张相民
- 作品数：23 被引量：68H指数：5
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- 发文基金：国家高技术研究发展计划国家自然科学基金中国综合性艾滋病研究项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 细胞周期蛋白依赖激酶K4在石英致人细胞恶性转化中的作用被引量：4
- 2004年
- 目的 探讨细胞周期蛋白依赖激酶K4(CDK4)在石英致人胚肺成纤维细胞(2BS)恶性转化过程中所起的作用,为石英致癌机制提供理论依据。方法 用基因重组和基因导入的方法将表达反义CDK4 RNA的pXJ41-CDK4导入石英恶性转化的2BS细胞中。采用原位杂交和免疫组化方法检测细胞中CDK4基因表达情况,分析反义CDK4 RNA导入前后,细胞生长速度、倍增时间、细胞周期分布、软琼脂克隆形成能力的改变。结果 石英诱导2BS细胞恶性转化过程中CDK4基因过表达,CDK4基因mRNA表达水平的平均灰度值由26.58±4.78增加到303.47±72.39,蛋白表达水平平均灰度值由28.37±6.09增加到255.82±28.33;反义CDK4 RNA可抑制石英恶性转化细胞的生长增殖,CDK4基因mRNA表达从303.47±72.39降至43.73 4±10.12,蛋白表达从255.82±28.33降至41.92±3.25。与石英恶性转化细胞相比,反义pXJ41-CDK4转染细胞培养至第8天时,生长速率下降77.43％;倍增时间从21.0 h延长到42.7 h;G1期细胞比例从45.1％增加到58.0％,S期由40.3％下降到30.0％;克隆形成率明显下降,且克隆明显变小。结论 CDK4的异常表达与石英恶性转化细胞有密切的关系,高水平表达的CDK4对维持恶性转化细胞的恶性性状起重要的作用。
- 闫克夏刘秉慈史香林张相民尤宝荣徐茗康宁
- 关键词：CDK4恶性转化细胞细胞周期蛋白依赖激酶基因MRNA表达人细胞
- 温石棉诱发人胚肺细胞恶性转化中端粒酶的作用
- 2004年
- 目的 研究端粒酶在石棉诱发人胚肺成纤维细胞恶性转化中的作用。方法 将端粒酶基因功能片段 (hTERT)导入人胚肺成纤维细胞 (HELF)中。选用 2 5 μg/cm2 温石棉粉尘分别对导入和未导入hTERT的HELF进行染毒 ,分离转化灶 ,观察细胞生物性状 ,测定细胞生长曲线、端粒酶活性和端粒长度 ,进行软琼脂集落形成实验 ,判定转化性质。结果 将hTERT成功导入HELF ,建立了导入端粒酶功能片段的人胚肺成纤维细胞系 (HELF T+ )。HELF和HELF T+ 被石棉刺激后均发生了恶性转化 ,HELF T+ 恶性转化率为 (2 0 8± 1 0 8)转化灶 /皿 ,显著高于HELF染毒组的恶性转化率 [(1 0 8±0 10 )转化灶 /皿 ]。恶性转化的细胞和HELF T+ 均具有较高的端粒酶活性和较长的端粒长度。结论 端粒酶活性较高、端粒长度较长的细胞 ,经石棉刺激后恶性转化率也较高 。
- 徐茗刘秉慈张相民史香林何鹏尤宝荣康宁
- 关键词：温石棉人胚肺细胞恶性转化端粒酶恶性肿瘤
- 构建COX2基因慢病毒载体对肺腺癌A549细胞增殖与凋亡的影响被引量：2
- 2018年
- 目的构建环氧化酶2(COX2)基因慢病毒表达载体并观察其对非小细胞肺癌A549细胞增殖与凋亡的影响。方法针对COX2基因的不同片段设计3对shRNA的寡核苷酸片段并克隆至慢病毒载体GV248中,构建并筛选最佳抑制效率的靶向COX2基因的慢病毒载体COX2-shRNA。选取对数生长期A549细胞进行慢病毒转染,其中靶向COX2基因的shRNA载体转染A549细胞为shRNA组,以空载体质粒转染作为阴性对照组(NC)及不转染质粒的A549细胞为空白对照组(CON),采用实时荧光定量PCR和Western blotting测定COX2基因和蛋白的表达。分别采用MTT法和流式细胞仪检测干扰COX2表达对A549细胞增殖、凋亡能力的影响。结果成功构建靶向COX2基因的慢病毒载体;稳定转染A549细胞后,COX2基因表达下降,其中以COX2-shRNA1干扰效率最为显著;shRNA组中shRNA1转染的A549细胞COX2 mRNA水平为0.17±0.06,低于NC组的0.81±0.11和CON组的1.09±0.07,差异有统计学意义(P<0.05)。shRNA组细胞增殖活性低于NC组和CON组,shRNA组转染5 d的吸光值为0.976±0.016,低于NC组的1.557±0.015和CON组的1.880±0.034,差异有统计学意义(P<0.05)。shRNA组细胞凋亡率为(6.28±0.31)%,高于NC组的(3.08±0.05)%和CON组的(3.01±0.31)%,差异有统计学意义(P<0.05)。结论成功构建靶向COX2基因的慢病毒表达载体,干扰COX2表达可抑制人肺腺癌A549细胞的增殖并促进细胞凋亡。
- 刘联斌张相民曾汶周茂华叶桂林叶永强王刚李韶今
- 关键词：环氧化酶2慢病毒RNA干扰
- 端粒酶在石棉诱发人类癌症中作用的体外研究
- 该研究将采用端粒酶基因导入技术,探索端粒酶在石棉诱发人类癌症过程中的作用.根据以上结果,我们认为在温石棉诱导人胚肺成纤维细胞恶性转化过程中存在端粒酶的激活,激活的端粒酶起到了促进细胞增殖和延长细胞寿命的作用.该研究首次在...
- 张相民
- 关键词：端粒端粒酶细胞增殖
- 文献传递
- AMPK过表达慢病毒载体的构建及稳定转染肺癌A549细胞株的建立被引量：1
- 2017年
- 目的通过构建表达载体，建立稳定转染腺苷酸活化蛋白激酶（AMPK）的肺癌A549细胞株，观察过表达AMPK后对A549细胞增殖、侵袭能力的影响。方法扩增AMPK全长序列，双酶切目的基因并插入GV358载体，共转染293T细胞进行慢病毒包装，收集慢病毒上清液后感染A549细胞，建立稳定过表达AMPK的A549细胞株。实时荧光定量PCR（qRT—PCR）和Westernblotting检测AMPK的表达情况，四甲基偶氮唑蓝（MTF）及Transwell法检测A549细胞增殖、侵袭能力的变化。结果经限制内切酶鉴定及测序分析，成功构建了GV358．AMPK慢病毒表达载体质粒。与转染空载体相比，转染GV358慢病毒载体的A549细胞AMPK蛋白表达升高5．87倍（P=0．002），mRNA水平升高16．12倍（P〈0．001）；A549细胞过表达AMPK后，第4-5天细胞增殖活性显著降低（第4天：0．53±0．03：0．64±0．05，P=0．021；第5天：0．58±0．04：0．80±0．07，P=0．002），侵袭能力显著减弱[（1．6±0．5）×10^5：（3．4±0．3）×10^5，P=0．004]。结论成功构建了AMPK慢病毒表达载体和稳定表达A549细胞株，过表达AMPK可抑制A549细胞增殖及侵袭能力。
- 张相民张相民曾汶周茂华叶桂林周茂华王刚李韶今
- 关键词：慢病毒属腺苷酸活化蛋白激酶
- AMPK、NF-κB、COX-2及PGE2在非小细胞肺癌中的表达被引量：12
- 2017年
- 目的探讨腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)、核因子κB(NF-κB)、环氧合酶2(COX-2)及前列腺素E2(PGE2)在非小细胞肺癌(NSCLC)中的表达及其关系。方法采用免疫组织化学链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶连接法检测NSCLC和正常肺组织标本中可以直接反映AMPK激活状态的乙酰辅酶A羧化酶磷酸化后的产物(P-ACC)、NF-κB、COX-2的表达,实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)和Western blot检测NSCLC标本及血液、正常肺组织标本及血液中AMPK、COX-2及PGE2受体的表达。结果免疫组织化学法检测发现,P-ACC在NSCLC中低表达,NF-κB和COX-2在NSCLC中高表达,其阳性率分别为33.9%、75.8%和66.1%,且与正常肺组织中的表达差异有统计学意义;qRT-PCR和Western blot检测发现,在NSCLC标本及血液中,AMPK mRNA表达降低,COX-2和PGE2受体mRNA表达升高。结论在NSCLC中,AMPK低表达,NF-κB、COX-2及PGE2高表达,其相互作用可能在NSCLC的增殖、凋亡耐受、侵袭及转移过程中占据重要位置,其表达情况为临床治疗NSCLC提供新的思路。
- 李韶今张相民刘联斌曾汶李荣梁婷王冬梅周茂华
- 关键词：非小细胞肺癌核因子ΚB环氧合酶2
- 按痘苗病毒优势密码子改造HIV-1 gag基因提高表达水平的研究被引量：10
- 2005年
- 为确定痘苗病毒密码子偏向性与基因表达的关系及其在痘苗病毒与宿主细胞相互作用过程中的作用,按痘苗病毒的优势密码子对HIV-1gag基因进行改造,并对合成基因与野生型HIV-1gag基因在痘苗病毒载体系统的表达水平进行了研究。结果显示:①各目的基因分别正向插入了痘苗病毒TK区7.5k启动子下游;②免疫荧光检测显示,改造前后的gag基因均能够很好地在痘苗病毒中表达;③Westernblot检测显示,在相同感染量时,改造后的gag基因具有更高的表达水平;④流式细胞术检测显示,密码子改造后的gag基因较野生型gag基因表达水平提高约17%。上述结果表明:按照痘苗病毒优势密码子进行外源基因改造,可作为提高外源基因在痘苗病毒中表达的策略,同时提示,密码子偏向性是痘苗病毒与宿主细胞相互作用的重要调控因素。
- 张相民辛伟王世峰李仁清陆柔剑王文玲吕亦晨阮力
- 关键词：痘苗病毒基因表达HIV-1GAG基因
- 流感病毒RNA聚合酶蛋白PB1在小鼠中可诱导亚型间交叉免疫保护被引量：2
- 2006年
- 目的探索流感病毒RNA聚合酶PB2和PB1亚基作为实验性流感疫苗候选抗原的可能性。方法以复制型质粒(pSCA)为载体分别构建表达甲1型和甲3型流感PB2和PB1的复制型 DNA疫苗,免疫小鼠后分别用甲1型流感病毒(A/PR／8／34)进行鼻腔攻击,观察针对不同亚型流感病毒的复制型DNA疫苗的免疫保护效果。结果本实验所构建的复制型DNA疫苗在真核细胞中均可表达外源基因;本实验采用的复制型质粒载体(pSCA)与传统质粒载体(pcDNA3)在诱导小鼠产生抗体方面无差异,并且都诱导了偏向T_H1类的免疫反应;表达甲1型和甲3型流感PB1基因的复制型DNA 疫苗均可保护小鼠抵御甲1型流感病毒(A/PR／8／34)的攻击。结论表达甲型流感病毒PB1的复制型 DNA疫苗能保护小鼠抵御同型和异型流感病毒的攻击,本实验为流感疫苗研究提供新的候选抗原。
- 李仁清鲁宁邓瑶王文玲辛伟张相民阮力
- 关键词：流感病毒
- 多种HIVB′/C亚型基因在复制型DNA疫苗中表达及免疫效果研究被引量：1
- 2010年
- 为了解多种HIVB′/C亚型基因在复制型DNA疫苗中表达水平及对免疫效果影响,使用复制型DNA疫苗载体pSCK2,分别构建了7种含单种或多种HIVB′/C亚型基因gagpol、gp160和rtn(rev、tat和nef融合基因)的DNA疫苗质粒。免疫荧光检测表明,Gag、Gp160、Rev、Tat和Nef蛋白均能从相应7种DNA疫苗中表达,单基因表达质粒中的基因表达水平和双基因表达质粒中IRES上游的基因表达水平普遍较好。小鼠免疫后,Gag能诱发较高的抗体滴度,Gp160、Pol和RTN的抗体滴度很低;比较研究显示,Gag单独表达和Gag与RTN双表达的质粒均能诱发较好的Gag抗体反应,但Gag与Gp160双表达质粒免疫或含Gag、Gp160和RTN质粒联合免疫的Gag抗体反应均较弱。ELISPOT检测表明,7种DNA疫苗单独或不同组合方式免疫均能诱发针对Gag、Pol、Gp160、Tat和Nef的细胞免疫反应;单基因表达质粒单独免疫诱发的细胞免疫反应最好,含gagpol和gp160双基因表达质粒单独免疫或与含其它基因质粒联合免疫诱发的Gag、Pol和Gp160细胞免疫明显低于含Gagpol或Gp160单基因质粒诱发的相应免疫反应,但诱发的Tat和Nef细胞免疫与相应单基因质粒免疫组无明显差别。本研究结果显示,不同表达构建体的多种HIVB'/C亚型的基因gagpol、gp160和rtn均能从pSCK2质粒中较好地表达;不同基因结构和不同组合免疫的优化,特别是含gag和gp160基因疫苗联合免疫程序的进一步优化对提高其免疫效果是必要的。
- 高瑛瑛邓瑶齐香荣张相民孟昕王慧娟谭文杰阮力
- 关键词：复制子体液免疫细胞免疫
- 表达HIV-1六种基因的非复制型重组痘苗病毒在CEF细胞中遗传稳定被引量：3
- 2011年
- 本研究目的是了解表达HIV-1六种基因的非复制型重组痘苗病毒(rNTV-C)的遗传稳定性(包括病毒载体和六种外源基因:gp160、gag、polr、evt、at和nef)。我们将rNTV-C在原代鸡胚成纤维细胞(CEF)中连续传代至25代,对第9、12、15以及25代病毒载体基因的稳定性、六种外源基因的稳定性、外源基因表达的稳定性以及外源基因的丢失率进行研究。结果显示:各代病毒均保持了非复制型天坛株痘苗病毒载体特点且传代稳定;HIV-1目的基因序列与原设计序列相符、重组位点正确且遗传稳定,连续传25代核苷酸突变率低于万分之一;目的蛋白在各代rNTV-C中均能有效表达,而且各代病毒之间表达量和分子量无明显差别;以Gag和Nef蛋白表达为标记,rNTV-C各代病毒的基因丢失率均在5%以下。本研究结果为疫苗生产提供了确保毒种稳定的关键资料。
- 齐香荣张相民邓瑶高瑛瑛陆柔剑孟昕谭文杰阮力
- 关键词：HIV-1
