孙大为
- 作品数：2 被引量：2H指数：1
- 供职机构：宁波出入境检验检疫局更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生理学更多>>
- 含非竞争性内标四重荧光RT-PCR方法检测手足口肠道病毒方法的研究被引量：1
- 2012年
- 旨在了解手足口病的流行和感染情况,并进行快速准确的检测。建立了含非竞争性内标的同时检测肠道病毒通用型、肠道病毒EV71型及柯萨奇病毒CA16型的四重荧光RT-PCR方法,对该方法的特异性、灵敏度等进行评价,并对多份临床样本进行应用检测。结果表明,该检测方法特异性强,对肠道病毒及其他人类非肠道病毒进行检测,显示了良好的特异性;该检测方法对EV71型和CA16型的检测灵敏度分别达到31.25 TCID50和1.25×102TCID50;将浓度为1×104TCID50及5×102TCID50的EV71样本进行重复性试验,其变异系数均小于1.5%;将浓度为5×102-5×105TCID50的EV71和CA16样本进行线性试验,其相关系数R2值在0.982-0.998之间。采用本研究建立的方法检测40份疑似临床样本,最后检出31份肠道病毒阳性样本,其中8例EV71型阳性,13例CA16阳性。另外,试验数据表明,内标对监控PCR抑制物的存在具有重要作用。本方法能同时快速检测所有肠道病毒并进行EV71型及CA16型的分型,并且灵敏度高、特异性好、扩增效率高,由于加入了内标,能有效地监控假阴性的出现,适合于手足口病的临床检测。
- 周冬根孙大为王燕倪敏君张升翟敏
- 关键词：手足口肠道病毒
- 多重实时荧光PCR法快速检测水体中致病性弧菌的研究被引量：1
- 2012年
- 致病性弧菌检测方法主要是生化鉴定法，费时费力，而且对于生化反应不典型或生化反应极为相似的弧菌属无法准确鉴别，传统的生化鉴定法在大规模的病害调查过程和生产实践中无法做到快速准确方便。多重荧光PCR方法是在DNA分子水平进行微生物检测的一种新方法，根据样本中各种微生物的特异性基因对目标菌进行鉴定，可以稳定准确地在种属和菌株水平上鉴别微生物，弥补传统生化鉴定方法的缺陷。本研究通过优化多重荧光PCR方法体系，建立了水体中致病性弧菌的两个多重荧光PCR检测方法，该方法通过富集水体细菌，无需前增菌步骤，大大减少检测时间。实际工作中推广应用结果表明，多重荧光PCR方法检测7种弧菌，具有快速、准确度高、重复性好及敏感性高等特点。
- 周冬根孙大为倪敏君王燕张升翟敏
- 关键词：致病性弧菌多重荧光荧光PCR法水体PCR方法
