于金红
- 作品数：3 被引量：8H指数：1
- 供职机构：中国海洋大学水产学院海水养殖教育部重点实验室更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划教育部“新世纪优秀人才支持计划”更多>>
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- 凡纳滨对虾C-型凝集素基因的原核表达与免疫作用
- 2013年
- 为研究凡纳滨对虾C-型凝集素的免疫功能,实验利用原核表达系统对凡纳滨对虾C-型凝集素基因的开放阅读框进行了重组表达,并通过纯化分离获得重组目的蛋白,采用血细胞悬浮培养的方法,研究了重组C-型凝集素对凡纳滨对虾血细胞免疫作用的影响。实验梯度设置为对照组和重组C-型凝集素蛋白(1.0 mg/mL),分别在0、3、6、9、12、24 h取培养的血细胞和培养液进行免疫相关指标的测定。结果表明,重组C-型凝集素经SDS-PAGE分析显示在39 ku处有显著诱导条带,与预测的分子量大小基本一致,Western-blotting分析可以与anti-His抗体特异性结合,从而证明C-型凝集素重组蛋白在大肠杆菌中成功表达。重组C-型凝集素对大肠杆菌具有明显的凝集作用,对凡纳滨对虾血细胞数量、存活率和吞噬率影响显著;培养基酚氧化酶活力在培养3～12 h内呈峰值变化,于9 h时达到最大值。研究表明,C-型凝集素不仅具有凝集作用,而且还能激活酚氧化酶原系统,具有重要的免疫防御作用。
- 于金红潘鲁青张辉
- 关键词：凡纳滨对虾原核表达免疫作用
- 凡纳滨对虾（Litopenaeus vannamei）C-型凝集素免疫作用机制的研究
- 本文研究了C-型凝集素对凡纳滨对虾（Litopenaeus vannamei）免疫作用调节机制的影响。主要探讨了（1）凡纳滨对虾C-型凝集素的原核表达；（2）脂多糖、重组C-型凝集素蛋白对凡纳滨对虾血细胞酚氧化酶原激活系...
- 于金红
- 关键词：凡纳滨对虾原核表达免疫作用血细胞
- 文献传递
- 三疣梭子蟹C-型凝集素的原核表达和活性检测被引量：8
- 2013年
- 通过RT-PCR扩增三疣梭子蟹C-型凝集素(C-type lectin like-domain protein,CTLD)基因序列,将目的基因克隆入质粒pET32a,构建原核表达重组质粒pET32a-CTLD。将重组质粒转化入大肠杆菌BL21中,通过IPTG诱导CTLD的表达,对其表达产物进行SDS-PAGE和Western blot检测。用His GraviTrap Ni亲和层析柱及超滤离心管纯化目的蛋白,并对其进行活性检验。结果表明,构建得到CTLD基因的原核表达载体,双酶切鉴定得到与预期片段相符的外源基因插入片段,经测序与目的序列完全一致;诱导表达出相对分子质量(M)39 600的目的蛋白,经SDS-PAGE和Western blot检测,融合蛋白成功表达;重组C-型凝集素对兔的红细胞没有明显的凝集作用,但对小鼠红细胞的凝集效价是22,而对所选5种细菌的凝集作用存在差异,其中对大肠杆菌具有明显的凝集作用,而对溶藻弧菌、哈维氏弧菌、鳗弧菌和金黄色葡萄球菌均无凝集现象。本研究结果为进一步研究C-型凝集素在免疫防御中的作用与地位提供依据。
- 于金红潘鲁青
- 关键词：三疣梭子蟹原核表达活性检测
