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融合蛋白技术在长效药物开发中的应用被引量：5: 2013年; 随着生物技术与制药工业的迅猛发展,越来越多的蛋白和多肽类药物被研发并应用于临床,然而,大多数此类药物普遍存在体内半衰期短的问题,使其应用受到了限制,而融合蛋白技术是目前延长蛋白和多肽类药物半衰期的有效手段之一。对融合蛋白技术在长效药物开发中的应用进行综述,详细介绍该技术的常用融合伴侣、长效机制和相关药物的研发进展,旨在为长效蛋白或多肽类药物的开发提供参考。; 张瑜赵述强姚文兵; 关键词：融合蛋白半衰期人血清白蛋白转铁蛋白

抗甲胎蛋白单链抗体在大肠杆菌中表达条件的优化及活性鉴定被引量：3: 2012年; 将抗甲胎蛋白单链抗体(scFv-AFP)基因克隆至载体pET32a,转入大肠杆菌E.coli BL21(DE3),在不同的诱导剂浓度、诱导温度和时间下诱导pET32a-scFv-AFP表达,SDS-PAGE分析表明37℃培养4 h时加入0.4 mmol/L异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导5 h为最适表达条件,目的蛋白表达量约为总蛋白的50%,其产物以包涵体形式存在。利用稀释法和透析法对包涵体复性,复性率为37.38%,活性蛋白产量达到200 mg/L。竞争抑制ELISA法初步鉴定活性,当scFv-AFP与亲本单抗浓度比为16∶1,竞争ELISA抑制率达到54.13%,说明scFv-AFP具有较好的抗原结合特异性。该研究为scFv-AFP的获得与抗体的进一步应用改造奠定了基础。; 吕海丽姬晓南冯丽亚张瑜高向东; 关键词：甲胎蛋白单链抗体

达托霉素制备及结构改造研究进展被引量：3: 2011年; 达托霉素作为首个进入临床应用的新型环脂肽类抗生素,其制备工艺与结构修饰已成为抗感染治疗用药研发的1个热点。概述了达托霉素的来源,生物合成途径,重点介绍了达托霉素的制备方法,以及通过其结构修饰、组合生物合成等途径研发其衍生物的方法。; 顾觉奋张瑜; 关键词：达托霉素

靶向性血管生成剂tPep-VEGF-B在胰岛素抵抗中的作用研究: 糖尿病,特别是2型糖尿病,己成为一个全球性的健康威胁。胰岛素抵抗是2型糖尿病发生发展的重要环节,并贯穿疾病始终。此外,胰岛素抵抗是代谢综合征的基础,而代谢综合征直接导致2型糖尿病风险增加。目前,胰岛素抵抗己成为多学科共同...; 张瑜童玥徐越明高向东姚文兵; 文献传递

毛细管气相色谱法测定新药Ⅰb原料中9种残留溶剂被引量：2: 2009年; 目的：用毛细管气相色谱法建立新药Ⅰb原料中9种残留溶剂的测定方法。方法：采用DB-624毛细管柱（30.0 m×530μm,3.00μm）,以氮气为载气,FID检测器,溶液直接分流进样,以正丁醇为内标,计算甲醇、乙醇、乙醚、二氯甲烷、正己烷、乙酸乙酯、甲苯和N,N-二甲基甲酰胺的含量;采用ECD检测器,通过外标法计算氯仿的含量。结果：在考察的浓度范围内,各溶剂均呈良好的线性关系（r〈0.999 4）。平均回收率范围为97.1%-103.3%。结论：本方法稳定可靠,灵敏度高,结果准确,可用于新药Ⅰb原料中各有机残留溶剂的测定。; 季一兵张瑜徐进宜吴晓明; 关键词：毛细管气相色谱法残留溶剂直接进样法

抗人甲胎蛋白单链抗体融合蛋白的构建、表达及初步鉴定被引量：2: 2013年; 甲胎蛋白(Alpha fetoprotein,AFP)是重要的肝癌诊断标记物,在肝癌的进展过程中扮演重要角色。构建具有免疫学活性的抗人AFP单链抗体,为进一步的研究奠定实验基础。采用RT-PCR技术,从分泌抗人AFP单克隆抗体的杂交瘤细胞中扩增mAb抗体可变区的VH、VL基因,并进一步将其组装成VH-Linker-VL型的ScFv片段。将ScFv片段亚克隆至质粒pET32a中,将重组质粒转染大肠杆菌BL21并IPTG诱导表达ScFv蛋白,利用肠激酶切除Trx标签后,经镍柱亲和层析获得蛋白,竞争抑制ELISA法初步鉴定活性,竞争抑制率达到54.13%。; 姬晓南张瑜冯丽亚高向东; 关键词：甲胎蛋白反转录聚合酶链式反应单链抗体肠激酶

重组人血清白蛋白第3结构域-Nartograstim融合蛋白在毕赤酵母中的表达及初步活性研究被引量：2: 2013年; 将人血清白蛋白第3结构域(3DHSA)与粒细胞集落刺激因子突变体(Nartograstim)融合基因克隆至载体pPICzαA,置于醇氧化酶启动子(AOX)和α交配因子信号肽作用下构建分泌表达质粒,电击转化入毕赤酵母GS115。SDSPAGE结果显示3DHSA-Nartograstim相对分子质量约为42 kD,Western blot证实其同时具有HSA和G-CSF的抗原性。建立融合蛋白表达的条件为:BMMY培养基pH 6.0、1.5%甲醇、诱导84 h,灰度扫描发现该条件下融合蛋白的纯度为79%。依次采用亲和色谱和疏水色谱纯化得到纯度高于90%的融合蛋白,终产量为86 mg/L。采用MTT法检测融合蛋白对NFS-60细胞株的促增殖能力,结果显示,3DHSA-Nartograstim具有剂量依赖性促进NFS-60细胞增殖的作用。本研究为3DHSA-Nartograstim的进一步研究奠定了基础。; 赵述强张瑜田浤刘超高向东; 关键词：人血清白蛋白粒细胞集落刺激因子毕赤酵母

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张瑜