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制备人Ⅱ型多巴胺受体cRNA探针检测帕金森病大鼠模型纹状体内Ⅱ型多巴胺受体基因表达的变化被引量：2: 2005年; 目的:获得单链、杂交结果稳定的人Ⅱ型多巴胺受体基因正义和反义RNA探针,检测人Ⅱ型多巴胺受体在帕金森病大鼠模型中表达的变化。方法:实验于2002-10/2003-06在首都医科大学神经科学研究所内完成。选出2,6,12周帕金森病大鼠模型60只,每组各20只,用来做原位杂交的组织处理;将已制备的pGEM-T-Easy-D2R质粒载体分别经ClaI、XbaⅠ限制性酶切反应得到线形质粒,再分别以T7和SP6聚合酶制备了人Ⅱ型多巴胺受体基因的反义和正义探针,通过斑点杂交检测探针的浓度;将反义和正义探针分别作等梯度稀释,分别与组织切片杂交,强度洗脱后,观察使对照正义链探针没有杂交信号,而反义探针杂交后也无本底的最适宜浓度,从而降低内缘性其他多巴胺受体亚型的干扰作用;用制备的最适宜浓度探针分别杂交帕金森病大鼠模型2,6,12周的组织切片,杂交后冲洗,免疫检测及呈色,观察帕金森病大鼠模型纹状体中Ⅱ型多巴胺受体表达。结果:①实验标记的人Ⅱ型多巴胺受体探针属cRNA探针,其特点为单链探针,杂交过程不需变性,可合成最可靠的反义链探针,杂交结果稳定,体外转录合成的cRNA探针长度也比较一致,其浓度分别为150,120mg/L。②将反义和正义探针分别等梯度稀释,分别与组织切片杂交,强度洗脱后,结果证明25mg/L浓度最适宜,对照正义链探针没有杂交信号,而反义探针杂交后也无本底。③原位杂交证实,反义探针能够与帕金森病大鼠模型纹状体中Ⅱ型多巴胺受体mRNA杂交。用反义探针标记的细胞中可见蓝色颗粒沉积,左右半球纹状体中标记细胞数在2周时没有变化,帕金森病大鼠损伤侧和健侧Ⅱ型多巴胺受体mRNA表达没有明显变化;6周时,损伤侧较健侧表达明显上调,12周时,损伤侧与健侧表达都下降且没有明显差别。结论:实验获得了人Ⅱ型多巴胺受体基因反义和正义cRNA探针,并得出无�; 赵焕英李良刘延英刘静孙晓红杨慧; 关键词：帕金森病受体原位杂交

神经细胞凋亡机制的研究进展:α-突触核蛋白与线粒体被引量：2: 2006年; 目的:在帕金森病的病理结构中常常存在反常聚集的α-突触核蛋白和线粒体功能失常,就神经退行性病变中α-突触核蛋白和线粒体功能失常的关系做一综述。资料来源:应用计算机检索Pubmed2000-01/2005-09的相关文章,检索词为“α-synuclein,mitochondriaandParkinson’sdisease”并限定语种为“English”。资料选择:对资料进行初审,查找全文的文献。纳入标准为:①与α-突触核蛋白的作用有关。②与线粒体和神经细胞凋亡有关。排除标准为较陈旧和重复研究的文章。资料提炼:共收集到349篇文章,其中30篇文献符合纳入标准。资料综合:在30篇文献中,15篇与α-突触核蛋白的作用有关;12篇与线粒体和神经细胞凋亡有关;3篇与α-突触核蛋白和线粒体的关系有关。以往的研究证明α-突触核蛋白是一种在神经退行性病变中起关键作用的毒性蛋白。但是近期研究表明,α-突触核蛋白可能具有双重作用。α-突触核蛋白与线粒体之间的相互作用可能是此种作用的关键。结论:α-突触核蛋白与线粒体之间存在复杂的相互作用。未来集中于α-突触核蛋白与线粒体之间的关系的研究可能对帕金森病的病因学研究提供一种新的探索。; 刘延英杨慧; 关键词：突触蛋白类线粒体帕金森病 Α-突触核蛋白

SH-SY5Y细胞α-突触核蛋白的过表达可部分抵抗鱼藤酮诱导的氧化应激被引量：5: 2006年; 帕金森病(Parkinson’sdisease,PD)的发病机制涉及到遗传和环境因素。环境因素通过线粒体导致氧化应激和α-突触核蛋白(α-synuclein)聚集,但其确切的作用机制尚不明确。本文利用过表达α-突触核蛋白-增强型绿色荧光蛋白(enhancedgreenfluorescentprotein,EGFP)的人多巴胺能神经母细胞瘤细胞株SH-SY5Y为模型,研究α-突触核蛋白对鱼藤酮诱导氧化应激的影响,从而进一步了解α-突触核蛋白和细胞存活之间的关系。(1)用荧光显微镜观察融合绿色荧光蛋白的α-突触核蛋白的表达情况;(2)用实时定量PCR检测α-突触核蛋白基因的表达;(3)用免疫细胞化学测定α-突触核蛋白的分布;(4)用不同浓度的鱼藤酮作用细胞后,以MTT法测细胞的活力、DCF法检测细胞的氧化应激状态、黄嘌呤氧化酶法检测超氧化物歧化酶的活力,并用流式细胞仪分析细胞的凋亡。实时定量PCR结果显示,α-突触核蛋白基因表达量在α-突触核蛋白过表达的细胞要高于SH-SY5Y细胞,在荧光显微镜下可见绿色荧光蛋白和α-突触核蛋白的表达。鱼藤酮使细胞活力下降、线粒体complexⅠ的活性降低,诱导细胞内氧化应激,而过表达α-突触核蛋白的细胞可以部分抵抗鱼藤酮的毒性作用,表现为细胞抗氧化能力迅速增高(P<0.05)和鱼藤酮诱导的细胞凋亡数目明显降低。本研究证明α-突触核蛋白对鱼藤酮产生的氧化应激有部分抵抗作用,而使过表达α-突触核蛋白的SH-SY5Y细胞对鱼藤酮的毒性作用表现出一定的耐受性。这种耐受性也可能是细胞对外界损害的一种代偿反应,从而促进细胞的存活。; 刘延英赵焕英赵春礼段春礼鲁玲玲杨慧; 关键词：Α-突触核蛋白氧化应激鱼藤酮帕金森病

过表达α-突触核蛋白对暴露于鱼藤酮的SH-SY5Y细胞作用的研究: 帕金森病(Parkinson'sdisease，PD)是一种常见的神经退行性疾病。它的典型神经病理形态学特征为中脑黑质多巴胺(dopamine，DA)能神经元进行性变性缺失和残存的神经元胞浆内出现嗜酸性包涵体-Lewy体...; 刘延英; 关键词：Α-突触核蛋白鱼藤酮神经退行性疾病; 文献传递

Ⅱ型人多巴胺受体逆转录病毒载体的构建及表达被引量：1: 2005年; 目的构建人全长D2R基因真核表达载体,研究D2R在帕金森病(PD)中的作用和机制。方法将D2RcDNA片段克隆于pLNCX2逆转录病毒载体,转染成纤维包装细胞系PT67,G418筛选单克隆后进行传代培养,通过原位杂交、免疫组织化学和Westernblot检测其表达效果。病毒上清再感染骨髓基质细胞(MSCs),免疫荧光检测D2R基因表达率。结果成功构建了逆转录病毒表达载体pLNCX2_D2R,原位杂交证实D2R基因在PT_67表达的阳性率为80%以上,免疫组织化学检测可见其蛋白分布在胞浆和胞膜,细胞裂解后Westernblot蛋白电泳可检测到约48·84kD的蛋白。经转染D2R基因的PT67细胞能分泌病毒并感染MSCs。结论逆转录病毒介导的D2R基因经PT67细胞包装后,能够产生病毒颗粒,收集含病毒颗粒的上清可进一步感染MSCs,这种经逆转录病毒介导的DR基因可用来作针对帕金森病进行基因治疗的研究。; 赵焕英赵春礼鲁玲玲鲁强刘延英杨慧; 关键词：多巴胺D2受体帕金森病基因治疗原位杂交

转染α-突触核蛋白的SH-SY5Y细胞增强对鱼藤酮毒性的耐受被引量：1: 2006年; 目的探讨α-突触核蛋白(α-synuc le in)在鱼藤酮处理的人类多巴胺能SH-SY5Y细胞内的作用。方法用脂质体转染的方法将-αsynuc le in基因转染入SH-SY5Y细胞内,并筛选稳定表达-αsynuc le in的细胞。经过不同浓度的鱼藤酮处理后,测定细胞活力、细胞内氧化应激和抗氧化能力。结果经鱼藤酮处理后,所有的细胞均表现为细胞活力下降和细胞内氧化应激增强。与正常SH-SY5Y细胞相比,过表达-αsynuc le in的细胞表现为较高的细胞活力和抗氧化能力(P<0.01)。结论α-synuc le in过表达可能通过增强SH-SY5Y细胞活力和抗氧化能力,来部分对抗鱼藤酮的毒性作用。; 刘延英赵焕英赵春礼杨慧; 关键词：Α-突触核蛋白线粒体

表达α-synticlein的SH-SY5Y细胞抵抗鱼藤酮诱导的氧化应激: 帕金森病(PD)的发病机制中涉及到遗传因素和环境因素双方面的作用。环境因素通过线粒体导致氧化应激和α-synuclein聚集,但其确切的作用机制尚不明确。本实验利用转染α-synuclein的SH—SY5Y细胞为模型,研...; 刘延英梁源珠帕尔·木拉提赵焕英杨慧; 关键词：Α-SYNUCLEIN基因氧化应激线粒体帕金森病; 文献传递

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