叶建强
- 作品数：80 被引量：220H指数：8
- 供职机构：教育部更多>>
- 发文基金：江苏高校优势学科建设工程资助项目国家自然科学基金国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生文化科学更多>>
- 鸡传染性贫血病毒VP3蛋白的原核表达及其单克隆抗体的研制被引量：1
- 2020年
- 本研究首先利用同源重组一步克隆法将鸡传染性贫血病病毒(CIAV)的VP3基因克隆到pGEX-6P-1原核表达载体上,经IPTG诱导及SDS-PAGE分析成功获得了重组蛋白rGST-VP3的表达.随即以纯化的重组蛋白rGST-VP3免疫Balb/c小鼠,通过脾细胞与SP2/0细胞融合以及间接免疫荧光(IFA)筛选,获得2株稳定分泌CIAV-VP3抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为CIAV-VP3-4D7和CIAV-VP3-4G8;亚型鉴定表明,CIAV-VP3-4D7和CIAV-VP3-4G8均为IgG1;效价测定发现,CIAV-VP3-4D7和CIAV-VP3-4G8的腹水间接免疫荧光效价分别为1:102400与1:12800;Western blot进一步证实,CIAV-VP3-4D7和CIAV-VP3-4G8均能识别重组蛋白rGST-VP3.本研究结果为后期研究VP3蛋白在CIAV致病中作用及其诱导凋亡分子机制奠定了坚实的物质基础.
- 史静柯王鹏霍臣智宋昊杨海蓉朱韩钰许文琳袁慧莎叶建强叶建强秦爱建钱琨
- 关键词：鸡传染性贫血病毒VP3蛋白原核表达单克隆抗体
- 国内活禽市场新型环形病毒AGV2的发现被引量：1
- 2015年
- 为了解国内鸡群是否存在新型环形病毒AGV2,研究对来自扬州的一个活禽市场的20份鸡羽囊样品进行了AGV2的PCR检测。通过对鸡羽囊DNA提取、PCR扩增以及序列分析,在20份样品中检测到4份阳性样品。测序比对发现,本研究检测到的国内AGV2序列与NCBI中发表的AGV2的同源性为95.7%~99.4%。并对一份阳性样品的PCR产物进行了TA克隆,测定了该PCR的灵敏度为2.7个拷贝数。这一结果不仅首次证明国内活禽市场存在AGV2,而且为进一步开展国内鸡群AGV2的分子流行病学及其致病性等研究奠定良好的基础。
- 张雨沈元朝田晓彦谢泉谢泉王雨蒙邵红霞秦爱建邵红霞
- 关键词：鸡群PCR
- 抗J亚群禽白血病病毒的鸡胚成纤维细胞系建立
- 将J亚群禽白血病病毒囊膜基因(ALV-J env)插入pcDNA3.1真核表达载体,构建成转移载体pcDNA-env,并转染鸡胚成纤维细胞系DF-1,通过Zeocin药物筛选获得转染阳性细胞。细胞经传30代后,冻存。13...
- 叶建强秦爱建邵红霞刘红梅金文杰刘岳龙
- 关键词：J亚群禽白血病病毒ENV基因细胞系抗病毒感染
- J亚群禽白血病病毒(ALV-J)ELISA检测方法的建立被引量：34
- 2006年
- 利用抗J亚群禽白血病病毒(ALV-J)囊膜蛋白特异性单克隆抗体JE9,建立了检测ALV-Jenv抗原抗体免疫复合物的ELISA方法。应用该方法检测SPF鸡血清、鸡抗禽流感H9亚型阳性血清、鸡沙门氏菌阳性血清、鸡腺病毒阳性血清、鸡新城疫阳性血清,结果均为阴性,无交叉反应;抗ALV-J阳性血清与ALV-J特异性单克隆抗体JE9能相互阻断;ALV-J阳性血清经酸处理后,ELISA检测的D490差值明显下降。对部分攻毒鸡血清样本及田间ALV-J阳性血清样本进行电镜观察,可见ALV-J样病毒粒子及ALV-J样免疫复合物。经与间接免疫荧光(IFA)检测ALV-Jenv抗体结果比较表明,建立的ELISA方法与IFA方法两者具有较好的群体符合率,群体符合率为8/9。这些结果表明,本研究建立的ELISA方法在ALV-J的诊断中具有很好的应用前景。
- 叶建强秦爱建邵红霞金文杰刘岳龙
- 关键词：禽白血病病毒亚群ELISA
- 鸡TRAF3基因的克隆表达及多克隆抗体的制备被引量：1
- 2022年
- 为探究鸡源肿瘤坏死因子受体相关因子3 (TRAF3)的生物学功能,对鸡源TRAF3基因进行克隆表达并制备其多克隆抗体。将鸡TRAF3基因分别克隆入原核表达载体pGEX-6P-1和真核表达载体pcDNA3.1中构建出重组原核表达载体pGEX-6P-1-TRAF3和重组真核表达载体pcDNA3.1-TRAF3。构建的原核表达载体转化入大肠埃希菌BL21后经IPTG诱导,SDS-PAGE分析表明获得GST-TRAF3的融合表达蛋白,且融合蛋白主要表达于包涵体中。将纯化的GST-TRAF3蛋白免疫小鼠制备抗GST-TRAF3多克隆抗体。间接免疫荧光及Western blot试验表明,所制备的抗TRAF3多克隆抗体不仅能与转染pcDNA3.1-TRAF3的DF-1及LMH细胞中表达的外源性TRAF3反应,而且能有效识别LMH细胞内源性的鸡源TRAF3蛋白。该研究中鸡TRAF3基因的克隆、表达及其多克隆抗体制备为后续研究鸡TRAF3的功能奠定了基础。
- 李春平李拓凡万志敏邵红霞秦爱建叶建强
- 关键词：原核表达真核表达多克隆抗体
- 马立克氏病毒CVI988的TK及gB基因启动子的扩增
- 2006年
- 根据GenBank公布的MDV GA株全基因组序列设计引物,以CVI 988/R ispens感染鸡胚成纤维细胞的基因组总DNA为模板,利用PCR的方法分别扩增了CVI 988/R ispens的TK及gB基因启动子基因,克隆入pGEM-T-easy载体并进行测序,结果表明CVI 988/R ispens的TK及gB基因启动子序列均存在TATA盒和CAAT盒等真核启动子所具有的保守序列,且与MDV GA株的相应基因序列完全一致,为进一步研究该启动子在MDV病毒载体中的表达调控提供了物质条件。
- 刘红梅叶建强秦爱建祁克宗
- 关键词：CVI
- 抗血清4型禽腺病毒纤突蛋白2的单克隆抗体研制及其部分特性研究被引量：7
- 2017年
- 近年血清4型禽腺病毒(Serotype 4 fowl adenovirus,FAdV-4)在国内鸡群流行,给养鸡业带来了巨大经济损失。目前尚无针对FAdV-4特异性单克隆抗体的制备及其应用报道。研究通过将FAdV-4全病毒免疫小鼠,以纤突蛋白2原核表达产物为筛选抗原,研制出了4株针对FAdV-4的单克隆抗体,分别命名为3C2、4A6、5C4、5H6。间接免疫荧光试验证明4株单克隆抗体不与所检测的血清8型禽腺病毒反应,也不与FAdV-4的纤突蛋白1反应,仅与FAdV-4的纤突蛋白2反应,并且单克隆抗体3C2在体外能有效抑制FAdV-4的感染。4株抗FAdV-4纤突蛋白2单克隆抗体的成功获得为研制FAdV-4快速诊断试剂盒及探究纤突蛋白2在FAdV-4致病机制中的作用奠定了基础。
- 王萍王伟康梁广成李拓凡高巍高巍呼高伟邵红霞秦爱建邵红霞
- 关键词：单克隆抗体
- 鹅星状病毒江苏分离株JSSQ遗传特征分析被引量：2
- 2022年
- 【背景】自2016年以来,我国山东、安徽、江苏、广东等养鹅地区暴发了一种以痛风为主要特征的急性传染病。【目的】研究引起江苏某鹅场雏鹅痛风的鹅星状病毒(goose astrovirus,GAstV)的基因组特征。【方法】从疑似患有痛风的雏鹅肝脏样品中分离到一株GAstV,命名为JSSQ,并对JSSQ全基因组序列及遗传特征进行分析。【结果】GAstV JSSQ株可在LMH细胞上稳定传代,无明显细胞病变;该毒株基因组全长7 175 nt,与其他已报道的鹅星状病毒参考株相似性为57.3%-99.1%。系统进化分析显示,JSSQ与参考毒株AHAU3亲缘关系最近,处于同一分支。重组分析显示,在GAstVJSSQ基因组中的第807和2818位点发生了2次重组,起源于GD AHAU2(major parent)和AHAU4(minor parent)。抗原表位分析显示,在ORF2区出现多处氨基酸突变,存在P64S、A224T、A228S、Q229P等独特突变,可引起抗原表位的变化。【结论】不同地区GAstV可能存在不同生物学特性,在防控中应予以注意。
- 徐梦璐吴少鹏马水锋邵红霞钱琨万志敏叶建强秦爱建
- 不同ELISA试剂盒检测牛结核病效果比较被引量：6
- 2016年
- 本研究对自行研制的检测牛γ干扰素的双夹心ELISA试剂盒与商品化试剂盒进行了比较。用自行研制的双夹心ELISA试剂盒对1255份经牛PPD刺激的牛全血培养上清样品进行了检测,结果发现94份阳性样品,检测阳性率为7.5%。同时用进口的ELISA试剂盒对其中的472份样品进行了对比检测,两者阳性符合率为97.6%,阴性符合率为96.4%,总符合率为96.6%。比较检测结果证明,自行研制的检测牛γ干扰素的双夹心ELISA试剂盒有很好的应用前景。
- 邵红霞赵巍黄健钱琨叶建强秦爱建
- 关键词：双夹心ELISA
- 血清4型禽腺病毒纤突蛋白的真核表达及其免疫反应性
- 2017年
- 研究对血清4型禽腺病毒(FAdV-4)表面纤突蛋白基因F1及F2进行了克隆及真核表达载体的构建,分别命名为pcDNA3.1-F1以及pcDNA3.1-F2。间接免疫荧光以及Western blot分析证明,所构建的表达载体表达的F1及F2均能与抗FAdV-4的阳性血清进行良好免疫反应。在间接免疫荧光试验中,转染pcDNA3.1-F1及pcDNA3.1-F2的293T细胞内均可见特异性亮绿色荧光;在Western blot中分别出现F_1及F_2特异性蛋白条带。纤突蛋白F1及F2真核表达载体构建、表达及其良好的免疫反应性,为进一步建立FAdV-4快速血清学诊断方法、探究纤突蛋白F_1及F_2在病毒感染致病中作用奠定了基础。
- 王伟康梁广成管雪冰张俊王萍张建军郑文铝邵红霞邵红霞叶建强
- 关键词：纤突蛋白基因克隆表达免疫反应性
