韩露
- 作品数：14 被引量：14H指数：3
- 供职机构：中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家科技攻关计划国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 不同剂量羊瘙痒因子263K颅内感染仓鼠临床终末期脑中GFAP表达的研究
- 2008年
- 目的研究不同剂量羊瘙痒因子263K经颅内注射感染仓鼠后，在发病的终末期星形胶质细胞增生程度是否与注射剂量及潜伏期长短有关。方法以胶质纤维酸性蛋白（glial fibrillary acidic protein，GFAP）作为星形胶质细胞增生的分子标志物，采用Western Blot和免疫组化方法检测感染仓鼠终末期脑匀浆和脑组织病理切片中的GFAP表达，经定量分析比较各感染剂量组间是否存在差异。结果与正常对照相比，不同剂量感染仓鼠发病终末期脑组织GFAP阳性细胞数量和总GFAP含量均明显升高，但各感染剂量组间无显著差异。结论不同感染剂量羊瘙痒因子263K经颅内注射感染仓鼠在发病终末期脑中星形胶质细胞的增生程度相似，与感染剂量及潜伏期无关联性。
- 田婵张宝云石琦韩俊高晨韩露董小平
- 关键词：朊病毒纤维蛋白
- 两种模式病毒灭活风险实验研究被引量：5
- 2008年
- 目的研究模式病毒在环境中的存活能力，以及常用消毒液和紫外线对病毒的灭活能力。方法利用表达绿色荧光蛋白（GFP）的重组腺病毒rADV和重组单纯疱疹病毒rHSV作为模式病毒，将滴有病毒的NC膜于室温下、浸于不同稀释度的各消毒液（乙醇、次氯酸钠、来苏尔、新洁尔灭）中，分别于15、30、45、60、75、90、105min，或紫外线连续照射20、40、60、80、100min后，放入细胞表面培养48h，于荧光显微镜下观察。结果（1）rHSV在环境中的平均存活时间不足60min，rAd病毒均高于105min；（2）100％、70％、50％的乙醇，以及5％、2．5％和1．25％次氯酸钠均可灭活两种病毒；（3）0．1％的新洁尔灭15min可灭活rHSV和rADV；0．01％新洁尔灭作用45min可灭活rHSV病毒；0．05％新洁尔灭中作用75min可灭活rADV病毒；而0．01％新洁尔灭则无灭活作用；（4）5％和2．5％的来苏尔可灭活两种病毒；但1．25％来苏尔灭活rADV病毒需75min；（5）紫外线照射大于20min可有效灭活rHSV，但对rADV无灭活作用。结论无包膜病毒与有包膜病毒在环境中的生存能力是不同的；两种模式病毒对各消毒液的抵抗能力也不尽相同，应根据病毒的特点选择不同的灭活方式。
- 李媛梅国勇姜慧英王桂荣田婵韩露韩卫芳魏强周永运武桂珍王克霞韩俊
- 关键词：生物安全消毒剂灭活
- Tau融合蛋白及其缺失突变体与朊蛋白的体外作用分析被引量：1
- 2006年
- 在部分朊病毒病(priondiseases)中,高度磷酸化的微管相关蛋白tau与朊蛋白(prionprotein,PrP)发生共定位,tau蛋白可能在朊病毒病的病理机制中有重要作用.本室已经证明二者可以发生分子间相互作用,本文进一步分析了tau蛋白与prion的体外相互作用及作用位点.利用RTPCR方法从人源细胞系SHSY5YcDNA中扩增出微管相关蛋白tau全长cDNA序列,克隆至质粒pGEX2T载体,在大肠杆菌中诱导表达融合蛋白GSTtau.利用GSTpulldown及免疫共沉淀方法检测全长tau蛋白与PrP23231的分子间相互作用.进一步表达tau蛋白的各种缺失突变体,确定tau蛋白与PrP蛋白的相互作用位点.结果表明,所表达的全长tau蛋白及各种缺失突变体均为可溶性蛋白,Western印迹结果显示,各种蛋白均能很好的被tau蛋白单抗识别.GSTpulldown和免疫共沉淀实验均显示,原核表达的全长tau蛋白可与全长的PrP蛋白在体外发生相互作用,并确定相互作用位点位于tau蛋白的N端序列及中段的重复区.上述结果为研究tau蛋白与PrP的相互作用在朊病毒病的发病机制中的意义提供了一定的理论基础.
- 王小凡韩俊董辰方韩露万言珍李锋安润董小平
- 关键词：朊蛋白分子间相互作用
- PrP八肽重复突变体对细胞生长影响的探讨
- 2007年
- 目的探讨PrP八肽重复突变体对细胞生长的影响。方法将具有遗传性朊病毒病相关不同八肽重复区插入突变的PRM，基因表达载体瞬时转染HeLa细胞，经噻唑蓝比色法（MTT）、Annexin—V／PI双染流式细胞检测。结果多八肽突变PrP蛋白对细胞的毒性作用较野生型明显增强。多八肽突变PrP较野生型更容易诱导凋亡发生，多八肽突变组早、晚期凋亡率均高于野生组。结论遗传性朊病毒病相关多八肽突变PrP蛋白可能较野生型更易诱导细胞凋亡发生。
- 韩露万言珍韩俊陈岚孙力王小凡黄银霞董辰方姜慧英董小平
- 关键词：朊病毒肽类噻唑蓝比色法细胞凋亡
- 鼠源抗haPrP23—231噬菌体抗体库的构建和初步鉴定
- 2007年
- 目的构建和鉴定鼠源抗haPrP23—231噬菌体抗体库。方法利用纯化的朊蛋白抗原免疫BALB／c小鼠，取脾，提取细胞总RNA，逆转录cDNA，以其为模板进行免疫球蛋白Fab区基因的特异性PCR扩增，将轻链和重链Fd段基因分别构建到pComb3质粒，构建噬菌体抗体库。结果经过四轮“吸附-洗脱-富集”的过程后获得了12株阳性克隆。挑取5株进行序列分析，并将结果与GenBank中已知序列库中的IgG序列进行比较，得到了两株不同的抗体，并进行了初步鉴定。结论本研究为朊病毒病的研究奠定了基础。
- 黄银霞韩俊董辰方孙力高晨王小凡韩露周伟张宝云姜慧英梁米芳董小平
- 关键词：朊病毒肽库细菌噬菌体
- 具有八肽重复区突变的朊蛋白其抗氧化性降低被引量：1
- 2008年
- 抗氧化性被认为是细胞朊蛋白的主要生理功能之一,研究显示它的抗氧化性主要与朊蛋白序列中的八肽重复区有关.但是迄今为止它的抗氧化机制仍旧不清楚.我们构建表达了野生型朊蛋白(PrP-PG5)和它的不同八肽重复区突变体0(PrP-PG0),9(PrP-PG9)和12(PrP-PG12).各种原核表达突变体蛋白在H2O2氧化后出现分子量的增加,并可导致羰基产生.MTT和细胞计数实验显示表达各种突变体的细胞存活率明显低于表达野生型朊蛋白(PrP-PG5)的细胞.细胞内ROS检测发现表达各种突变体的细胞内ROS水平明显高于表达野生型朊蛋白(PrP-PG5)的细胞.此外,谷胱甘肽过氧化物酶检测显示表达野生型朊蛋白(PrP-PG5)的细胞内谷胱甘肽过氧化物酶水平明显高于表达各种突变体的细胞.H2O2处理细胞后,转染突变体的细胞总的羰基产物数量明显高于转染野生型朊蛋白(PrP-PG5)的细胞,而表达突变体细胞及转染空载体的细胞较表达野生型朊蛋白(PrP-PG5)的细胞对氧化物质的抵抗性明显减弱.这些结果提示,具有正确八肽重复区数目对于朊蛋白(PrP)的抗氧化作用起关键作用,PrP的抗氧功能的丢失可能参与家族性朊病毒病的病理过程.
- 安润董辰方雷艳君韩露李平陈建明王桂荣石琦高晨姜慧英周伟韩俊楚雍烈董小平
- 关键词：PRP抗氧化性谷光甘肽过氧化物酶细胞活性
- α-Synuclein与14-3-3蛋白在体外分子间相互作用的鉴定被引量：3
- 2007年
- 帕金森病(Parkinson's disease,PD)涉及两种蛋白——α-synuclein蛋白(SNCP)与14-3-3蛋白.通过重组,将这两种蛋白在大肠杆菌DH5α中表达,通过谷胱甘肽-Sepharose4B亲和层析将其纯化,得到GST-14-3-3蛋白;利用凝血酶对纯化的融合蛋白GST-SNCP切割,再经谷胱甘肽-Sepharose4B亲和层析获得SNCP.通过免疫共沉淀、GSTpull down和ELISA等技术,证明SNCP能够与14-3-3蛋白结合;为了进一步证明SNCP也与在脑组织中的天然14-3-3蛋白发生作用,利用His pull down方法进行实验.结果证明,SNCP能够和脑组织中的14-3-3蛋白发生相互作用.这些结果从分子水平提供了SNCP与14-3-3蛋白相互作用的实验证据,为进一步了解SNCP的结构和功能,及其在中枢神经系统退行性疾病的作用提供了必要的实验基础.
- 黄银霞韩俊韩露董辰方高晨王小凡周伟董小平
- 关键词：退行性疾病免疫共沉淀PULLΑ-SYNUCLEIN
- 病毒学实验室的溢洒现象研究
- 2009年
- 目的研究病毒实验室的实验操作过程中的溢洒现象和病毒液液体跌落后的溅洒范围。方法利用表达绿色荧光蛋白（GFP）的重组腺病毒rADV为模式病毒，通过两组不同工作经验的实验室人员模拟实验室中的常规吸液、移液等操作，通过观察病毒液跌落至96孔细胞培养板是否出现绿色荧光信号来确定实验操作的溢洒情况；我们也将实验常规使用的病毒液量（1ml、1.5ml、4ml、8m1）从实验室可能的两种跌落高度（75cm、110cm）模拟不慎跌落后可能的溅洒范围。结果（1）两组人员使用机械移液装置均未出现溢洒现象；（2）第1组具有5年以上工作经验的实验室人员使用吸管移液等操作，出现因溢洒而导致7孔阳性信号，而2年以内工作经验的第二组人员，在实验操作过程中出现了81孔阳性信号，远大于第1组人员；（3）在两种滴落高度的情况下，1ml、1.5m1、4ml和8ml液体跌落溅撒范围最大半径分别为0.92、1.57、2.63和2.68m。结论生物安全实验室的移液操作过程中实验室人员工作经验非常重要；病毒液不慎跌落的溅撒范围与液体量有关。
- 李媛梅国勇姜慧英王桂荣魏强韩露王雷田婵韩卫芳武桂珍王克霞韩俊
- 关键词：安全管理病毒
- PRNP基因八肽重复突变研究进展
- 2006年
- 某些遗传性朊病毒病,例如,家族性Creutzfeldt-Jakob病(fCJD)、GSS综合征均与PRNP基因八肽重复区插入突变相关。关于插入突变Prp分子的研究对于揭示遗传性朊病毒病发病机制具有重要意义。
- 韩露韩俊董小平
- 关键词：插入突变
- 实验室信息管理系统在样品管理中的应用被引量：4
- 2011年
- 目的探讨实验室信息管理系统在样品管理中使用的重要意义。方法建立实验室信息管理系统,系统与实验室实现内部局域网连接,各实验室将采集HFMD的样本信息、流行病学、临床信息和实验室检测信息登录系统,进行分析。结果通过实验室信息管理系统可以系统有效的管理、分析HFMD样品及相关信息,加快数据传送的速度并建立了一个准确、畅通、简便的信息交流渠道。结论标本管理系统按照标准化实验室管理规范,可全面提高实验室管理水平,杜绝了人为的管理缺陷。加强了样品在接受、存储、处理等环节上的质量管理,确保了样品和实验结果的有效性、完整性和可追溯性。
- 王衍海韩卫芳贾淑惠胡寒雁韩露韩俊邓斌杨森
- 关键词：信息管理系统条形码手足口病
