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徐沙: 作品数：21 被引量：44H指数：5; 供职机构：江南大学生物工程学院更多>>; 发文基金：国家自然科学基金教育部科学技术研究重大项目江苏省科技厅基金更多>>; 相关领域：轻工技术与工程化学工程生物学医药卫生更多>>

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酿酒酵母糖基化缺陷型菌株中ALG6基因的过量表达: 2015年; 利用酿酒酵母生产人源化糖蛋白,需对其糖基化途径进行基因工程改造。酿酒酵母糖基化相关基因ALG3、OCH1、MNN1的敲除导致胞内糖蛋白低的N-聚糖位点占有率和菌株缓慢的生长速度。为了提高糖基化缺陷型菌株的N-聚糖位点占有率,酿酒酵母的ALG6基因被过量表达。结果表明,ALG6的过量表达不仅能够提高菌株N-聚糖位点占有率,还能回补其生长速度,提高外源蛋白人类溶菌酶的分泌效果。; 张阁元徐沙高晓冬中西秀树; 关键词：酿酒酵母人源化糖蛋白

番茄红素合成基因组合优化和产物测定: 2020年; 番茄红素(lycopene)是一种抗氧化性较强的天然色素,已广泛应用于食品、保健品及化妆品等领域。该研究首先在酿酒酵母YPH499△gal80中分别整合3个拷贝数的3种不同的外源牻牛儿基牻牛儿基焦磷酸合酶(geranylgeranyl diphosphate synthase,GGPPS)编码基因CrtE。然后分别选取不同来源的4种八氢番茄红素合酶(phytoene synthase,CrtB)编码基因CrtB和4种八氢番茄红素脱氢酶(phytoene dehydrogenase,CrtI)编码基因CrtI进行组合,得到16个不同的番茄红素游离表达质粒,转化上述突变株。此外对番茄红素测定方法也进行了探索和优化:分析在5种不同溶剂中番茄红素和β-胡萝卜素的吸收情况,确定合适的溶剂、波长、检测限和线性范围。通过肉眼观察菌落色泽深浅和酶标仪测定,最终筛选得到1株最优组合,即表达来源于曼地亚红豆杉(Taxus x media,Tm)的TmCrtE、成团泛菌(Pantoea agglomerans,Pa)的PaCrtB和三孢布拉霉氏菌(Blakeslea trispora,Bt)的BtCrtI的突变菌株。最终重组菌株摇瓶发酵,产量用酶标仪检测472 nm处的吸光度,达到1.33 mg/g DCW。该研究筛选得到的最优组合菌株,可强化番茄红素生产能力,为进一步获得高产番茄红素细胞工厂提供基础。; 周亲亲徐沙徐沙; 关键词：番茄红素天然色素酿酒酵母

高渗胁迫对光滑球拟酵母蛋白质组的影响被引量：1: 2014年; 光滑球拟酵母(Torulopsis glabrata)在生产丙酮酸的过程中,发酵液渗透压不断提高,导致细胞生长缓慢,影响丙酮酸的持续积累。实验通过二维电泳和同位素标记相对和绝对定量(iTRAQ)技术,比较不同渗透压条件下蛋白质组的差异。结果表明,在渗透压为1 765、2 603和3 324 mOsmol/kg时,相对于对照条件(860mOsmol/kg),分别有125、91和109个蛋白表达水平上调,94、89和78个蛋白表达水平下调,其中中心代谢和能量代谢途径的蛋白质表达量明显提高。此外,研究还发现,渗透压胁迫可诱导超氧化物歧化酶和富脯蛋白的表达量增加,前者可能和高渗环境下活性氧簇的积累有关,而后者可能与胞内脯氨酸的积累有关。该文为后续研究如何提高T.glabrata抵御高渗胁迫的能力提供理论依据。; 徐沙刘立明; 关键词：蛋白质组光滑球拟酵母

糖生物学本硕衔接培养模式初探被引量：2: 2014年; 糖生物学是糖的化学和生物学相结合而产生的一门新兴学科。由于现在高校本科教育还未开设糖生物学课程,故尝试在相关课程教学过程中引入糖生物学的概念和知识。建立研究型教学模式,重视实验,引导学生参与教学,培养学生良好的科学素质和创新能力。; 徐沙李子杰杨刚龙郭佳关锋; 关键词：糖生物学研究型教学教学改革

甘油替代葡萄糖作为碳源生产丙酮酸: 2014年; 光滑球拟酵母是重要的丙酮酸工业生产菌株,主要利用葡萄糖作为碳源生产丙酮酸。该研究以产量大且价格便宜的甘油部分替代葡萄糖并控制碳源组成为80 g/L葡萄糖和20 g/L甘油,摇瓶条件下发酵52 h,丙酮酸产量达到27.6 g/L,在7 L发酵罐上最终丙酮酸产量为61.7 g/L,与碳源为100 g/L葡萄糖的对照条件相比,几乎没有任何变化。由于碳源是培养基的主要成分,用甘油替代葡萄糖可以降低丙酮酸生产的原料成本,减轻由于大量生物柴油合成造成的甘油产能过剩问题。; 徐沙吕永坤周景文; 关键词：光滑球拟酵母甘油葡萄糖丙酮酸

柚皮素合成关键基因表达水平对目标产物积累水平的量化影响被引量：2: 2019年; 柚皮素是一种天然黄酮类化合物,具有抗炎、抗氧化、抗病毒、预防动脉粥样硬化等多种药理活性,也是其他黄酮类化合物合成的重要前体,具有重要的应用价值。目前,微生物法生产柚皮素等黄酮类化合物由于代谢通路不平衡等原因导致产量较低,在很大程度上限制了其工业应用。文中以一株产柚皮素的酿酒酵母菌株Y-01为研究对象,利用启动子和拷贝数控制柚皮素合成代谢途径关键酶4-香豆酸:CoA连接酶(4CL)、查尔酮合成酶(CHS)和查尔酮异构酶(CHI)编码基因的表达水平,考察这些基因的表达水平对目标产物积累水平的量化影响。结果表明,柚皮素产量与4CL或CHI编码基因的表达量之间关联性较低,而与chs基因的表达量存在显著的正相关性。通过调控chs基因的表达水平,获得一株高产柚皮素的酿酒酵母工程菌株Y-04,产量较出发菌株Y-01提高了4.1倍。研究结果表明,CHS是柚皮素合成过程的关键调控靶点,合理调控CHS表达可以显著促进酿酒酵母积累柚皮素。相关结果为采用代谢工程强化微生物合成柚皮素等重要黄酮类化合物提供了重要的理论参考。; 焦亭亭周景文周景文; 关键词：柚皮素表达量关键基因启动子拷贝数

高渗胁迫对光滑球拟酵母转录组的影响被引量：2: 2014年; 采用表达谱芯片技术,研究了光滑球拟酵母细胞在不同渗透压条件下(860、1 765、2 603m Os mol/kg和3 324 m Os mol/kg)的转录水平变化情况。结果表明,在高渗透压条件下,表达量大幅度提高的基因主要包括一些与细胞壁、细胞膜合成相关的基因,以及细胞膜上的信息素蛋白质基因。中心代谢途径(即糖酵解途径、三羧酸循环和氧化磷酸化途径)整体表现为显著上调,特别是参与ATP和NADH合成的相关基因。此外,对可能作为相容性溶质的氨基酸,如谷氨酸、脯氨酸、精氨酸的合成代谢途径的分析表明,脯氨酸和谷氨酸合成途径中的酶转录水平均有一定程度的提高,但是幅度不大;而精氨酸分解途径中的尿素羧化酶转录水平发生显著下调,其转录水平下降至1/100以下。; 徐沙刘立明; 关键词：光滑球拟酵母转录组

代谢改造酿酒酵母生产番茄红素被引量：4: 2022年; 番茄红素是一种具有较高商业价值的萜类化合物,具有良好的抗氧化性,对心血管疾病有预防作用,可通过微生物发酵法高效生产。为了提高酿酒酵母胞内番茄红素积累,过量表达了三酰甘油途径(TAG途径)的关键基因dga1(酰基辅酶A:二酰基甘油酰基转移酶)、pah1(磷脂酸磷酸酶),同时敲入ldp1(脂滴附着蛋白);继续在ypl062w位点敲入来源于肠沙门氏菌的acs1^(L641P)(胞内乙酰CoA合成酶),为番茄红素和脂质载体提供充足的前体;过表达pap1(聚腺苷酸聚合酶)以满足多个基因过表达的转录需求。综上,该文构建了一个适合番茄红素累积的细胞工厂,番茄红素单位产量为109.26 mg/g DCW。该研究通过代谢改造得到1株高产番茄红素重组菌,研究结果为后续进行发酵优化奠定了基础。; 李方迪李由然李由然丁重阳张梁石贵阳丁重阳; 关键词：番茄红素酿酒酵母脂滴乙酰辅酶A

糖蛋白药物表达系统糖基化研究进展被引量：6: 2013年; 随着基因重组技术的不断发展和蛋白糖基化机制研究的不断深入,糖蛋白药物对人类健康的重要作用越来越受到重视。迄今为止,哺乳动物表达载体仍然是最常见的药用蛋白生产系统。由于其存在成本高、产率低等问题,酵母和细菌表达系统也日益受到重视。受到理论和技术的限制,细菌表达系统的开发仍存在相当大的困难,而酵母表达系统的开发和应用已经取得了一系列突破性的成果。本文综述了国内外近年来改造不同表达系统N-糖基化途径用于生产人源糖蛋白的研究进展。; 徐沙中西秀树高晓冬; 关键词：蛋白糖基化人源化基因工程

酿酒酵母关键节点基因缺损对法尼烯合成的影响: 2022年; 以法尼烯为评价效应物,研究了缺损乙醇合成途径、甘油合成途径、胞质乙酰辅酶A转运途径和法尼基焦磷酸消耗支路关键基因对酿酒酵母WHE4菌株合成法尼烯的影响。通过CRISPR-cas9基因编辑技术,获得8株关键基因缺损菌株。结果表明,与WHE4菌株相比,缺损乙醇脱氢酶基因ADH3-6对乙醇和法尼烯产量没有影响;单独缺损甘油三磷酸脱氢酶基因GPD1和GPD2使甘油积累量分别降低了15%和34%,缺损半乳糖激酶基因GAL1、GAL7、GAL10下调了甲羟戊酸途径所有基因转录水平,它们的缺损均不能提高菌株的法尼烯产量;缺损香叶基香叶基焦磷酸合酶基因BTS1和二酰基甘油二磷酸磷酸酶基因DPP1,法尼烯产量提高了29%,在5 L发酵罐补料分批发酵,菌株WHE4-33(WHE4 Δbts1,Δdpp1)的法尼烯产量达到1 578.91 mg/L。该研究对甲羟戊酸途径上游和下游关键节点基因进行了缺损影响法尼烯合成研究,为构建酿酒酵母萜类化合物高效平台提供了参考价值。; 王均华付闻文李由然李由然徐沙石贵阳徐沙丁重阳石贵阳; 关键词：基因敲除甘油酿酒酵母

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