高明勇
- 作品数：27 被引量：48H指数：4
- 供职机构：深圳市第二人民医院更多>>
- 发文基金：深圳市科技计划项目广东省自然科学基金深圳市科技局课题更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- PKP在治疗骨质疏松性脊柱压缩性骨折的应用
- ＜正＞PKP 是在 PVP 的基础上新开展的一种治疗疼痛性椎体压缩性骨折的有效方法,它是应用一种可膨胀性球囊（Inflatable bone tamp,IBT）经皮椎弓根穿刺置入椎体,充气扩张后并在椎体内形成一个空腔,注...
- 陈扬李振宇闫洪印高明勇余铮颜滨
- 文献传递
- 血管内皮生长因子缓释微粒对大鼠脊髓缺血的实验研究被引量：1
- 2006年
- 目的研究血管内皮生长因子对大鼠脊髓缺血的修复作用。方法建立大鼠脊髓缺血模型,经蛛网膜下腔插管注射VEGF,通过展爪反射,趾间距,脊髓诱发电位(SEP),运动诱发电位(MEP)评定,观察修复情况。结果VEGF可使伤后SEP、MEP提早出现,改善后肢运动功能。结论VEGF对大鼠脊髓缺血修复具有促进作用。
- 陈扬肖建德李振宇杨雷罗新乐高明勇周文玉
- 关键词：血管内皮生长因子
- 胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)在大鼠骨髓基质干细胞中的表达被引量：3
- 2005年
- 目的构建表达外源性胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)的转基因大鼠骨髓基质干细胞(BMSCs),拟应用于脊髓损伤的基因治疗研究。方法提取新生大鼠肾组织mRNA,用逆转录PCR法扩增GDNF全长cDNA,构建其真核表达载体PEG-GFP-GDNF,酶切及测序鉴定;然后转染原代培养的大鼠BMSCs,荧光免疫细胞化学及细胞形态学检测GDNF的表达。结果扩增到全长687bp序列准确的GDNF编码片段,并在GDNF转基因原代大鼠BMSCs中检测到重组GDNF的表达。结论体外可构建成功表达GDNF的转基因BMSCs,有望应用于脊髓损伤等中枢神经系统疾病的治疗研究。
- 高明勇肖建德李振宇郑启新闫洪印田长庆
- 关键词：胶质细胞源性神经营养因子转基因大鼠全长CDNAGDNF
- 脊髓源星形胶质细胞GFAP表达抑制真核表达载体构建及最佳短发夹样RNA分子筛选
- 2007年
- 目的构建并筛选大鼠胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)表达抑制短发夹样RNA (shRNA)真核表达载体。方法针对GFAP基因全编码序列设计并合成三对9 bp茎环结构、19 bp干扰序列特异性shRNA模板,体外定向克隆构建特异性重组质粒真核表达载体;通过体外大鼠脊髓源星形胶质细胞GFAP表达抑制模型,脂质体介导RNA干扰分子转染,实时荧光定量RT-PCR及Western blot技术观察RNA干扰后原代星形胶质细胞GFAP表达抑制效果,筛选最佳GFAP表达干扰抑制真核表达载体。结果序列测定证实GFAP-shRNA重组质粒真核表达载体构建成功,三对shRNA模板在mRNA及蛋白表达水平抑制靶基因表达效率分别为81%、63%、56%。结论高效率的GFAP-shRNA真核表达载体存大鼠原代星形胶质细胞GFAP表达抑制模型中能高效抑制GFAP基因表达,为后续多靶点RNA干扰技术在脊髓损伤胶质瘢痕抑制基因治疗中的应用奠定了前期基础。
- 李振宇高明勇肖建德闫洪印
- 关键词：胶质原纤维酸性蛋白小干扰RNA
- 胶质细胞源性神经营养因子与转化生长因子β1联合诱导大鼠脊髓源性神经干细胞的分化特点
- 2007年
- 目的:观察胶质细胞源性神经营养因子与转化生长因子β1体外联合诱导对脊髓源性神经干细胞分化的影响,为了解神经干细胞在体内多因素环境下的分化表现提供实验依据。方法:实验于2005-10/2006-09在南方医科大学附属深圳医院中心实验室完成。①碱性成纤维细胞生长因子,表皮生长因子,胶质细胞源性神经营养因子,转化生长因子β1(PeproTech);胎牛血清(Hyclone);神经巢蛋白多抗(武汉博士德);胶质纤维酸性蛋白多抗,神经丝蛋白单抗(Sigma)。②选用清洁级孕16d的SD大鼠10只,无菌条件下取出胚胎,进行脊髓源性神经干细胞的分离培养。基础培养基组成:含青霉素、链霉素、两性霉素B及体积分数为0.02B27添加液的DMEM/F12。③原代培养1周后,获取体外稳定增殖的鼠脊髓源性神经干细胞克隆,在基础培养基中加入体积分数为0.1的胎牛血清作为对照。同时设立碱性成纤维细胞生长因子组、转化生长因子β1组、胶质细胞源性神经营养因子+转化生长因子β1组,换用诱导培养基,即分别在基础培养基中加入20μg/L碱性成纤维细胞生长因子、2μg/L转化生长因子β1、10μg/L胶质细胞源性神经营养因子+2μg/L转化生长因子β1。观察在不同因子诱导情况下脊髓源性神经干细胞的分化行为,免疫细胞化学染色标记神经元与星状胶质细胞的表达。④通过荧光激发流式细胞仪分选技术对分化细胞计数,检测不同诱导环境下神经干细胞分化为神经元及星状胶质细胞的阳性百分率。结果:①细胞分化的形态学观察:分化早期可见神经球贴壁,大量细胞向四周爬出,1周后迁徙的大部分细胞完全贴壁,完成分化过程。在细胞密度较低区域可辨认出3种神经细胞类型:神经元样细胞、星状胶质样细胞、寡突胶质样细胞。②神经干细胞免疫组织化学检测:血清对照组、转化生长因子β1组存在大量胶质纤维酸性蛋白�
- 李振宇高明勇闫洪印白润涛韩漫夫余铮
- 关键词：神经生长因子类转化生长因子Β
- 特异性抑制IL－6受体蛋白表达的小干扰RNA分子表达载体及其构建方法与用途
- 本发明公开了一种特异性抑制IL－6受体蛋白表达的小干扰RNA分子表达载体及其构建方法与用途。其目的是提供一种抑制IL－6受体基因表达的小干扰RNA的表达载体与其作为临床治疗性药物的应用。该小干扰RNA是正义链为序列表中的...
- 李振宇高明勇肖建德闫洪印
- 文献传递
- 神经干细胞转染胶质细胞源性神经营养因子基因后的分化表现被引量：5
- 2005年
- 目的观察转基因神经干细胞(NSC)体外外源基因的表达及转基因后的分化。方法体外转基因筛选得到稳定表达胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)的脊髓源神经干细胞系(SP-NSC),通过流式分选(FACS),比较转基因前、后及血清对NSC分化为神经元及神经胶质细胞比例的变化;并采用Westernblot法检测传代后目的基因的表达。结果转基因后GDNF表达至少能稳定到转基因后6周;转基因后NSC分化为神经元的比例由转基因前(53.9±3.5)%提高到转基因后的(67.5±1.2)%,而血清组胶质细胞分化明显。结论SP-NSC转染GDNF后能稳定表达目的基因,转基因能显著增加后裔细胞中神经元比例,为转基因治疗中枢神经系统疾病研究奠定了基础。
- 高明勇肖建德郑启新李振宇闫洪印郭小东陈扬
- 关键词：神经干细胞胶质源性神经营养因子分化胶质细胞源性神经营养因子细胞转染转基因治疗
- 应用SSE钉钩系统复位固定植骨直接修复峡部裂
- 目的探讨应用 SSE 钉钩系统患椎自身固定治疗腰椎峡部裂的临床疗效。方法 2003年1月-2005年12月,应用 SSE 钉钩系统通过患椎椎弓根与椎板间复位加压固定治疗腰椎峡部裂患者22例。通过总结手术前后 VAS 评分...
- 闫洪印高明勇李振宇陈扬
- 关键词：峡部裂内固定
- 文献传递
- 腕“鼻烟窝”部动静脉内瘘在血液透析中的临床研究被引量：1
- 2005年
- 目的探讨鼻烟窝动静脉内瘘在维持性血液透析中的临床应用.方法采用显微外科技术对101例慢性肾功能衰竭血液透析患者行直接动静脉内瘘术.结果 101例手术无1例失败,其穿刺使用率为97.8%,透析血流量达180～250ml/min.结论鼻烟窝动静脉内瘘制作简便,远期通畅率高,并发症少,是血液透析最佳的永久性血管通路.
- 陈扬马俊杰李昂高明勇罗新乐
- 关键词：鼻烟窝动静脉内瘘慢性肾功能不全血液透析
- RNA干扰应用于抑制脊髓损伤急性期白细胞介素6受体表达的实验(英文)
- 2007年
- 背景:由于中枢神经损伤后局部微环境病理生理机制极其复杂,尤其急性期炎性反应及继发胶质瘢痕形成对有效轴突再生、局部神经细胞再生排列及局部干细胞增殖迁徙影响极大,成为早期阻碍神经修复的根本原因,故如何有效拮抗损伤区急性期炎性损伤因素,优化神经再生微环境是目前脊髓损伤修复的重要策略之一。目的:应用大鼠脊髓损伤模型,设计构建并筛选最佳白细胞介素6受体α表达抑制shRNA腺病毒表达载体。设计:重复测量实验。单位:深圳市第二人民医院脊柱外科。材料:选用健康Wistar大鼠40只,雌雄不拘,鼠龄8～10周。兔抗鼠GFAP一抗购自Santa Cruz公司,siRNA构建真核表达质粒pGenesil(携带绿色荧光表达系统)购自武汉晶赛生物工程技术公司。方法:实验于2006-11在武汉同济医学院基础医学部免疫教研室开放实验室及深圳市第二人民医院医学实验中心完成。针对白细胞介素6受体α基因编码序列设计并合成三对9bp茎环结构19bp干扰序列特异性shRNA模板,体外构建带绿色荧光蛋白的重组腺病毒表达载体;并建立大鼠急性脊髓损伤模型,损伤后12h局部注射编码shRNA重组腺病毒,通过实时荧光定量RT-PCR及Western blot技术,观察RNA干扰后损伤脊髓局部白细胞介素6R表达抑制效果,筛选最佳抑制白细胞介素6R表达的腺病毒表达载体。主要观察指标:RNA干扰后损伤脊髓局部IL-6RRNA表达、蛋白表达水平抑制效果。结果:序列测定证实白细胞介素6R-shRNA重组腺病毒表达载体构建成功,通过实时荧光定量RT-PCR,Western blot技术筛选出最佳白细胞介素6R-shRNA效应腺病毒表达载体,在mRNA及蛋白表达水平抑制白细胞介素6R基因表达效率分别为49%和56%。结论:构建并筛选成功的白细胞介素6R-shRNA效应腺病毒表达载体,在大鼠急性脊髓损伤模型中能高效抑制白细胞介素6R基因表达。
- 高明勇肖建德李振宇闫洪印余铮田长庆陈扬顾洪生
- 关键词：脊髓损伤RNA干扰腺病毒
