孔彦平
- 作品数：8 被引量：19H指数：4
- 供职机构：浙江理工大学生命科学学院更多>>
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- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- HSV-tk联合GCV自杀系统对肝癌细胞株Huh-7杀伤作用的研究被引量：2
- 2011年
- 单纯疱疹病毒胸苷激酶(herpessi mplex virus-thymidine kinase,HSV-tk)基因,是目前研究比较多的自杀基因,其与前体药物丙氧鸟苷(ganciclovir,GCV)构成HSV-tk/GCV自杀基因系统。本实验将携带HSV-tk基因的慢病毒转染Huh-7细胞,通过报告基因反映慢病毒的转染效率;基因组PCR及RT-PCR检测转染Huh-7细胞中的HSV-tk基因的整合及表达;MTT检测不同浓度药物处理后的细胞存活率;最后HSV-tk+与HSV-tk-的Huh-7细胞以不同比例混合,MTT测定GCV作用后细胞的存活率。结果表明,HSV-tk/GCV系统作用于Huh-7细胞后,细胞出现明显的凋亡现象,旁观者效应比较明显。
- 郭国英谢国良何国清孔彦平王毅刚
- 关键词：HSV-TKGCV旁观者效应
- MG132抑制肝癌细胞Bel-7404生长的机制研究被引量：6
- 2010年
- MG132(Z-Leu-leu-leu-CHO)是一种蛋白酶体抑制剂,它可逆地抑制蛋白酶体活性,从而抑制泛素-蛋白酶体通路所介导的蛋白质降解,诱导细胞凋亡.实验研究MG132抑制肝癌细胞Bel-7404生长的机制.采用不同浓度梯度和时间梯度,通过荧光显微镜、透射电子显微镜、Hoechst33342染色、MTT检测、AnnexinⅤ/PI流式细胞术、Westernblot分别检测MG132对Bel-7404细胞的形态学变化、细胞内质网压力变化、自噬泡形成、凋亡小体形成、细胞存活率、细胞凋亡水平、凋亡及自噬信号途径中相关蛋白质表达的影响.结果显示,MG132能明显抑制Bel-7404细胞生长.通过增加内质网压力激活Caspase-12,也可通过线粒体途径调节Bcl-2/Bax水平,促进细胞色素c的释放,两者皆可激活下游效应Caspase-3,剪切PARP,诱导细胞凋亡.同时,MG132可诱导Beclin1和LC3B的上调,促使Bel-7404细胞发生自噬,可在透射电镜下观察到自噬泡形成.上述结果表明,MG132作用Bel-7404细胞涉及两类细胞程序性死亡途径:细胞凋亡和自噬.
- 张静李伟章康健刘锡君孔彦平牛娜蒋海周秀梅
- 关键词：蛋白酶体抑制剂肝癌细胞凋亡自噬内质网应激
- AFP调控的携带Mn-SOD基因的腺病毒对肝癌细胞的杀伤作用被引量：4
- 2011年
- 利用改造后的溶瘤腺病毒Ad.enAFP-E1A-△E1B55Kd作为载体携带治疗基因Mn-SOD,得到目的病毒Ad.enAFP-E1A-△E1B55Kd-MnSOD;通过PCR方法鉴定病毒构建正确;MTT法检测病毒对肝癌细胞的特异杀伤能力和对肝正常细胞的安全性;Hoechst33342染色实验观察细胞凋亡的现象。结果显示:经目的病毒感染后肝癌细胞出现明显的病变现象和生长抑制,而肝正常细胞基本无病变现象出现,表明构建的目的病毒具有较高的安全性和很好的靶向性。此外目的病毒处理能引起特异性的肝癌细胞凋亡,所携带治疗基因Mn-SOD能通过促进肿瘤细胞的凋亡达到抑制肿瘤细胞生长的效果。
- 孔彦平张静肖睿娟郭国英王毅刚
- 关键词：腺病毒肝癌细胞
- 肿瘤靶向腺相关病毒携带干扰素β和TRAIL对A549肺癌移植瘤的增强治疗效应(英文)被引量：6
- 2010年
- 干扰素β(IFN-β)和肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)是有效抗癌药物。腺相关病毒(AAV)为目前最有应用前景的基因转移载体之一。利用AAV携带IFN-β和TRAIL基因并置于hTERT启动子控制下分别构建成肿瘤靶向病毒AAV-hTERT-IFN-β和AAV-hTERT-TRAIL,且单个IFN-β或TRAIL基因治疗发挥了一定的抗癌效果。将AAV-hTERT-IFN-β和AAV-hTERT-TRAIL进行联合,旨在研究其对A549肺癌细胞体内外的生长抑制效应。ELISA法检测了AAV-hTERT-IFN-β感染A549细胞后分泌型IFN-β的表达;MTT法检测AAV-hTERT-IFN-β联合AAV-hTERT-TRAIL对肿瘤细胞的生长抑制作用;凋亡细胞染色和流式细胞仪分别检测了AAV-hTERT-IFN-β、AAV-hTERT-TRAIL及其联合对A549细胞的凋亡效应;进一步评价了联合AAV-hTERT-IFN-β和AAV-hTERT-TRAIL对A549裸鼠移植瘤的抑癌效果。结果显示,联合治疗优于任一单独治疗并且导致了增强的肿瘤细胞毒性和凋亡诱导效应。更进一步显示,联合AAV-hTERT-IFN-β和AAV-hTERT-TRAIL治疗发挥了重要的抑制裸鼠移植瘤效果甚至消除全部移植瘤,为探究IFN-β和TRAIL联合抗癌的分子机制奠定了基础。
- 王毅刚何凌峰何国清孔彦平刘旭平蔡海波刘新垣谭文松
- 关键词：干扰素ΒTRAIL腺相关病毒肺癌抗肿瘤效应
- AFP调控的携带Mn-SOD的溶瘤腺病毒对肝癌细胞杀伤作用的研究
- 癌症由于具有死亡率高、生存率低及治疗效果差等特点被认为是当前医学和生物学研究的难题。世界范围内,癌症已经成为位于居民死因前列/[1/]的一种疾病。其中肝细胞癌是最常见恶性肿瘤之一,在我国的发病率也很高,某些地区甚至成为死...
- 孔彦平
- 关键词：肝癌MNSODAFP溶瘤腺病毒
- 文献传递
- 蛋白酶体抑制剂MG132诱导肝癌细胞Hep3B凋亡的机制被引量：4
- 2010年
- 研究探讨蛋白酶体抑制剂MG132(Z-Leu-leu-leu-CHO)诱导肝癌细胞Hep3B凋亡的作用与机制。实验采用不同浓度梯度和时间梯度,通过荧光显微镜、Hoechst33342染色、MTT检测和Western印迹分别检测MG132对Hep3B细胞的形态、凋亡小体形成、细胞存活率、细胞凋亡相关蛋白表达的影响。结果表明,MG132能够选择性抑制肝癌细胞生长,对正常肝细胞没有明显影响。此外,MG132可以通过内质网应激途径诱导肝癌细胞Hep3B凋亡,呈现剂量和时间的双重依赖性。提示通过抑制蛋白酶体来达到诱导肿瘤细胞凋亡的方法是可行的,MG132此类药物的研究与应用将为肿瘤治疗提供新的选择。
- 张静刘锡君李伟孔彦平章康健周秀梅
- 关键词：蛋白酶体抑制剂肝癌细胞内质网应激CASPASE-12
- 携带MnSOD基因的肝癌特异性溶瘤腺病毒抑制肿瘤细胞生长的研究
- 超氧化物岐化酶(Superoxide Dismutase,SOD)家族能催化超氧阴离子的歧化反应。SOD是唯一将超氧阴离子转化为过氧化氢的抗氧化酶,在有氧代谢的细胞内构成第一道抗氧化酶防御体系。它是广泛存在于生物体各个组...
- 孔彦平何国清肖睿娟雷文刘新垣王毅刚
- 携带IL-24的溶瘤腺病毒联合5-Fu对NCI-H460肺癌细胞的生长抑制效应
- 2010年
- 研究利用携带IL-24的溶瘤腺病毒(ZD55-IL-24)联合化疗药物5-氟尿嘧啶(5-Fu)对肺癌细胞NCI-H460生长的体外抑制效应。利用RT-PCR和Western blot法分别检测了IL-24在转录和翻译水平分析,发现IL-24在经ZD55-IL-24感染的NCI-H460中能有效表达,而未感染ZD55-IL-24的NCI-H460则无表达;用结晶紫染色法定性分析了ZD55-IL-24联合5-FU对NCI-H460的生长抑制和杀伤作用,结果表明联合应用比单用时效果更显著;通过MTT法进行的定量分析也表明ZD55-IL-24与5-FU联合处理48 h后,NCI-H460的增殖抑制率显著高于单用ZD55-IL-24或5-FU(P<0.05);最后,用Hoechst33258染色法观察了细胞凋亡,结果也显示联合应用ZD55-IL-24和5-FU组的细胞凋亡现象比单用的显著。本研究初步证实了ZD55-IL-24显著提高了NCI-H460对化疗药物的敏感性,联合疗法对肿瘤细胞的杀伤作用明显增强。
- 何国清罗小芳雷文孔彦平马卉王毅刚
- 关键词：5-FU凋亡
