陈中伟 作品数:7 被引量:10 H指数:2 供职机构: 军事医学科学院微生物流行病研究所 更多>> 发文基金: 国家高技术研究发展计划 北京市自然科学基金 更多>> 相关领域: 医药卫生 生物学 农业科学 更多>>
一种抗金黄色葡萄球菌肠毒素B的免疫球蛋白F(ab’)<Sub>2</Sub>及其制备方法 本发明在治疗性抗体开发的经验基础上,利用当代现有的科学技术研制的抗SEB免疫球蛋白F(ab’)<Sub>2</Sub>,可以有效地治疗与预防SEB引起的中毒,是非常有价值的治疗性和预防性抗体药物。本发明利用SEB免疫健康... 赵忠鹏 杨鹏辉 陈中伟 罗德炎 段越强 李敏 王希良文献传递 甲型H1N1流感病毒样颗粒疫苗的初步研究 被引量:2 2011年 目的对甲型H1N1病毒样颗粒的免疫原性和保护效果进行初步研究,为研发不依赖鸡胚生产工艺的流感疫苗提供新的思路。方法使用昆虫-杆状病毒表达系统表达并纯化甲型H1N1流感病毒A/California/07/2009(H1N1)的病毒样颗粒;通过Western blot、血凝、单向免疫扩散,透射电镜等方法鉴定病毒样颗粒;使用A/California/07/2009(H1N1)裂解疫苗作为对照,腹腔注射免疫Balb/c小鼠,并使用A/Beijing/501/2009(H1N1)进行攻毒,评价病毒样颗粒疫苗的免疫原性及保护效果。结果经鉴定,纯化后的病毒样颗粒血凝滴度为1:512,HA含量为92.9μg/ml,颗粒大小在100 nm左右,二免10 d后IgG抗体效价7.9×103,血凝抑制实验测得血抑(Hemagglutination Inhibition,HI)效价384,对50LD50的A/Beijing/501/2009(H1N1)病毒的保护率达到100%。结论甲型H1N1流感病毒样颗粒的免疫原性显著高于裂解疫苗,为发展不依赖鸡胚生产的流感亚单位疫苗提供了技术保证。 高啸 潘玉竹 陈中伟 邢丽 刘坤 王文娟 杨鹏辉 王希良关键词:甲型H1N1 病毒样颗粒 疫苗 淋球菌孔蛋白基因与脂寡糖表位融合基因原核表达载体的构建及表达 被引量:1 2011年 PCR扩增淋球菌CMCC29400、CMCC29403株孔蛋白(PI)A、B及表位基因,使用linker GS-GGSG并通过重叠PCR法将表位基因连接在PIA、PIB上形成融合基因PIA-表位、PIB-表位,分别与克隆载体pMD-18T连接,测序正确后将目的基因插入表达载体pET32a(+)中,构建pET32a-PIA-表位、pET32a-PIB-表位、pET32a-PIA和pET32a-PIB重组表达质粒,PCR、双酶切鉴定及测序正确后转化大肠埃希菌BL21(DE3),IPTG诱导蛋白表达,经SDS-PAGE鉴定分析,成功表达融合蛋白。 赵莉群 陈中伟 张伟 王希良 于三科关键词:淋球菌 孔蛋白 基因融合 一种抗金黄色葡萄球菌肠毒素B的免疫球蛋白F(ab’)<Sub>2</Sub>及其制备方法 本发明在治疗性抗体开发的经验基础上,利用当代现有的科学技术研制的抗SEB免疫球蛋白F(ab’)<Sub>2</Sub>,可以有效地治疗与预防SEB引起的中毒,是非常有价值的治疗性和预防性抗体药物。本发明利用SEB免疫健康... 赵忠鹏 杨鹏辉 陈中伟 罗德炎 段越强 李敏 王希良马抗破伤风毒素免疫球蛋白F(ab′)_2新制备工艺的建立 被引量:5 2011年 目的建立马抗破伤风毒素免疫球蛋白F(ab′)2新的制备工艺。方法制备并纯化破伤风类毒素(Tetanustoxoid,TT)及重组破伤风毒素c片段(Recombinant tetanus toxin C fragment,rTT-C),将TT/rTT-C(2∶1)免疫马匹,待血清抗体效价达3 500 IU/ml时,采血,分离血清,灭活,去除外源蛋白,胃蛋白酶消化制备F(ab′)2,经DEAE柱层析纯化,并对其进行中和抗体效力、安全性和稳定性检测。结果纯化的TT和rTT-C的浓度分别为70 000 Lf/L和4~5 mg/L,纯度分别达95%以上和96%以上;纯化的TAT-F(ab′)2收率为1.4%,纯度达91%以上,中和抗体效价>15 000 IU/ml;其安全性及稳定性均符合《中国药典》三部(2005版)要求,有效期暂定为18个月。结论建立了马抗破伤风毒素免疫球蛋白F(ab′)2新的制备工艺,制备的制品达到甚至超过了国外的质量标准,为马抗血清同类制品的升级换代提供了技术支持。 刘永祥 赵忠鹏 罗德炎 陈中伟 杨涛 王希良 高俊杰关键词:破伤风抗毒素 以乙型肝炎病毒核心蛋白颗粒为载体的流感通用疫苗的构建 被引量:2 2010年 目的构建以乙型肝炎病毒核心蛋白(Hepatitis B virus coreprotein,HBc)颗粒为载体的含流感病毒M2基质蛋白胞外功能区(M2 ectodomain,M2e)和核蛋白(Nucleoprotein,NP)保守表位的流感通用疫苗,评价其抗不同亚型流感病毒感染的保护作用。方法采用基因工程方法将流感病毒M2e的3拷贝重复片段与NP的CTL表位串联,插入HBc刺突顶端的免疫优势决定区,构建重组表达质粒pET-21a-HBc-3M2e-NP,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG16℃低温诱导表达。表达的融合蛋白HBc-3M2e-NP经纯化后,电镜观察病毒样颗粒形成情况。纯化的融合蛋白分别经鼻腔和腹腔免疫小鼠,对照组注射等体积的PBS,间接ELISA法检测小鼠血清IgG抗体水平;流式细胞术检测小鼠脾组织中CD4+、CD8+T淋巴细胞水平;以流感病毒攻毒,检测融合蛋白的保护效果。结果重组表达质粒pET-21a-HBc-3M2e-NP经PCR及双酶切鉴定证明构建正确。表达的融合蛋白相对分子质量约为29000,以包涵体和可溶性两种形式表达,且可与鼠抗M2e单抗发生特异性反应。纯化的融合蛋白纯度大于90%,且能够自动装配成病毒样颗粒。用该病毒样颗粒免疫小鼠,可诱导小鼠产生针对不同流感病毒毒株的特异性抗体;2种途径免疫的小鼠脾组织中CD4+T淋巴细胞含量和CD4+/CD8+T淋巴细胞比例均较对照组明显升高;攻毒试验结果显示,具有交叉保护作用。结论构建的流感通用疫苗能够诱导机体产生高水平的体液免疫和细胞免疫应答及有效的交叉保护作用,为流感通用疫苗的深入研究奠定了基础。 花艳红 洪渊东 吕进 陈中伟 张伟 张良艳 周宇 王希良关键词:流感疫苗 病毒样颗粒 核蛋白 以人乳头瘤病毒16 L1为载体的流感通用疫苗初步研究 2008年 目的构建以人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)16 L1为载体的甲型流感病毒M2基因胞外区(M2e)通用疫苗杆粒,利用昆虫细胞杆状病毒表达系统,进行初步的蛋白表达。方法利用PCR技术将甲型流感病毒M2e基因序列与HPV16 L1相连。经酶切、酶联将融合基因插入pFastBac HTA载体,在DH10Bac细胞中进行同源重组,经测序鉴定后构建M2e-HPV16 L1杆粒,脂质体转染sf9昆虫细胞,收获并扩增含有M2e-HPV16 L1的杆状病毒,经扩增后获得高效价的重组杆状病毒,用SDS-PAGE、免疫荧光法和电镜检测目的蛋白的表达。结果构建了以HPV16 L1为载体的M2e通用疫苗杆粒,通过转染sf9昆虫细胞得到初步M2e-HPV16 L1融合蛋白表达。结论成功构建了HPV16 L1与甲型流感病毒M2e融合蛋白的病毒样颗粒,为流感通用疫苗的研制奠定了基础。 刘蕊 李志奎 王希良 罗德炎 颜艳 陈中伟 花艳红关键词:病毒样颗粒