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卡波氏肉瘤相关疱疹病毒vGPCR具有巯基化酪氨酸的氨基端的表达和纯化(英文)被引量：2: 2011年; 卡波氏肉瘤相关疱疹病毒(KSHV)编码的G-蛋白偶联受体(vGPCR)基因是一种癌基因,在KSHV致瘤过程中起着重要作用.前期工作揭示vGPCR的氨基端Y26和Y28两位酪氨酸的巯基化作用对其致瘤性至关重要.本研究将vGPCR的氨基端(1～49位氨基酸)以及其yydd突变体分别同鼠Fc片段有机连接并命名为wt-vG-N-mFc和yydd-vG-N-mFc.采用该两种重组质粒分别转染HEK293T细胞,重组融合蛋白分别从全细胞裂解液和细胞培养液中被纯化出来,并被考马斯亮蓝和印迹杂交鉴定.放射自显影表明wt-vG-N-mFc而非yydd-vG-N-mFc具有巯基化修饰作用.含有巯基化酪氨酸的vGPCR氨基端融合蛋白的成功表达和纯化为其将来在研究vGPCR的致瘤性和以vG-PCR为靶定目标的临床治疗中的应用打下了基础.; 吴慧傅永明肖俊周曼冯浩

三倍体湘云鲫尾鳍细胞系3nFC及其构建方法和应用: 本发明公开了一种三倍体湘云鲫尾鳍细胞系3nFC，其保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO：C201732，其细胞形态为典型的成纤维状细胞，染色体众数为3n＝136，染色体数目正确，可以进行冷冻保存及细胞...; 冯浩刘少军傅永明肖军肖俊周维彭灵芝吴慧; 文献传递

多倍体鱼尾鳍细胞系的建立及研究: 异源四倍体鲫鲤、二倍体红鲫和三倍体湘云鲫组成了一个倍性明确、亲缘关系清晰的多倍体鱼研究体系,构建成了一个多倍体鱼分子免疫和功能基因研究平台。本文以二倍体红鲫、三倍体湘云鲫和异源四倍体鲫鲤为试验材料,分别无菌提取二/三/四...; 傅永明; 关键词：多倍体尾鳍细胞系; 文献传递

未巯基化vGPCR的胞外氨基端可降低hGRO-α在裸鼠中的致瘤性: 2012年; 卡波氏肉瘤相关疱疹病毒(KSHV)编码的G-蛋白偶联受体(vGPCR)是一种致瘤蛋白,它与KSHV相关恶性肿瘤的发生密切相关.本工作组前期研究发现,vGPCR胞外氨基端(N端)第26位和第28位酪氨酸(Y26和Y28)均具有巯基化修饰,且该巯基化修饰对于vGPCR在裸鼠中的致瘤性至关重要.hGRO-可结合巯基化的vGPCR,并通过自分泌促进其致瘤性.有趣的是,未巯基化的vGPCR突变体(yydd-vGPCR)削弱由hGRO-导致的肿瘤的发生.本研究表达和纯化了vGPCR的N端(wt-vGN)和未巯基化的vGPCR突变体的N端(yydd-vGN).放射性标记实验结果表明,wt-vGN而非yydd-vGN可结合[35S]标记的硫酸盐.在裸鼠实验中,稳定表达yydd-vGN的NIH3T3细胞而非稳定表达wt-vGN的NIH3T3细胞可强烈抑制hGRO-导致的肿瘤发生.本研究证明,未巯基化的vGPCR胞外N端的可降低hGRO-在裸鼠中的致瘤性.; 吴慧傅永明肖俊周曼周维冯浩; 关键词：致瘤性

转青鱼生长激素基因异源四倍体鲫鲤被引量：3: 2011年; 生态安全性是转基因鱼走向市场的瓶颈,通过转基因四倍体鱼同转基因二倍体鱼杂交获得不育的转基因三倍体鱼是解决该问题的有效途径之一.本研究构建了青鱼β-actin基因启动子和青鱼生长激素(GH)基因精确连接的"全鱼"基因pbcAbcGHc;并采用显微注射法将pbcAbcGHc导入异源四倍体鲫鲤受精卵.对照养殖结果表明,150日龄的转基因异源四倍体鲫鲤原代(P0)的体重及体长明显大于对照组.选择60尾P0代转基因异源四倍体鲫鲤,采用PCR方法检测出外源青鱼GH基因在P0代转基因四倍体尾鳍基因组DNA中的整合率为90%;对20尾雄性P0代转基因四倍体精液样本的PCR检测发现,13个样本具有外源青鱼GH基因的整合.在一尾生长速度显著的P0代转基因四倍体鲫鲤的肌肉、肝脏、肾脏和卵巢组织中可检测到外源青鱼GH基因的转录.本研究成功获得了具有明显生长优势的P0代转青鱼GH基因异源四倍体鲫鲤,为建立转青鱼GH基因异源四倍体鲫鲤纯系和研制不育的转基因三倍体鱼奠定了基础.; 冯浩傅永明骆剑吴慧刘筠刘少军; 关键词：异源四倍体生长激素青鱼生态安全

PP2A-Aα/β在金鱼及斑马鱼发育中的分化表达模式被引量：1: 2011年; 以金鱼和斑马鱼为研究对象,运用RT-PCR和Western Blot技术分析蛋白磷酸酶2A(PP2A)结构亚基A(PP2A-Aα/β)在金鱼、斑马鱼成体9种组织和12个发育时期胚胎中mRNA和蛋白水平的表达情况,得到其分化表达模式为:(1)在mRNA水平上,PP2A-Aα/β在金鱼、斑马鱼9种组织中具有较强表达;种属差异性和组织差异性均较大;结构亚基A的两亚型Aα和Aβ的表达存在差异。(2)在蛋白水平上,PP2A-Aα/β在金鱼、斑马鱼9种组织中均有表达;种属差异性不大但出现明显的组织差异性。(3)PP2A-Aα/βmRNA在金鱼和斑马鱼卵裂期到囊胚期胚胎中大量存在,PP2A-AαmRNA在金鱼眼色素期量剧增推测其对金鱼眼色素的形成至关重要。(4)PP2A-Aα/β基因在金鱼、斑马鱼12个发育时期胚胎中均有较高水平的蛋白存在,提示其为维持胚胎的正常发育发挥重要作用。; 刘姣付淑君胡雯峰刘方元傅永明唐鸿钊刘文彬肖亚梅刘筠李万程; 关键词：蛋白磷酸酶2A 去磷酸化金鱼斑马鱼

二倍体红鲫尾鳍细胞系2nFC及其构建方法和应用: 本发明公开了一种二倍体红鲫尾鳍细胞系2nFC，其保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO：C201731，其细胞形态为典型的成纤维状细胞，染色体众数为2n＝96，染色体数目正确，可以进行冷冻保存及细胞复苏...; 冯浩刘少军傅永明肖军肖俊周维彭灵芝吴慧; 文献传递

转青鱼生长激素基因日本白鲫原代的研制被引量：2: 2011年; 构建由青鱼β-actin基因启动子和青鱼生长激素(GH)基因精确拼接的"全鱼"基因pbcAbcGHc,并采用显微注射法将pbcAbcGHc导入日本白鲫的受精卵中.对照养殖结果显示150日龄P0代转基因日本白鲫的平均体重是对照组1.37倍,平均体长是对照组1.07倍.选择30尾P0代转基因日本白鲫,PCR方法检测出外源青鱼GH基因在P0代转基因日本白鲫尾鳍基因组DNA中的整合率为90%;在一尾生长速度显著的转青鱼GH基因日本白鲫P0的肌肉、肝脏两种组织中可检测到外源青鱼GH基因的转录.P0代转青鱼GH基因日本白鲫P0的成功获得为建立转青鱼GH基因日本白鲫纯系奠定了基础.; 冯浩傅永明吴慧刘筠刘少军; 关键词：转基因日本白鲫生长激素

异源四倍体鲫鲤尾鳍细胞系4nF及其构建方法和应用: 本发明公开了一种异源四倍体鲫鲤尾鳍细胞系4nF，其保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO：C201733，其细胞形态为典型的成纤维状细胞，染色体众数为4n＝172，染色体数目正确，可以进行冷冻保存及细胞...; 冯浩刘少军傅永明肖军肖俊周维彭灵芝吴慧; 文献传递

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傅永明