敏、快速、重复性好和检测成本低的羊口疮病毒检测方法,试验根据GenBank中羊口疮病毒(登录号为AY386264)ORFVgORF102基因DNA序列,应用Beacon Designer7.0软件设计、合成了1对SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR引物。结果表明:经反应条件优化后,建立了羊口疮病毒SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR,最佳引物浓度为400 nmol/L,最佳模板浓度为3.61～36.1 ng/μL或2.385×107～2.385×108copies/μL;该方法组内及组间变异系数均小于2%,检测灵敏度可达到3.61 pg/μL或2.385×104copies/μL,上机检测时间不超过1 h;运用该方法对2份临床样品进行定量检测,样品抽提DNA中病毒拷贝数分别为1.4×109copies/μL和8.7×108copies/μL。说明试验所建立的羊口疮病毒SYBR Green I实时荧光定量PCR具有特异、灵敏、快速、重复性好和检测成本低等优点,适合于羊口疮病毒临床样品的检测。
- 姚俊彭海生鲁富有张乔明李富祥李华春
- 关键词：羊口疮病毒SYBR实时荧光定量PCR
