李俊平
- 作品数：145 被引量：238H指数：9
- 供职机构：中国兽医药品监察所更多>>
- 发文基金：国家科技基础性工作专项山西省自然科学基金国家科技支撑计划更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生生物学文化科学更多>>
- 新城疫弱毒疫苗La Sota株对血清4型禽腺病毒致病作用的影响研究被引量：2
- 2020年
- Ⅰ群血清4型禽腺病毒(FAdV-4)是常见的家禽垂直传播性病毒,感染鸡后可导致心包积液综合征。在生产中,先天感染FAdV-4的雏鸡免疫La Sota疫苗时会明显加重病情,因此我们推测新城疫弱毒疫苗的免疫具有加重或诱发和垂直传播感染的FAdV-4的致病作用。本研究随机选择50枚SPF鸡胚通过卵黄囊接种来模拟FAdV-4先天性感染,同时以接种生理盐水SPF鸡胚作为对照。待孵化出雏后,接毒组和对照组各取20只7日龄SPF鸡免疫新城疫Ⅳ系弱毒疫苗(La Sota株),同时各组其余鸡以相同方式接种等量PBS作为对照。结果显示:FAdV-4感染的雏鸡在免疫La Sota株后更容易发生严重的生长抑制和免疫器官损伤,说明免疫La Sota株能显著增强FAdV-4致病性。本研究结果显示,免疫弱毒疫苗La Sota增强了垂直传播感染的FAdV-4致病性,提示家禽养殖业种源净化的重要性。
- 柳晓锋侯力丹马晓玲甄岳张亚文张智慧苏奇常爽崔治中李俊平赵鹏
- 关键词：禽腺病毒致病作用
- 不同处理方式对外源病毒检测中FAdV-I检出限量的影响
- 2022年
- 据报道Ⅰ群禽腺病毒(FAdV-I)在禽活疫苗中的污染是其可能的传播途径之一,加强对活疫苗中FAdV-I检测至关重要。为探索建立FAdV-I检测标准,本研究参照《中华人民共和国兽药典》中外源病毒检测相关疫苗处理措施,对不同方式处理后FAdV-I检测的影响进行了摸索。结果显示:当离心力不大于8000×g时,4℃离心10 min不会引起FAdV-I病毒含量下降,10000×g和12000×g分别离心10 min,病毒含量分别下降50%和68%,8000×g离心后再经0.45、0.22μm滤膜各滤过一次,病毒含量下降68%;8000×g离心后0.45、0.22、0.1μm滤膜各滤过1次后,病毒含量下降90%,12000×g离心后0.45、0.22、0.1μm滤膜各滤过1次后,病毒含量下降95%;SPF鸡血清及检验中常用的抗血清中和疫苗过程中在4℃或37℃作用1 h均不会引起FAdV-I病毒含量降低。上述指标为疫苗中FAdV-I污染的检测方法建立提供了参考数据。
- 侯力丹刘丹刘丹薛麒翟天舒李俊平李俊平陈晓春
- 关键词：活疫苗外源病毒
- 传染性法氏囊病病毒BC6/85株全基因组克隆及其序列分析
- 以传染性法氏囊病病毒(IBDV)BC6／85株基因组RNA为模板，采用RT-PCR方法扩增并克隆了IBDV BC6／85株基因组全长cDNA。序列测定结果表明：A节段全长共3260个核苷酸，与IM株的同源性最高为97.4...
- 于雷杨承槐李俊平李启红刘丹黄建华李慧姣
- 关键词：传染性法氏囊病病毒基因克隆
- 鸭瘟病毒强毒株在感染鸭体内的动态分布研究
- 为了研究鸭瘟强毒CSC株在感染鸭胸腺、脾脏、法氏囊、心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、胰腺、十二指肠、回肠、盲肠、结肠、直肠、大脑、三又神经节、血清和泄殖腔拭子中的动态分布规律,根据Gene Bank中鸭瘟CSC株的gD基因...
- 文晶亮李俊平李启红李岭孙淼李慧姣杨承槐夏业才
- 关键词：实时荧光定量PCR
- 表达绿色荧光蛋白重组鸭肠炎病毒构建被引量：3
- 2016年
- 【目的】鸭肠炎病毒(duck enteritis virus,DEV)不同毒株间存在明显差异,DEV疫苗株的UL2基因在195bp后连续缺失528bp,导致第65位氨基酸后连续缺失176aa^([1])。将绿色荧光蛋白(GFP)基因插入DEV UL2基因中,获得表达绿色荧光蛋白的重组病毒,以研究UL2基因对DEV生物特性的影响和探讨DEV作为载体表达外源基因的可行性。【方法】以实验室保存的DEV细胞适应株DNA为模板,利用PCR技术扩增出病毒UL2基因上下游序列并克隆入pMD-18T载体;以UL2基因作为外源基因插入靶点及同源重组臂,将CMV启动子控制的含有GFP-gpt基因表达盒克隆入DEV UL2基因中,构建含GFP基因的转移质粒载体pT-UL2-GFP-gpt;用脂质体将其与DEV细胞适应株共转染CEF细胞,待80%细胞出现病变后,冻融3次,接种到新鲜CEF细胞单层的6孔培养板中,用含5%血清、1%双抗、1%琼脂的M199培养液覆盖,在荧光显微镜下挑取单个有绿色荧光的蚀斑,再接到新的细胞上,重复蚀斑筛选、纯化表达绿色荧光蛋白的重组病毒;利用PCR、基因测序技术鉴定重组病毒;重组病毒接种CEF(moi=0.01),每12h取出1瓶接毒细胞,分别收集上清和细胞,测量其病毒含量,绘制一步生长曲线;重组病毒在CEF中连续传代20次,在荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白表达情况,并用PCR检测GFP的传代稳定性;重组病毒免疫4周龄SPF鸭后14d,肌肉注射接种DEV强毒(CVCC AV1221),观察免疫保护情况。【结果】经双酶切鉴定,成功构建了含绿色荧光蛋白报告基因的转移质粒载体p T-UL2-GFP-gpt,将其与DEV共转染CEF细胞后8h,即可见转染细胞中有带有绿色荧光的梭形细胞,经过8轮蚀斑筛选,获得纯化的重组病毒rDEV-△UL2-GFP-gpt;PCR鉴定及基因测序结果显示,GFP标记基因成功地插入到DEV基因组中,替换了DEV UL2基因的196—723位核苷酸;一步生长曲线结果显示,重组病毒在细胞和上清中的病毒含量分别在36h和72h达到峰值,为10^(6.
- 孙莹李俊平黄小洁李岭曹明慧李启红李慧姣杨承槐
- 关键词：鸭肠炎病毒绿色荧光蛋白重组病毒
- BHK-21细胞全悬浮培养技术在新城疫疫苗生产中的应用
- 本发明涉及BHK-21细胞全悬浮培养技术在新城疫疫苗生产中的应用。本发明公开的BHK-21细胞全悬浮培养生产新城疫疫苗的工艺包括以下步骤：(1)病毒株选育：鸡胚培养的新城疫疫苗种毒接种单层BHK-21细胞，加入病毒维持液...
- 吴华伟陈晓春高艳春郎洪武邓永李俊平李慧姣夏业才
- 文献传递
- B型副鸡禽杆菌田间分离株的毒力及免疫原性研究被引量：2
- 2022年
- 为探索分离自安徽省某大型白羽鸡场的1株B型副鸡禽杆菌的毒力及免疫原性,本试验测定了该菌对5~6胚龄SPF鸡胚及35~40日龄SPF鸡的毒力,并用该菌株制备免疫原,免疫35~40日龄SPF鸡,用攻毒的方法测定菌株的免疫原性,同时对本菌株制备的抗原及目前国内、国外市场上销售的鸡传染性鼻炎A型、B型、C型三价或二价灭活疫苗的免疫效力进行比较。毒力试验结果显示,本菌株对SPF鸡胚的最小致死剂量为110 CFU,对SPF鸡的最小发病剂量为5.5×10^(3) CFU。免疫原性试验结果显示,本菌株制备的抗原免疫鸡能有效抵抗本菌株的攻击,说明本菌株的免疫原性良好,而市场上销售的鸡传染性鼻炎三价/二价灭活疫苗免疫鸡均无法抵抗本菌株的攻击,说明市场上销售的疫苗对本菌株的保护效果较差,B型菌疫苗间的交叉保护效果不理想。本试验为B型鸡传染性鼻炎疫苗的研究提供参考和物质基础。
- 王秀丽于永于雷李旭妮蒋玉文辛凌翔张媛李俊平
- 关键词：副鸡禽杆菌毒力免疫原性疫苗
- 一种串联优势表位的重组猪丹毒杆菌表面保护抗原A及其应用
- 本发明属于生物技术领域，具体涉及一种串联优势表位的重组猪丹毒杆菌表面保护抗原A(surface protective antigen A，SpaA)及其应用。该串联优势表位的重组猪丹毒杆菌表面保护抗原A的氨基酸序列如SE...
- 李建张一帜张媛李俊平王秀丽刘元杰李旭妮王甲彭国瑞
- A型塞内卡病毒VP2蛋白多克隆抗体的制备及间接ELISA检测方法的建立
- 2024年
- [目的]制备A型塞内卡病毒(Senecavirus A,SVA)VP2蛋白多克隆抗体,建立检测SVA抗体的间接ELISA方法,以期为SVA致病机制及诊断提供研究基础。[方法]利用同源重组技术将VP2基因克隆至原核表达载体pET-28a中,构建重组表达质粒pET-28a-VP2,并转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞进行IPTG诱导表达,表达产物经纯化后皮下多点注射新西兰大白兔制备多克隆抗体。利用间接免疫荧光试验(IFA)、Western blotting和中和试验鉴定多克隆抗体的特异性、反应性和中和活性。以VP2为抗原包被酶标板,通过矩阵优化、临界值确定、特异性鉴定及敏感性和重复性分析建立检测SVA抗体的间接ELISA方法。采集50份临床血清样品,分别用间接ELISA与IFA方法进行检测,分析间接ELISA方法的符合率。[结果]重组VP2蛋白以包涵体形式表达,大小为40 ku。制备的多克隆抗体能与重组VP2蛋白和SVA特异性结合,与其他病毒无交叉反应,且具有较高的中和活性。经对间接ELISA条件的优化,确定VP2包被浓度为4μg/mL,阳性血清稀释浓度为1∶250,封闭液为5%脱脂乳+5%BSA,血清样品和二抗孵育时间均为90 min, TMB底物反应时间为10 min,临界值为0.182。建立的间接ELISA方法与常见的猪病毒阳性血清不反应,与IFA符合率达94.0%。[结论]原核表达系统表达的VP2蛋白具有良好的免疫原性,制备的多克隆抗体能与SVA和VP2发生特异性反应。建立的间接ELISA方法特异性高,与IFA符合率高,适用于临床SVA抗体检测和疫苗效力评价。
- 任建乐林铱婷姬康谭姗姗陈新新晋怡王颖牛胜梁立滨李俊平赵宇军田文霞
- 关键词：VP2蛋白多克隆抗体间接ELISA
- 鸡马立克病活疫苗中污染禽网状内皮组织增生症病毒检测方法的建立被引量：4
- 2014年
- 为建立鸡马立克病(MD)活疫苗中污染禽网状内皮组织增生症病毒(REV)的间接免疫荧光检测方法,本研究通过向MD活疫苗中添加不同剂量的REV,用拟定的方法对样品检测REV。结果表明,Ⅰ型MD活疫苗、火鸡疱疹病毒活疫苗(Fc-126株)和MD二价活疫苗(HVT+CVI988株)中污染REV的最低检出量分别为每500羽份疫苗中污染5TCID50、10TCID50和15TCID50的REV。应用建立的方法对国内10家企业生产的43批MD活疫苗进行了检验,结果显示,2个企业生产的4批疫苗REV检测阳性。随机选取了5批IFA检测阴性样品和4批IFA检测阳性样品,按鸡检查法进行外源病毒检验,结果两种方法对REV污染检验结果的符合率为100%。因此,本研究建立的IFA法可替代鸡检查法,用于疫苗中REV污染的检验。
- 李启红杨承槐刘丹夏业才李慧姣李俊平
