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孔江南: 作品数：14 被引量：2H指数：1; 供职机构：河南农业大学更多>>; 发文基金：国家自然科学基金河南省自然科学基金河南省科技攻关计划更多>>; 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>

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鸡源志贺氏菌IpaC基因新型表达载体构建及其在毕赤酵母中的表达: 2016年; 为使鸡源志贺氏菌IpaC蛋白保持天然的生物学活性,在毕赤酵母表达系统中实现分泌表达,进一步研究IpaC蛋白的生物学功能,本研究在不改变IpaC蛋白氨基酸序列的情况下,根据酵母密码子偏爱性优化合成IpaC#基因,利用真核表达载体p GAPZA和8种真核信号肽,分别构建真核表达载体pGAPZA-Inu/Inv/Kil/Lys/Mat/Amy/Glu/Ser-IpaC#,然后将线性化的重组质粒电转化至毕赤酵母X-33中,对阳性转化子进行表达,并用SDS-PAGE及Western-blot检测其表达产物。结果表明:在8种重组菌表达产物的菌体沉淀中检测到大小约为60 ku的目的蛋白。说明鸡源志贺氏菌IpaC基因成功实现了在毕赤酵母的胞内表达。; 马金玉韩志霞蒋大伟王亚宾许兰菊苗银萍孔江南; 关键词：毕赤酵母

利用免疫沉淀法对鸡源志贺菌IpaC蛋白受体候选蛋白的初步筛选被引量：1: 2016年; 为筛选鸡源志贺菌IpaC蛋白的受体。利用生物素标记试剂盒标记IpaC蛋白，分离培养原代鸡肠上皮细胞和。利用ProteoExtract？天然膜蛋白提取试剂盒提取鸡肠上皮细胞的膜蛋白；应用免疫沉淀、免疫磁珠法分离富集与IpaC蛋白结合的蛋白质；利用SDS-PAGE电泳检测和Western blot鉴定。结果获得了与IpaC蛋白特异性结合的大约在34000～55000之间的蛋白条带。筛选得到的SDS-PAGE蛋白条带进行LC—MS／MS测序鉴定和生物信息学分析。初步将annexin A2，37000 Laminin receptor precursor，LIM and SH3 proteinl，ras—related protein Rab-43作为IpaC蛋白受体的候选蛋白。为研究志贺菌在鸡体内的致病机制奠定基础，而且可以为评估鸡源志贺菌在公共卫生方面的重要性提供参考依据。; 韩志霞刘芳蒋大伟许兰菊孔江南李克宇; 关键词：免疫沉淀受体

核酸G四链体结构在伪狂犬病毒EP0基因的表达和病毒增殖中的作用: 富含鸟嘌呤碱基的DNA或者RNA能够形成一种特殊的核酸二级结构:G四链体结构。该结构广泛存在于真核生物、原核生物以及病毒的基因组中，具有重要的生物学功能，如影响DNA的复制、转录和翻译，参与了众多的生理病理过程。伪狂犬病...; 孔江南; 关键词：仔猪伪狂犬病毒基因表达病毒增殖

一种连续化生产c-di-AMP的方法: 本发明属于基因工程和酶工程技术领域，具体涉及一种采用固定化DisA蛋白连续生产c-di-AMP的方法。该方法步骤：1、DisA基因改造，通过基因工程手段，将DisA基因与cbm基因融合构建重组质粒载体；2、重组质粒转化，...; 杨国宇张改平杨森孔江南张超韩莹倩郭豫杰

核酸G四链体结构在伪狂犬病毒EPO基因的表达和病毒增殖中的作用: 富含鸟嘌呤碱基的DNA或者RNA能够形成一种特殊的核酸二级结构:G四链体结构。该结构广泛存在于真核生物、原核生物以及病毒的基因组中,具有重要的生物学功能,如影响DNA的复制、转录和翻译,参与了众多的生理病理过程。伪狂犬病...; 孔江南; 关键词：PRV EPO SP1 抗病毒作用

枯草芽孢杆菌DisA体外合成c-di-AMP的方法及鉴定: <正>c-di-AMP是细菌内新近发现的核苷酸第二信使分子,c-di-AMP可能是细菌DNA损伤的一个信号因子,当有损伤的DNA分子结合到DisA以后,环化酶活性被抑制,细胞内c-di-AMP浓度降低,细菌'感受'到这一...; 孔江南杨国宇张超杨森鲁维飞王江; 文献传递

一种连续化生产c-di-AMP的方法: 本发明属于基因工程和酶工程技术领域，具体涉及一种采用固定化DisA蛋白连续生产c‑di‑AMP的方法。该方法步骤：1、DisA基因改造，通过基因工程手段，将DisA基因与cbm基...; 杨国宇张改平杨森孔江南张超韩莹倩郭豫杰; 文献传递

猪DDX41基因的克隆与组织分布: <正>DEAD(Asp-Glu-Ala-Asp)Box Polypeptide 41简称DDX41,它是DExD/H-box解旋酶超家族的一员,广泛存在于真核生物和大部分原核生物中。它是检测DNA的细胞质传感器,并且可以...; 孔江南杨国宇郭豫杰张超王江高会贞韩莹倩; 文献传递

鸡DDX41基因的克隆与组织分布: DEAD(Asp-Glu-Ala-Asp)Box Polypeptide 41简称DDX41,它是DExD/H-box解旋酶超家族的一员,广泛存在于真核生物和大部分原核生物中。它是检测DNA的细胞质传感器,并且可以介导Ⅰ...; 孔江南杨国宇郭豫杰张超王江高会贞韩莹倩

基于RNA适配体检测体外酶促合成的c-di-GMP和cGAMP: 2018年; 旨在建立简单、快速的检测体外酶促合成的c-di-GMP和cGAMP的方法。本研究以含有T7启动子、VC2GEMM-1核糖开关序列或其突变序列VC2/g20a、spinach2和tRNA序列的双链DNA为模板,利用T7RNA聚合酶体外转录体系制备VC2、VC2/g20aRNA适配体。通过检测绿色荧光强度分析RNA适配体对c-di-GMP和cGAMP的结合能力。结果表明,转录得到的RNA经过加热变性、缓慢退火后得到VC2RNA适配体和VC2/g20a RNA适配体,在125mmol·L^(-1 )KCl和30mmol·L^(-1 )MgCl_2溶液中孵育180min的优化结合条件下,VC2适配体与c-di-GMP特异性结合,VC2/g20a适配体与cGAMP特异性结合;c-di-GMP对VC2适配体的半数效应浓度(EC50)为(89±1.7)nmol·L^(-1),cGAMP对VC2/g20a适配体的半数效应浓度为(309±4.5)nmol·L^(-1);VC2和VC2/g20a能够分别检测低至5nmol·L^(-1)和20nmol·L^(-1)的c-di-GMP和cGAMP;并且发现转录的RNA混合物在未纯化的情况下同样能够检测VC0179体外酶促合成的c-di-GMP和cGAMP。这种方法可以简单快速的检测VC0179体外酶促合成的c-di-GMP和cGAMP,并且为研究其他c-di-GMP和cGAMP合成酶活性提供潜在可能。; 朱彦策孔江南陈慧心钟凯张超; 关键词：C-DI-GMP 荧光检测