韩焕兴
- 作品数：104 被引量：280H指数：8
- 供职机构：第二军医大学长征医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金上海市科学技术委员会资助项目国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学理学经济管理更多>>
- 他克莫司在临床检测中的方法学比较
- 目的通过方法学比较为临床推荐一种更精确可靠的检测方法并为临床用药提供科学客观的参考依据。方法以目前常用的酶联免疫法(ELISA)和微粒子酶免疫(MEIA)技术,检测58例肝移植和肾移植患者血清中他克莫司的浓度,比较两者间...
- 叶伟民陆慧琦朱烨李畅韩焕兴
- 关键词：他克莫司酶联免疫法微粒子酶免法
- 文献传递
- 非竞争性ELISA法测定人源抗HBsAg Fab功能性亲和常数被引量：17
- 2004年
- 目的 测定完全人源化基因工程抗体HBsAgFab的亲和常数。方法 采用非竞争性ELISA固相法 ,经确定最佳抗原包板浓度、最佳抗原包板时间及最佳抗原与抗体结合反应时间后 ,得到了HBsAg与抗体片段抗HBsAgFab及完整抗体抗HBsAgIgG的抗原抗体结合反应曲线 ,计算出抗HBsAgFab及抗HBsAgIgG的亲和常数。结果 人源基因工程抗体抗HBsAgFab的功能性亲和常数在 10 7～10 8M 1水平 ,比完整抗HBsAgIgG仅仅小约 1个数量级 (10 8～ 10 9M 1)。结论 该基因工程抗体与抗原结合能力较强 ,为今后开发应用Fab进行生物导向治疗提供了理论基础。
- 郑大勇罗荣城韩焕兴
- 关键词：免疫球蛋白类FAB抗体亲和力
- 自身免疫性疾病噬菌体抗体库的构建和初步鉴定被引量：1
- 2009年
- 目的构建系统性红斑狼疮（SLE）、类风湿性关节炎（RA）、强直性脊柱炎、干燥综合症（SS）、原发性胆汁性肝硬化（PBC）等自身免疫性疾病的噬菌体抗体库。方法从多例确诊的高滴度自身免疫病患者外周血淋巴细胞中抽提总RNA，用RT—PCR方法分别扩增免疫球蛋白分子轻链κ、λ基因及重链Fd基因。经SacI和XbaI限制性双酶切后，在T4连接酶的作用下，将轻链基因片段克隆入同样双酶切的pComb3Hss载体中以构建轻链文库，随后将重链Fd段PCR产物经XhoI和SpeI双酶切后载入同样处理的κ/λpComb3Hss载体，然后将重组质粒κ/λ—Fd-pComb3Hss转化大肠杆菌XL1-Blue。用辅助噬菌体M13K07感染XL1-Blue，则可在噬菌体表面表达出随机的重组抗体库。结果提取的淋巴细胞总RNA及合成的cDNA质量好，PCR扩增了长度为660bp的轻链κ、λ基因及重链Fd基因，成功构建了库容为4×10^4的轻链抗体库和库容为6×10^4的Fab片段噬菌体抗体库，酶切及PCR鉴定均正确无误。结论成功构建了自身免疫性疾病的噬菌体抗体库，为进-步筛选出高亲和力抗体打下了基础。
- 吴炜霖夏维陆慧琦熊怡淞杨再兴周琳韩焕兴仲人前
- 关键词：自身免疫疾病细菌噬菌体抗体
- 一种信号放大型量子点免疫荧光探针的制备方法及其应用
- 本发明属于免疫分析技术领域，具体涉及一种信号放大型量子点免疫荧光探针的制备方法及其应用。本发明首先采用微乳液溶剂挥发法，用量子点与聚合物溶液制备得到粒径可控、分散性好的量子点—聚合物复合纳米球，然后将抗体共价偶联在复合纳...
- 韩焕兴张鹏飞叶伟民
- 文献传递
- 一步亲和纯化制备基因工程人源抗HBs单克隆抗体Fab片段被引量：6
- 2000年
- 目的：探索亲和纯化人源单克隆抗体片段的简便实用方法。方法：应用自制的抗人免疫球蛋白片段抗体（Ａｎｔｉ－Ｆａｂ）与链球菌蛋白Ｇ亲和胶（Ｇａｍ ｍ ａ Ｂｉｎｄ）交联制备亲和层析柱，用一步法从工程菌培养上清中纯化人源抗ＨＢｓ单克隆Ｆａｂ 片段。经依沙吖啶沉淀、离子交换、分子筛纯化人混合血清提取ＩｇＧ组分，木瓜酶处理后分离、纯化出Ｆａｂ，免疫绵羊制备高效价抗血清。用Ｇａｍ ｍ ａＢｉｎｄ 一步纯化出抗血清中的ＩｇＧ组分，再将该ＩｇＧ经交联剂与Ｇａｍ ｍ ａ Ｂｉｎｄ 交联后制成亲和胶。人源抗ＨＢｓ阳性菌培养上清与亲和胶共育后装柱，ＰＢＳ洗去非特异结合蛋白，再用５ ｍ ｏｌ／Ｌ氯化锂洗脱特异Ｆａｂ。结果：聚丙烯酰胺电泳纯化产物显示，纯化后的抗体片段在电泳中形成单一区带，达到电泳纯；用酶标抗Ｆａｂ 抗体免疫印迹结果证明，电泳显示的单一区带为Ｆａｂ 蛋白区带；抗原特异Ｄｏｔｂｌｏｔ检测表明，该法制备出的Ｆａｂ 保持了抗原结合活性。结论：本实验建立的一步亲和纯化法具操作简便、纯化快速和高效的特点，是人源性单克隆抗体Ｆａｂ
- 胡栋平韩焕兴尤长宣罗荣城毛庆民
- 关键词：抗HBS单克隆抗体FAB片段
- 生物工程技术制备人源抗-HBs Fab片段被引量：6
- 2003年
- 目的:用生物工程技术制备人源性抗-HBs F-ah。方法:将从抗体文库中筛选出的人源抗-HBs Fab基因克隆人pBAD/gⅢA载体,进而转化Top10大肠杆菌。对重组质粒菌发酵表达后,利用Ni-NTA-Agarose螯合层析柱纯化周质腔可溶性Fab 蛋白。对所得包涵体依次变性、溶解、纯化后,利用透析进行复性。用Western blot检测Fab蛋白的特异性,Dot blot测定其生物学活性。结果:经Ni-NTA-Agarose柱纯化的周质腔可溶性Fab蛋白,有较好的生物学活性,并且总量达到80mg/L。对所获包涵体进行透析复性后,也可得到少量有活性的蛋白,但比例很小。结论:用pBAD/gⅢA-Top10表达系统表达人源抗-HBs Fab片段,发酵培养后,经有效纯化可得到生物学活性较好的可溶性蛋白,为人源抗-HBs Fab片段的大量制备提供了有效手段。
- 安峰陈玉川陆慧琦韩焕兴
- 关键词：FAB片段生物工程技术
- 免疫学在临床医学中的应用(七)——自身抗体与自身免疫病被引量：1
- 1991年
- 免疫反应的基本概念是识别自我,排除异己。凡是进入体内的异物,如微生物,各种异体蛋白或同种异体组织等皆可被免疫系统所识别,通过抗体、免疫活性细胞等将其排除,这就是所谓的自身稳定。在某些条件下,如感染、创伤、毒物、小分子化学物质,过氧化物。
- 韩焕兴孔宪涛
- 关键词：自身免疫病自身抗体免疫学
- 人抗乙型肝炎表面抗原Fab片段的表达及活性鉴定被引量：1
- 1996年
- 人抗乙型肝炎表面抗原Ｆａｂ片段的表达及活性鉴定２００００３上海第二军医大学长征医院范列英，韩焕兴，胡东平，孔宪涛关键词ＨＢｓＡｇ，Ｆａｂ片段，噬菌体抗体中国图书资料分类号Ｒ５１２．６２噬菌体抗体技术不仅能大量制备人源性单克隆抗体，而且为制备其他的具有...
- 范列英韩焕兴胡东平孔宪涛
- 关键词：乙型肝炎表面抗原FAB片段噬菌体抗体
- 血清透明质酸、Ⅲ型胶原N端肽、层粘蛋白检测在肝硬化诊断中的作用被引量：7
- 2001年
- 目的 了解血清透明质酸 (HA)、Ⅲ型胶原N端肽 (PⅢNP)、层粘蛋白 (LN) 3项指标在肝硬化诊断中的作用。方法 采用放射免疫测定法 ,测定 2 38例肝硬化 ,6 4例肝癌伴肝硬化 ,42例肝癌 (不伴肝硬化 )病人血清HA、PⅢNP和LN。结果 肝硬化病人随着病情进展 ,HA和PⅢNP水平明显升高并有显著差异。LN亦呈升高趋势 ,但在不同程度的肝硬化病人中相差不显著。结论 在肝病尤其是肝硬化的实验诊断中 ,以上 3项细胞外间质 (ECM )指标的应用价值不同 ,HA升高最明显、最可靠。PⅢNP与肝硬化间亦有较好的相关性。LN的血清学检测对肝硬化诊断的作用在本研究中未能得到证实 ,有待于进一步探讨。
- 叶伟民韩焕兴陆慧琦高春芳孔宪涛
- 关键词：透明质酸层粘蛋白肝硬化放射免疫测定
- 抗HBs Fab-IFNα融合蛋白的制备与初步鉴定
- 2011年
- 目的构建抗HBsAg的pComb Fab-IFNα载体,原核表达具双重生物活性的抗HBs Fab-IFNα融合蛋白。方法以pBAD-Fab和pBADIFNα作为模板,分别扩增Fd、λ和IFNα基因,经相应的限制性内切酶酶切后分3次克隆入pComBHss质粒,转化XL-1 Blue大肠埃希菌。限制性酶切和测序鉴定重组质粒,免疫蛋白印迹（Western blotting）和斑点印迹（Dot blotting）鉴定融合蛋白的表达及抗原结合活性。结果重组载体的酶切、电泳及测序表明抗HBs Fab-IFNα基因克隆正确。表达产物经12%SDS-PAGE电泳、转印,Western blotting显示该融合蛋白分子量约为65kD,Dot blotting显示其与HBsAg具有结合能力。细胞病变抑制法测定IFNα生物学活性为7.8×1045.1×105U/ml。结论该原核系统成功表达了抗HBs Fab-IFNα融合蛋白,表明其既具有抗HBsAg结合能力,又具备IFNα的生物活性,为进一步的系统表达和应用研究提供了条件。
- 陆慧琦宋杰叶伟民韩焕兴
- 关键词：干扰素Α乙型乙型
