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唐刘君: 作品数：13 被引量：17H指数：3; 供职机构：军事医学科学院放射与辐射医学研究所更多>>; 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划全球变化研究国家重大科学研究计划更多>>; 相关领域：生物学医药卫生更多>>

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NIPSNAP3A短发夹RNA腺病毒载体的构建及病毒包装: 2012年; 目的:构建靶向NIPSNAP3A的短发夹RNA(shRNA)腺病毒载体,干扰HEK293A细胞中NIPSNAP3A的表达。方法:设计靶向NIPSNAP3A的shRNA,插入穿梭质粒pENTRY,通过Gateway法获得腺病毒颗粒pAd-NIPSNAP3A-shRNA,转染HEK293A细胞,在细胞内包装获得腺病毒。结果:重组腺病毒载体经酶切鉴定正确,制备的病毒感染效率高,能显著抑制NIPSNP3A蛋白的表达。结论:干扰HEK293A细胞NIPSNAP3A表达的shRNA重组腺病毒载体构建成功。; 俞华吉闫永红唐刘君杨晓明王晓辉汪思应; 关键词：短发夹RNA 腺病毒载体

TRAF6截短体的构建及其对NF-κB信号通路的影响被引量：3: 2011年; 目的构建肿瘤坏死因子受体相关因子6(TRAF6)截短体,鉴定TRAF6截短体及对核因子-κB(NF-κB)信号通路的影响区域。方法采用PCR技术扩增TRAF6 4个截短体(N1、N2、N3、C1)编码基因,分别将其构建在pFlag-CMV2重组载体,用荧光素酶报告基因方法对TRAF6 4个截短体功能活性进行验证。结果成功将TRAF6截短体编码基因构建至pFlag-CMV2载体,截短体命名为N1、N2、N3、C1,通过荧光素酶报告基因实验证明TRAF6N3对NF-κB信号通路有增强效应。结论 TRAF6通过截短体N3区域对NF-κB信号通路产生增强效应。; 王敏王晓辉唐刘君李长燕董晓明周扬帆杨晓扬杨晓明汪思应; 关键词：NF-ΚB TRAF6 荧光素酶报告基因

细胞周期相关因子CDCA3基因shRNA表达载体的构建及鉴定被引量：1: 2012年; 目的设计能转录短发夹状RNA(short hairpin RNAs,shRNA)的DNA序列,构建能有效下调CDCA3蛋白表达的shRNA真核表达载体,研究其对CDCA3表达的影响,以便进一步研究CDCA3的功能。方法根据文献获得CDCA3的siRNA靶序列,依据RNA干扰机制和shRNA靶序列的设计原则,以CDCA3基因为靶基因,合成一对编码shRNA的两条DNA序列,经退火后合成DNA双链,再克隆至shRNA表达载体pSIREN-DNRDsRed质粒中,连接产物转化E.coilJM109感受态细胞,然后挑取克隆提质粒,进行酶切鉴定和DNA序列测定。将构建成功的载体通过脂质体介导转染导入人胚肾HEK293细胞,采用Western blot法和Realtime RT-PCR,检测特异性shRNA对CDCA3蛋白在mRNA及蛋白表达水平的抑制效果。结果成功构建靶向CDCA3蛋白的特异shRNA的真核表达载体;转染HEK293细胞后,可显著下调CDCA3在细胞内的mRNA水平及蛋白表达水平。结论 CDCA3蛋白的特异shRNA的真核表达载体能显著下调HEK293细胞内的CDCA3蛋白表达。成功构建CDCA3 shRNA表达载体,为进一步研究CDCA3基因的功能提供了实验基础。; 李娟唐刘君王晓辉查欣胡中倩邢小翠杨晓明汪思应; 关键词：RNA干扰 SHRNA

谷胱甘肽过氧化物酶2干涉慢病毒系统构建及对人肝癌细胞凋亡的影响被引量：3: 2015年; 目的构建人谷胱甘肽过氧化物酶2(Glutathione peroxidase 2,GPX2)慢病毒干涉载体,获得稳定下调GPX2的高滴度慢病毒,检测敲低GPX2对细胞凋亡的影响。方法通过筛选具有显著干涉效果的si RNA序列,构建p Sico R-GPX2慢病毒干涉载体,包装病毒并感染人肝癌Hep G2细胞,分别用Western-blot和RT-PCR方法检测GPX2表达情况,应用流式细胞术分析敲低GPX2对人肝癌细胞凋亡的影响。结果成功构建p Sico R-GPX2干涉慢病毒载体并获得高滴度慢病毒颗粒,GPX2蛋白表达水平和RNA表达水平均有显著下调,且人肝癌细胞感染GPX2干涉慢病毒后对凋亡更加敏感,其原因可能是促凋亡蛋白Bax的活化和抗凋亡蛋白Bcl-2活性的抑制。结论成功构建人GPX2基因干涉慢病毒,为肝癌靶标治疗提供新的线索,为后续GPX2功能研究奠定基础。; 曹江平唐刘君张建宏詹轶群杨晓明葛常辉; 关键词：慢病毒 RNA干涉凋亡

肝细胞生成素205与细胞色素C的相互作用被引量：2: 2008年; 目的:应用酵母双杂交(yeast two hybrid,Y2H)和GST-Pull down技术鉴定肝细胞生成素205(hepatopoietin205,HPO205)与细胞色素C(cytochrome c,Cytc)间的相互作用.方法:采用PCR技术扩增HPO205和Cytc编码基因,分别将其构建Y2H质粒pDBLeu和pPC86的重组载体.应用Y2H技术将二者的重组质粒共转染酵母MaV203进行鉴定,同时用GST-Pulldown方法对其验证.结果:成功克隆HPO205和Cytc编码基因至Y2H载体和相应表达载体,包括pDBLeu-GRER、pDBLeu-CYCS、pPC86-GRER、pPC86-CYCS.经过Y2H鉴定发现,pDBLeu-GRER+pPC86-CYCS共转后能激活Ura和His两个报告基因,而pDBLeu-CYCS+pPC86-GRER共转则不能激活任何一个报告基因.GST-Pulldown实验显示,GST-CYCS能将HPO205沉淀下来,而GST空蛋白不能沉淀HPO205,证实HPO205与Cytc存在相互作用.结论:HPO205可能通过Cytc参与电子传递或/和细胞凋亡过程.; 储著朗王建杨永升唐刘君陈慧杨晓明汪思应; 关键词：细胞色素C 蛋白质相互作用酵母双杂交

大规模人类肝脏蛋白质相互作用网络研究: 肝脏承担了物质代谢、胆汁分泌、生物合成和解毒等重要生理功能。蛋白质相互作用是蛋白质执行功能的重要方式,也是细胞功能调控网络的结构基础。肝脏蛋白质相互作用网络的研究,不仅可以认识肝脏生理功能的分子调控机理,发现蛋白质互相联...; 唐刘君; 关键词：蛋白质相互作用酵母双杂交肝脏; 文献传递

肿瘤坏死因子受体相关因子家族成员间相互作用的初步研究被引量：1: 2011年; 目的探讨肿瘤坏死因子受体相关因子(TRAFs)各成员间的相互作用及各成员间的关系。方法利用PCR技术扩增出TRAFs;构建到pDBLeu、pPC86载体上,分别形成诱饵、猎物质粒;转化,扩增酵母菌;将诱饵、猎物菌液结合酵母双杂交阵列组合(Mating)技术筛选相互作用。最后用免疫共沉淀技术进行验证。结果成功构建TRAFs的酵母双杂交载体,酵母双杂交Mating技术筛选出11对相互作用,免疫共沉淀技术验证出,TRAF1和TRAF2、TRAF6有相互作用。结论 TRAFs各成员间存在着相互联系;TRAF1通过和TRAF6的相互作用可能直接影响TRAF6介导的通路。; 周扬帆王晓辉唐刘君李长燕王敏杨晓扬杨晓明汪思应; 关键词：相互作用

人类肝脏重要蛋白质相互作用连锁图研究进展: 肝脏是人体最大的代谢器官,在人体中具有不可替代的重要生理功能。蛋白质相互作用连锁图研究是揭示重要蛋白质未知功能的重要手段,是理解肝脏生理功能和分子机制的基础。根据肝脏的基因表达谱,我们选取了代谢、物质转运、氧化应激、信号...; 杨晓明王建许望翔虞东辉杨永升刘琼明周颖张翠莉吴志豪张万巧刘涛唐刘君原艳芝郝峰金超智贺福初; 文献传递

TRAF3在肝细胞肝癌中的表达及意义被引量：3: 2012年; 目的探讨肿瘤坏死因子受体相关因子3(TRAF3)在肝细胞癌(简称肝癌)发生、发展中的意义。方法采用免疫组化方法检测50例原发性肝癌组织、12例癌旁肝组织及10例正常肝组织中TRAF3蛋白的表达,分析其与肝癌的临床病理参数的关系。Western blot法检测TRAF3在肝癌高分化细胞系HepG2、低分化细胞系SMMC7721和人正常肝细胞系L-02中的表达差异。结果 TRAF3主要定位于细胞质,其阳性率在正常肝组织(100%)及癌旁组织(91%)明显高于肝细胞癌组织(52%)。TRAF3在肝癌的表达与临床分期相关,与患者性别、年龄、癌灶数目、肿瘤大小、瘤栓有无、乙肝表面抗原(HBsAg)阴阳性、甲胎蛋白(AFP)、肿瘤包膜是否完整均无关。TRAF3总蛋白在正常肝细胞系中的表达量明显高于肝癌细胞系,且在肝癌高分化的细胞系中表达量高于低分化细胞系。结论 TRAF3在肝癌中的表达明显下调,且在肝癌中的表达水平与肝癌的侵袭程度相关,提示TRAF3可能抑制肝癌的浸润和转移。; 查欣王晓辉唐刘君李娟邢小翠胡中倩杨晓明汪思应; 关键词：原发性肝细胞癌

TRAF6-GST融合蛋白在大肠杆菌中的表达及纯化被引量：2: 2011年; 目的:在大肠杆菌中表达肿瘤坏死因子受体相关因子6(TRAF6)与GST的融合蛋白并进行纯化。方法:采用PCR方法从肝文库中扩增编码TRAF6的DNA片段,将其插入原核表达载体pGEX-4T-2,构建GST-TRAF6原核表达载体,并转入大肠杆菌BL21(DE3)中,用IPTG诱导表达;用谷胱甘肽-琼脂糖珠亲和纯化表达的GST-TRAF6融合蛋白。结果:酶切鉴定和测序分析显示,长为1569 bp的TRAF6 DNA片段在pGEX-4T-2-TRAF6中的碱基序列、插入位点及读框正确,且位于表达载体的GST序列下游;经IPTG最佳浓度0.5 mmol/L诱导表达、亲和纯化后,获得了相对分子质量约85×103的GST-TRAF6融合蛋白。结论:构建了重组GST-TRAF6原核表达载体,获得了GST-TRAF6的大肠杆菌BL21表达菌株及GST-TRAF6融合蛋白,利于深入研究TRAF6的功能。; 孙利王晓辉关薇唐刘君王建杨晓明汪思应; 关键词：肿瘤坏死因子受体相关因子6 原核表达蛋白纯化

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