黄红亮
- 作品数：18 被引量：105H指数：5
- 供职机构：华中农业大学动物医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金中国博士后科学基金国家科技攻关计划更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>
- H5亚型禽流感病毒血凝素单克隆抗体的制备及鉴定
- 2006年
- 以禽流感病毒A／Chicken／Hubei／327／2004（H5N1）免疫Balb／c小鼠，将免疫鼠脾细胞与SP2／0骨髓瘤细胞融合，用血凝抑制试验筛选细胞培养上清，采用有限稀释法对阳性孔进行克隆，3次克隆后获得7株能稳定分泌抗H5亚型禽流感病毒血凝素单克隆抗体的杂交瘤细胞株，分别命名为1C4，1D4，1E12，2E11，4C12，4G2和5E12。细胞培养上清HI效价为2^4～2^7，腹水HI效价可达2^10～2^18。所有单抗与禽流感H7和H9亚型标准血凝抗原，新城疫病毒和鸡传染性支气管炎病毒无交叉反应。在细胞上的中和试验显示具有较高的中和效价，获得的单克隆抗体可在禽流感流行病学的监测中发挥重要作用。
- 但汉并刘芳芳黄红亮金梅林
- 关键词：禽流感病毒血凝素单克隆抗体
- 胸膜肺炎放线杆菌毒素apxIVA基因的克隆与表达及间接ELISA方法的建立被引量：18
- 2005年
- 参照APP血清 1型apxIVA基因序列合成了一对特异性引物 ,从本实验室分离鉴定的胸膜肺炎放线杆菌 (APP)血清 2型中扩增了apxIVA基因 5′端 2 4 4 5bp的片段。将该片段克隆到原核表达载体pET_2 8b的T7启动子下游 ,与 6×HisTag融合 ,再转化大肠杆菌BL2 1(DE3) ,在IPTG的诱导下表达大小约 90kD的蛋白。表达产物以包涵体的形式存在 ,且能与APP标准阳性血清发生特异性反应。将包涵体变性和复性后包被酶标板建立了间接ELISA方法 (ApxIVA_ELISA) ,特异性良好。用ApxIVA_ELISA检测猪胸膜肺炎三价 (1、2和 7型 )灭活菌苗和基因工程类毒素菌苗免疫猪血清抗体均为阴性 ,而 1、2、7型APP活菌感染动物的血清抗体均为阳性。实验证明 ,ApxIVA_ELISA不仅可以用于检测所有血清型APP的抗体 ,而且还可以用于APP自然感染猪和灭活菌苗免疫猪的鉴别诊断。
- 黄红亮周锐陈美玲刘建杰徐晓娟陈焕春
- 关键词：胸膜肺炎放线杆菌APXIVELISA
- 融合蛋白pIL6-IL2在E.coli中的表达及活性鉴定被引量：1
- 2004年
- 白细胞介素 2 (interleukin 2 ,IL 2 )与白细胞介素 6(interleukin 6,IL 6)能分别刺激T淋巴细胞增殖与B淋巴细胞分泌免疫球蛋白 ,从而促进动物机体的细胞免疫与体液免疫 ;另外IL2与IL6在发挥生物学活性时还有相互协同作用。因此 ,将去除信号肽的猪白细胞介素 6(pIL 6)与猪白细胞介素 2 (pIL 2 )cDNAs序列通过一段Linker相连 ,克隆到E .coli表达载体pPET 2 8a中。该融合蛋白IL6 IL2在E .coli表达菌BL2 1 (DE3)中获得成功表达 ,SDS PAGE分析分子量约为40kDa ,表达量达到总菌体的 66.2 6%。用IL6依赖的B9细胞与IL2依赖的CTLL细胞增殖试验进行融合蛋白IL6 IL2的生物活性检测 ,其活性可分别达到 0 8× 1 0 3 U mg和 6 4× 1 0 3 U mg。
- 严琳卿柳庭贝为成黄红亮陈焕春
- 关键词：融合蛋白T淋巴细胞增殖SDS-PAGE分析
- 猪传染性胸膜肺炎的诊断与防治技术研究
- 猪传染性胸膜肺炎是由胸膜肺炎放线杆菌(Actinobacillus pleuropneumoniae,APP)引起的一种猪的呼吸道传染病,每年给世界养猪业造成严重的经济损失。由于APP血清型众多,各国和各地区流行的优势血...
- 周锐陈焕春黄红亮徐晓娟刘建杰贝为成王贵平
- 抗伪狂犬病毒Ea株单克隆抗体的制备及鉴定被引量：5
- 2005年
- 将伪狂犬病毒Ea株纯化后免疫雌性Balb/c小鼠,取其脾细胞与SP2/O的骨髓瘤细胞融合,用间接酶联免疫吸附试验(ELISA)进行筛选,获得了2株抗PRV的单克隆抗体的杂交瘤细胞,分别命名为3G7E3和4A6F5,其细胞培养上清及小鼠腹水效价(ELISA)分别为1:212、1:212及1:100×212、1:100×212。特异性试验和免疫荧光结果显示,3G7E3和4A6F5仅与PRV反应,而与PPV、PRRSV、JEV和HCV等病毒不发生交叉反应;用单抗建立的夹心ELISA试验能检出伪狂犬病毒。表明本研究所获得的2株单抗是PRV特异性的。这2株分泌抗PRV单抗的杂交瘤细胞株的获得为进一步建立准确快速的抗原检测方法奠定了基础。
- 汪招雄何启盖黄红亮刘正飞陈焕春
- 关键词：单克隆抗体间接免疫荧光试验
- 猪圆环病毒2型ORF2基因在昆虫细胞中的表达及其特性被引量：16
- 2005年
- 利用BactoBac杆状病毒表达系统将圆环病毒2型的ORF2全基因克隆到杆状病毒转移载体pFastBacTM1中,获得重组转移载体pFastOFR2,再将其转化进含穿梭载体Bacmid的感受态细胞DH10Bac中,发生转座作用,经蓝白菌落筛选得到含ORF2基因的重组穿梭载体Bac.ORF2,以脂质体介导的方法将重组穿梭载体转染sf9细胞,获得重组病毒,命名为Ac.ORF2。间接免疫荧光分析表明,PCV2阳性血清能使Ac.ORF2感染的sf9昆虫细胞呈强的荧光着色;SDSPAGE与Westernblotting分析可见大小约为28kD的特异性带,表明Ac.ORF2在sf9细胞中成功表达了PCV2ORF2蛋白。将该表达蛋白纯化并经磷钨酸负染后,通过电镜观察可见形态与PCV2病毒粒子相似的病毒样颗粒(VLPs),其中某些颗粒由于中心浓染而似空衣壳,其直径也为17nm左右。
- 樊惠英陈焕春佟铁铸琚春梅吕建强黄红亮
- 关键词：猪圆环病毒2型病毒样颗粒
- 猪圆环病毒1型ORF2基因的克隆与序列分析被引量：1
- 2005年
- 参照Genbank上公开发表的PCV1 全基因序列设计引物,以质粒pSK PCV为模板扩增出PCV1 ORF2基因,插入pMD18 T载体,对筛选出的阳性质粒进行测序,将测序结果同Genbank上发表的PCV1 基因序列相比较,同源性达97%,再与Genbank 上发表的PCV2 的ORF2 基因序列相比较发现PCV1 ORF2 和PCV2 ORF2的差异表现在两者在核苷酸序列的2个部位互相存在基因缺失现象。将推导出的PCV1 ORF2 的氨基酸序列同PCV2 ORF2进行比较,发现二者在几个功能区相当保守,尤其是N 末端的核定位序列、N 糖基化位点以及酪氨酸磷酸化位点。
- 陈美玲陈焕春宋云峰黄红亮
- 关键词：猪圆环病毒1型ORF2基因克隆
- 猪传染性胸膜肺炎的诊断与防治技术研究
- 猪传染性胸膜肺炎是由胸膜肺炎放线杆菌(Actinobacilluspleuropneumoniae,APP)引起的一种猪的呼吸道传染病,每年给世界养猪业造成严重的经济损失.由于APP血清型众多,各国和各地区流行的优势血清...
- 周锐陈焕春黄红亮徐晓娟刘建杰贝为成王贵平
- 关键词：放线杆菌疫苗病原检测血清学诊断
- 猪传染性胸膜肺炎的诊断与防治技术研究
- 猪传染性胸膜肺炎是由胸膜肺炎放线杆菌(Actinobacillus pleuropneumoniae,APP)引起的一种猪的呼吸道传染病,每年给世界养猪业造成严重的经济损失。由于APP血清型众多,各国和各地区流行的优势血...
- 周锐陈焕春黄红亮徐晓娟刘建杰贝为成王贵平
- 文献传递
- 抗猪圆环病毒Ⅲ型ORF2蛋白单克隆抗体的制备及鉴定被引量：18
- 2005年
- 利用本室构建的质粒PGEX-ORF 2转化BL 21(DE3),经IPTG诱导表达,得到PCV 2-ORF 2的重组蛋白,经复性纯化后作为免疫原,采取常规免疫与体外脾脏免疫结合的方式免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与Sp2/0的骨髓瘤细胞融合,经间接酶联免疫吸附试验(EL ISA)筛选,获得了2株抗PCV 2-ORF 2蛋白的单克隆抗体的杂交瘤细胞,分别命名为3B 2F 4和9C 3D 2,其细胞培养上清效价分别为1∶1 024、1∶512,小鼠腹水效价分别为1∶204 800、1∶102 400。EL ISA结果显示,3B 2F 4和9C 3D 2仅与融合表达的PCV 2-ORF 2蛋白反应,而与PGEX-KG表达的蛋白、猪细小病毒(PPV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)不反应,说明此2株单抗特异性好。间接免疫荧光结果显示,3B 2F 4和9C 3D 2能与PCV 2发生反应,而不与PCV 1发生交叉反应,表明所获得的2株单抗是PCV 2型特异性的。这2株单抗的获得为进一步研究PCV 2-ORF 2基因的功能,及建立准确快速的鉴别PCV 1和PCV 2的诊断方法提供了强有力的手段。
- 陈美玲陈焕春黄红亮琚春梅宋云峰
- 关键词：单克隆抗体
