张树威
- 作品数：15 被引量：42H指数：5
- 供职机构：华中科技大学同济医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家教育部博士点基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- SV40T抗原基因永生化新生大鼠前软骨干细胞株的构建被引量：3
- 2007年
- 目的建立永生化大鼠前软骨干细胞(PSCs)株,为研究前软骨干细胞的分化机制及临床应用奠定基础。方法用L ipofectam ineTM2000介导基因转染,将含有SV40T抗原基因的真核表达载体pCMVSV40T/PUR导入经免疫磁珠分选出的原代PSCs进行稳定表达,用嘌呤霉素筛选出阳性克隆并扩大培养,观察细胞形态及生长状况,绘制细胞生长曲线,用免疫细胞化学方法和RT-PCR鉴定SV40T抗原基因在转染细胞中的表达。结果分离获得转化细胞阳性克隆,用免疫组化证实FGFR-3表达阳性,提取RNA后用RT-PCR法成功扩增出588 bp的片段。转染细胞经扩大培养,命名为永生化前软骨干细胞。贴壁培养的转染细胞群体倍增时间为(22.98±2.77)h,传代、冻存和复苏对细胞形态及生长无明显影响。结论在体外培养条件下,可以从新生大鼠干骺端分离、培养出前软骨干细胞,pCMVSV40T/PUR转染能使其永生化。
- 胡伟华郭风劲张树威陈安民丁然
- 关键词：前软骨干细胞细胞培养永生化
- 不同浓度血清对大鼠骨骺干细胞向软骨细胞分化的诱导效果比较被引量：6
- 2008年
- 背景:血清成分复杂,其中不仅存在促细胞生长因子,同时也存在细胞生长抑制因子,因此合适的血清浓度对于体外培养细胞的增殖和分化至关重要。目的:比较不同浓度的胎牛血清对大鼠骨骺干细胞向软骨细胞分化的影响。设计、时间及地点:细胞学体外观察,于2007-03/10在华中科技大学同济医学院附属同济医院矫形外科研究室完成。材料:纯系清洁级新生24h内的SD大鼠8只,用于制备骨骺干细胞。胎牛血清为Gibco公司产品。方法:免疫磁珠分离纯化FGFR-3阳性的骨骺干细胞,稳定传至第3代后,分别用含1.25%,2.5%,5%,10%胎牛血清的软骨诱导培养基进行干预,诱导14d。主要观察指标:BrdU-ELISA法检测细胞增殖活性。应用免疫荧光染色和RT-PCR法检测细胞Ⅱ型胶原的表达。结果:骨骺干细胞向软骨细胞诱导14d后,10%胎牛血清组细胞增殖活性显著高于1.25%,2.5%,5%胎牛血清组(P<0.05);10%胎牛血清组Ⅱ型胶原免疫荧光染色阳性程度及Ⅱ型胶原mRNA的表达均明显强于其他3组。结论:含10%胎牛血清的软骨诱导液更有利于骨骺干细胞向软骨细胞方向分化。
- 张树威陈安民宋登新谢伯臻王江祁军易磊郭风劲
- 关键词：骨骺干细胞血清浓度分化软骨细胞
- 大鼠PTHrP亚基因的克隆及其真核反应质粒的构建被引量：2
- 2008年
- 目的:克隆甲状旁腺相关肽(PTHrP)亚基因PTHrP(1-36)、PTHrP(38-94)和PTHrP(107-139)并构建四环素反应性元件调控的反应质粒pTRE-PTHrP(1-36)、pTRE-PTHrP(38-94)和pTRE-PTHrP(107-139),为调控PTHrP亚克隆在软骨前体细胞中的表达打下基础。方法:提取骨骺干细胞的总RNA,以RT-PCR方法获得带有酶切位点的PTHrP(1-36)、PTHrP(38-94)和PTHrP(107-139)基因片段,扩增的DNA片段分别与含潮霉素筛选标记的四环素反应性元件载体pTRE-2Hyg双酶切后连接,转化扩增后对重组质粒进行提取和酶切、测序鉴定。结果:经酶切图谱分析和DNA序列测定证实目的基因已经插入重组质粒。结论:成功克隆出PTHrP亚克隆基因PTHrP(1-36)、PTHrP(38-94)和PTHrP(107-139)并构建了反应质粒pTRE-PTHrP(1-36)、pTRE-PTHrP(38-94)和pTRE-PTHrP(107-139),为进一步精确调控PTHrP亚基因的表达奠定了基础。
- 张树威陈安民郭风劲谢柏臻祁军王江易磊李昆朋
- 关键词：骨骺干细胞
- C端甲状旁腺相关肽的克隆及其对骨骺干细胞的调控作用被引量：2
- 2009年
- 目的探讨C端甲状旁腺相关肽（PTHrp107-139）对体外培养的骨骺干细胞的调控作用以及与其他调控因子的关系。方法采用逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）方法克隆大鼠PTHrp全长中的107～139片段，并将其亚克隆至质粒pTRE2hyg上，构建新的质粒pTRE2hyg—PTHrp107-139，并将其与质粒pTet—on共转染分离纯化的骨骺干细胞，放入含有维生素c和地塞米松的全培养基中进行培养，分别加入0．1、0．5、2．0mg／L的强力霉素（Doxycycline）进行诱导，并设置空白对照。48～72h后抽提各组细胞的RNA进行逆转录，然后通过半定量PCR的方法检测增殖细胞核抗原（PCNA、SOX9等基因的表达变化，流式细胞仪检测细胞周期和凋亡。结果加入DOX组的PCNA、ColⅡ、血管内皮细胞生长因子（VEGF）、SOX9表达增加，骨骺干细胞数量明显增多，而Ptc、ColX、骨形态发生蛋白（BMP）-6表达减少。结论C端甲状旁腺相关肽可能有促进骨骺干细胞增殖并抑制其分化的作用，但对细胞凋亡无明显影响。
- 李明辉郭风劲张树威宋登新王江易磊
- 关键词：甲状旁腺骨骺干细胞软骨形成
- COX-2抑制剂塞来昔布对大鼠脊髓损伤的保护作用被引量：2
- 2007年
- 目的观察选择性环氧化酶-2抑制剂塞来昔布(celecoxib)对大鼠脊髓损伤的保护作用。方法48只SD大鼠,随机分为单纯损伤组及治疗组。采用改良Allen’s打击法制作脊髓损伤动物模型,分别在伤后12、24、72h测定脊髓标本的丙二醛(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)含量。用苏木精-伊红染色观察损伤脊髓组织病理变化,原位末端标记法(TUNEL)标记凋亡细胞。同时采用Tarlov评分和斜板实验观察脊髓神经功能恢复情况,比较各组之间的差异。结果治疗组较单纯损伤组神经功能明显改善(P<0.05)。治疗组各时间点MDA含量较单纯损伤组明显降低(P<0.05),SOD含量明显升高(P<0.05),病理形态改变较轻且凋亡细胞少(P<0.05)。结论COX-2抑制剂塞来昔布可减少神经细胞凋亡,对继发性脊髓损伤起到保护作用。
- 张帆郭风劲蒋伟张树威熊文
- 关键词：脊髓损伤环氧化酶-2塞来昔布
- 鼠骨骺干细胞免疫纯化和pTRE-PTHrP（38-94）反应质粒的构建被引量：6
- 2008年
- 目的免疫纯化新生大鼠骨骺干细胞，克隆甲状旁腺相关蛋白的中间片段PTHrP（38-94）基因并构建四环素反应性元件调控的反应质粒pTRE-PTHrP（38-94）。方法采用免疫磁珠技术分离纯化具有FGFR-3特异性表面标志的骨骺干细胞，分别以FGFR-3抗体和PCNA抗体对骨骺干细胞的细胞爬片进行免疫细胞化学鉴定。提取骨骺干细胞的总RNA，以RT-PCR方法获得带有酶切位点PTHrP（38-94）基因片段，扩增的DNA片段与含潮霉素筛选标记的四环素反应性元件载体pTRE-2Hyg均双酶切后连接，转化、扩增后对重组质粒进行提取和酶切、测序鉴定。结果免疫荧光证实所取材分离并纯化的细胞为骨骺干细胞；经限制性内切酶Bam HⅠ、NotⅠ酶切图谱分析和DNA序列测定证实目的基因已经插入重组质粒。结论运用显微取材和免疫纯化技术可以成功分离纯化骨骺干细胞；成功克隆PTHrP（38-94）基因并构建了反应质粒pTRE-PTHrP（38-94），为进一步明确PTHrP（38-94）片段的生物学功能及其在成软骨和成骨分化过程中的作用奠定了基础。
- 张树威陈安民游洪波廖晖宋登新王江谢柏臻刘铁郭风劲
- 关键词：干细胞免疫磁化分离
- 壳聚糖/纳米羟基磷灰石分层复合支架的生物相容性研究被引量：7
- 2008年
- 制备壳聚糖/纳米羟基磷灰石(CS/nHA)分层复合支架,对其进行细胞毒性评价。分离培养大鼠软骨细胞接种于支架,相差显微镜和扫描电镜观察细胞的黏附及生长情况。动物皮下埋植试验观察其组织相容性。实验结果证实壳聚糖/纳米羟基磷灰石分层复合支架具有良好的生物相容性,有望成为较好的骨软骨组织工程支架。
- 祁军陈安民郭风劲孙淑珍谢柏臻张伟凯张树威
- 关键词：壳聚糖纳米羟基磷灰石生物相容性
- 骨骺干细胞相关研究进展被引量：5
- 2007年
- 骨骺干细胞是近年来发现的保持有干细胞特性井能定向分化的成体干细胞之一,它的分离纯化使得尚未找到十分理想的种子细胞的关节软骨损伤组织工程修复研究看到了希望。研究发现PTHrP、Ihh和Notch等信号转导系统在调节骨骺干细胞分化和软骨内成骨中起着重要作用。软骨发育不良、原发性滑膜软骨瘤等多种软骨发育障碍性疾病与骨骺干细胞的特征性标记物成纤维细胞生长因子受体-3的基因突变有关。骨骺干细胞在修复软骨与骨缺损方面的研究已取得可喜进展,在未来临床研究中将有广泛的应用价值。
- 张树威郭风劲陈安民
- 关键词：骨骺干细胞分化软骨缺损修复
- pTet-on骨骺干细胞株的建立和pTRE-甲状旁腺相关蛋白（1—36）反应质粒的构建被引量：1
- 2008年
- 目的建立pTet—on骨骺干细胞株，克隆甲状旁腺相关蛋白[PTHrP（1—36）]基因并构建反应质粒pTRE—PTHrP（1—36）。方法用脂质体介导的基因转染技术将pTet—on质粒转染于永生化骨骺干细胞，G418筛选得到稳定克隆，再瞬时转染pTRE-2Hyg—Luc质粒并筛选出高水平诱导、低背景表达的永生化骨骺干细胞系。以RT—PCR方法获得带有酶切位点PTHrP（1—36）基因片段，与载体pTRE-2Hyg均双酶切后连接，转化扩增后对重组质粒进行提取和酶切、测序鉴定。结果筛选到1株诱导后荧光素酶的表达活性增加50倍的骨骺干细胞系；经酶切图谱分析和DNA序列测定证实目的基因已经插入重组质粒。结论筛选得到的永生化骨骺干细胞株受强力霉素诱导后能够低背景、高水平表达；成功克隆PTHrP（1—36）基因并构建了反应质粒pTRE—PTHrP（1—36），为进一步精确调控PTHrP（1—36）基因的表达奠定了基础。
- 张树威陈安民李明辉祁军宋登新祝文涛廖晖郭风劲
- 关键词：骨骺强力霉素基因表达调控甲状旁腺相关蛋白
- 低分子量肝素对骨肉瘤细胞增殖和survivin表达的影响被引量：3
- 2007年
- [目的]研究低分子量肝素对骨肉瘤细胞增殖和survivin表达的影响。[方法]体外培养骨肉瘤细胞系MG-63,应用MTT法检测不同浓度低分子量肝素不同时间段对骨肉瘤细胞系MG-63生长的影响,流式细胞仪检测细胞凋亡率的变化,免疫组化和RT-PCR法分析低分子量肝素对骨肉瘤细胞survivin基因表达的影响。[结果]低分子量肝素可抑制骨肉瘤细胞系MG-63生长,且随着低分子量肝素剂量的增加,MG-63细胞凋亡率明显增加。免疫组化和RT-PCR显示,骨肉瘤细胞系MG-63中survivin的表达较用药前明显下降。[结论]低分子量肝素对骨肉瘤细胞系MG-63有明显的抑制作用,其作用可能通过抑制抗凋亡基因survivin的表达,促进肿瘤细胞的凋亡而实现。
- 易磊郭风劲陈安民祝文涛宋登新张树威胡伟华李明辉
- 关键词：低分子量肝素骨肉瘤SURVIVIN细胞凋亡
