卢翌
- 作品数：19 被引量：51H指数：4
- 供职机构：山东大学医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金霍英东青年教师基金山东省卫生厅科研基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 肝内胆管癌hTR反义RNA及锤头状核酶基因真核表达载体的构建
- 2002年
- 用反转录PCR法 ,调取肝内胆管癌细胞内的端粒酶RNA(hTR)基因 ,并针对其序列设计反义RNA封闭基因及锤头状核酶切割基因序列 ,将其构建入真核表达载体pTriEx 4内。根据hTRcDNA序列设计引物 ,经RT PCR法从体外培养的肝内胆管癌细胞内调取hTR模板区基因 ,根据其测序结果 ,合成反义RNA基因及核酶基因 ,与经相应酶切的真核表达载体连接 ,酶切鉴定重组体的正确性。经RT PCR从细胞内调出 68bp序列 ,与hTRcDNA比较 ,与模板区域碱基序列一致 ,反义RNA与核酶基因重组子经酶切鉴定序列正确。肝内胆管癌细胞内端粒酶的活性明显增高 ,RT PCR法可调出其hTR基因有效片段 ;
- 靳斌姜希宏刘贤锡刘博刘师莲王伟胡海燕卢翌耿昭
- 关键词：真核表达载体真核表达反转录聚合酶链反应
- ODC单抗的制备及其在大肠癌检测中的应用被引量：1
- 2005年
- 目的:制备鸟氨酸脱羧酶(ODC)单克隆抗体并观察其在大肠癌检测中的意义。方法:以人ODC重组蛋白免疫小鼠,用杂交瘤细胞技术制备单克隆杂交瘤细胞,以ELISA和Westernblot法验证阳性单克隆细胞所产生的免疫球蛋白。免疫组化检测大肠癌组织中ODC的表达水平。结果:筛选出稳定分泌抗ODC单抗的细胞株,ELISA检测证明其所分泌单抗属于IgG2a型。免疫组化检测大肠癌组织中ODC的表达显示该单抗检测效果较好,大肠癌组织中ODC的表达水平明显高于正常组织(P<0.05)。结论:成功地制备出ODC单克隆抗体,为进一步研究ODC基因表达与大肠癌的发病机理及其诊断的关系打下了良好基础。
- 胡海燕姜春英张岩耿昭卢翌王晓明张冰刘贤锡
- 关键词：鸟氨酸脱羧酶结直肠肿瘤杂交瘤
- 重组腺病毒介导的RbAp48基因表达对人宫颈癌细胞生长、增殖的影响被引量：1
- 2014年
- 目的构建携带RbAp48基因序列的重组腺病毒,检测其对宫颈癌细胞系SiHa肿瘤细胞行为的影响。方法构建穿梭质粒pDC316-RbAp48,与骨架质粒pBHGloxΔE1,3Cre共转染HEK293细胞,获得复制缺陷型重组腺病毒Ad5-RbAp48,Ad5-RbAp48感染人宫颈癌细胞SiHa,采用免疫印迹法检测RbAp48表达,使用WST-8、细胞计数及软琼脂克隆形成实验,研究Ad5-RbAp48介导RbAp48高表达对SiHa细胞增殖与非锚定依赖性生长的影响。结果成功构建并鉴定重组腺病毒Ad5-RbAp48,Ad5-RbAp48感染SiHa细胞导致RbAp48高效表达,并有效抑制SiHa细胞增殖能力与非锚定依赖性生长能力。结论 RbAp48重组腺病毒可介导RbAp48高效表达,具有抑制宫颈癌细胞肿瘤细胞行为的作用。
- 张雯冯婷婷郑琳王红卢翌齐眉于修平唐伟赵蔚明
- 关键词：宫颈癌腺病毒基因表达
- 含变形链球菌PAcA基因的真核表达质粒pcDNA3.1-PAcA的构建与鉴定被引量：2
- 2002年
- 目的 :构建含有免疫刺激序列、可防止变形链球菌在牙面粘附的DNA疫苗。方法 :利用PCR技术由质粒pPAcA CTA2 B扩增编码PAcA的DNA片段 ;通过T A克隆技术将目的DNA片段克隆于载体pMD1 8 T ,鉴定插入方向后 ,将目的DNA从载体上释放 ,再克隆于含有CpG免疫刺激序列的真核表达载体pcDNA3 .1 ,构建出用作防龋疫苗的真核表达质粒pcDNA3 .1 PAcA。结果 :通过对重组质粒pcDNA3 .1 PAcA进行酶切图谱和DNA序列测定分析 ,证明真核表达重组质粒pcDNA3 .1 PAcA构建成功、阅读框架正确。结论 :利用T A克隆等技术可成功将编码PAcA的DNA片段克隆到含有免疫刺激序列CpG的真核表达载体pcDNA3 .1 ,构建出真核表达重组质粒pcDNA3 .1 PAcA。
- 杨小青姜广水张兆莲王晶杨丕山刘贤锡卞继峰胡海燕耿昭卢翌
- 关键词：疫苗构建CPG基元变形链球菌
- 乳头瘤病毒重组减毒沙门菌疫苗的构建及诱导黏膜免疫的研究被引量：4
- 2004年
- 卞继峰于修平胡海燕耿昭卢翌刘浩
- 关键词：乳头瘤病毒黏膜免疫
- 新型双启动子表达质粒pCMVnir的构建及其促进基因免疫效果的研究被引量：1
- 2005年
- 目的构建一种新型双启动子表达载体pCMVnir,研究其与胞内寄生菌联合应用促进基因免疫效果的作用。方法细菌硝酸盐还原酶基因B启动子nirB为厌氧诱导启动子,根据nirB启动子的结构,设计合成改良的nirB,置换三启动子载体pTriEx4中的T7Lac和P10启动子,而保留其CMVie启动子,获得携带CMVie和nirB双种启动子的新型载体pCMVnir,或称为pCN。构建pCNEGFP和pCNDsRed两种报告质粒,分别转化S.SL3261、E.coliDH5α和CHO等细胞,检测报告基因的表达情况以确定两种启动子的活性。pCNEGFP转化S.SL3261,接种BALBc小鼠,定期解剖小鼠收集黏膜相关淋巴组织,观察重组细菌和载体DNA在细胞中的定植及稳定性。免疫接种小鼠,并定期收集小鼠血清和阴道分泌物,以重组rEGFP为抗原,用ELISA方法研究其增强免疫应答的能力。并构建人乳头瘤病毒L1E7双启动子pCN16L1E7及对照单启动子载体pCMV16L1E7和pNir16L1E7,对比三者诱导黏膜免疫的差别。结果双启动子表达载体pCMVnir可在细菌和真核细胞中有效表达报告基因,在细菌中可形成肉眼可见的荧光菌落和沉淀,转染CHO等真核细胞能够表达荧光蛋白,表明pCMVnir载体的两种启动子都有活性,其中nirB活性是受兼性厌氧调控的。pCMVnir与细菌有较好的相容性,重组细菌可在动物体内有限复制和定植达6周,质粒可在细菌中稳定存在。以rEGFP为抗原检测发现pCNEGFP诱导的免疫反应高于常用的单启动子载体pCMVEGFP。人乳头瘤病毒双启动子载体pCN16L1E7诱导的免疫反应也高于其他单启动子载体。结论双启动子表达载体pCMVnir与减毒胞内寄生菌匹配应用,能够提高抗原表达量及增强基因免疫反应的强度。并可作为一般基因克隆和表达载体,特别是作为原核表达载体,不用添加诱导物,即可获得大量表达。
- 卞继峰于修平耿昭卢翌穆玉兰胡海燕刘浩
- 关键词：基因免疫启动子表达质粒免疫效果BALB/C小鼠原核表达载体
- 含有弓形虫表面抗原P22、P30复合基因的载体构建被引量：2
- 2002年
- 目的 选择弓形虫表面抗原P2 2、P30的有效基因片段 ,共同构建在同一克隆载体pUC19和表达载体 pGE MEXTM- 1上 ,并保证其连接方向及开放读码框的正确。方法 根据已发表P30基因序列 ,用PCR技术调取所需基因片段 ,P2 2基因片段来自重组质粒pGEX - 2T -v2 2 ,将两片段定向克隆于克隆载体 pUC19及表达质粒pGEMEXTM- 1上 ,用酶切及测序的方法对重组子进行鉴定。结果 酶切产物经电泳显示条带清晰 ,P2 2、P30基因片段的泳动位置分别在 4 4 6bp和 86 0bp的位置 ,与预计结果一致 ;测序结果表明插入的复合基因片段方向及序列均正确。结论 成功构建的含有P2 2、P30基因片段的质粒重组体 ,保证了两基因连接方向、序列及开放读码框的正确 ,为今后两基因的进一步复合表达研究奠定了基础。
- 王伟古钦民刘师莲何深一胡海燕李瑛卢翌耿昭
- 关键词：弓形虫P30基因
- 人ODC重组蛋白及其多抗的制备和临床应用被引量：3
- 2004年
- 目的 :构建鸟氨酸脱羧酶 (ODC)表达载体 ,表达ODC重组蛋白 ,制备其多克隆抗体并观察其在大肠癌诊断中的意义。方法 :从大肠癌组织中提取总RNA ,反转录PCR法扩增全长ODCcDNA ,将扩增的基因插入表达载体 pQE 30的BamHI和SalI酶切位点之间 ,DNA测序验证插入片段。将重组载体转化入宿主菌M 15中进行诱导表达 ,产生含 6 His tag的融合蛋白。WesternBlotting法检测表达蛋白。亲和层析法纯化融合蛋白 ,以该蛋白免疫小鼠制备多抗 ,免疫组化检测大肠癌组织中ODC的表达水平。结果 :酶切鉴定和DNA测序显示ODC重组表达载体中含有人ODCcDNA全长序列 ,与NIH基因库的人ODCcDNA比较有 99%的同源性。将该重组载体转化入大肠杆菌M 15中表达所得蛋白经WesternBlotting验证为目的蛋白。纯化融合蛋白 ,免疫小鼠获得多抗效价较高。免疫组化检测大肠癌组织中ODC的表达显示该抗体检测效果较好 ,大肠癌组织中ODC的表达水平明显高于正常组织 (P <0 .0 5 )。结论 :成功地构建了ODC表达载体、表达出ODC重组蛋白、制备出ODC多克隆抗体 ,为进一步研究结直肠癌的发病机理及其诊断和治疗方法打下了良好基础。
- 胡海燕刘贤锡姜春英张岩王晓明刘师莲耿昭卢翌张冰孙爱华
- 关键词：鸟氨酸脱羧酶结直肠肿瘤多克隆抗体
- 减毒沙门氏细菌为载体的人乳头瘤病毒双启动子DNA疫苗载体构建被引量：7
- 2002年
- 目的 :构建一种廉价高效的防治宫颈癌的人乳头瘤病毒新型双启动子DNA疫苗。方法 :设计合成细菌厌氧诱导启动子Nir ,含有FNR顺式反应元件、RBS和真核基因Kozak元件 ,插入pTriEx真核启动子CMVIE下游 ,构建pCMVnir双启动子载体。将人乳头瘤病毒 16型L1L7,融合基因 ,插入pCMVnir,制备pCMVnirL1E7,转化减毒沙门氏细菌SL32 6 1,厌氧诱导表达 ,SDS PAGE和Westernblot分析检测Nir启动子的活性。结果 :经DNA序列和限制性内切酶鉴定分析 ,成功构建了HPV双启动子DNA疫苗载体pCMVnirL1E7,转化沙门氏细菌SL32 6 1,厌氧条件下可诱导表达HPVL1E7蛋白质。结论 :成功构建了一种与胞内寄生细菌(减毒沙门氏细菌 )匹配的双启动子DNA疫苗新型载体 。
- 卞继峰于修平赵蔚明耿昭杨海宁于瑾李静胡海燕卢翌张茂修姜广水
- 关键词：人乳头状瘤病毒DNA疫苗沙门氏菌属
- 携带双启动子DNA疫苗载体的减毒沙门菌在体内定植及动态变化被引量：4
- 2004年
- 目的:探讨双启动子DNA疫苗载体在减毒沙门菌中的稳定性和重组减毒沙门菌在小鼠体内的定植及动态变化。方法:将人乳头瘤病毒双启动子DNA疫苗载体pCN鄄16L1E7转化减毒沙门菌S.SL3261熏经口服、鼻饲和皮肤途径免疫小鼠,在免疫后的第3、4、5、6周取小鼠粘膜相关淋巴组织,电镜观察细菌在组织中的定植;组织匀浆,细菌培养计数确定细菌的增殖;从细菌中提取质粒酶切鉴定以确定质粒的稳定性。结果:重组减毒沙门菌S.SL3261能在小鼠脾脏、肝脏和粘膜相关淋巴组织中定植,电镜可检测到多个细菌定植灶;重组减毒沙门菌可有效进入机体细胞并有限增殖达6周,在第4～5周菌落数量达到高峰,然后逐渐减少以至最后被清除。pCN鄄16L1E7可在减毒沙门菌中稳定存在,载体的产量和酶切图谱没有明显变化。结论:双启动子DNA疫苗载体pCN鄄16L1E7与减毒沙门菌有较好的相容性,能够在小鼠体内定植及有限增殖。口服、鼻饲和皮肤粘膜接种途径均可有效地将减毒沙门菌携带的DNA疫苗载体导入粘膜相关淋巴组织。
- 卞继峰于修平耿昭卢翌胡海燕王晓明
- 关键词：乳头状瘤病毒疫苗DNA沙门菌属
