闵军 作品数:134 被引量:587 H指数:12 供职机构: 中山大学孙逸仙纪念医院 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 广东省自然科学基金 国家教育部博士点基金 更多>> 相关领域: 医药卫生 生物学 更多>>
多因子联合诱导人胚胎干细胞定向分化为肝细胞样细胞 被引量:2 2012年 目的建立有效的体外诱导人胚胎干细胞(hESCs)分化为肝细胞样细胞的培养体系。方法将H9hESC细胞株接种到基底膜提取物包被的培养板上,序贯加入含有下列诱导因子的分化培养基诱导分化:100μg/L细胞因子活化素A(activinA)诱导3d,20μg/L骨形成蛋白4(BMP4)和10μg/L碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)诱导4d,10μ∥L肝细胞生长因子(HGF)诱导5d,最后以含10μg/L制瘤素M(OSM)及1×10^-7moVL地塞米松(Dex)的培养液继续诱导4d。于细胞诱导分化第16天,采用逆转录.聚合酶链反应(RT—PCR)及免疫荧光检测分化细胞肝脏特异性基因和蛋白表达水平;过碘酸.雪夫反应(PAS)试验和吲哚氰绿(ICG)摄取试验检测分化细胞是否具备肝细胞功能。结果activinA、BMP4、bFGF、HGF、OSM和Dex联合诱导的分化细胞具有类似肝细胞的形态结构,呈多角形或卵圆形;RT—PCR结果显示分化第16天的细胞表达甲胎蛋白(AFP)、细胞角蛋白7(CK7)、细胞角蛋白19(CK19)、肝细胞核因子-4a(HNF-4a)、a1-抗胰蛋白酶(AAT)等肝脏特异性基因;免疫荧光化学检测结果显示分化第16天的细胞表达AFP、ALB、CK19、CYP7A1等肝脏特异性蛋白;PAS试验及ICG试验显示分化细胞具备糖原合成和ICG摄取释放等肝细胞功能。结论体外联合多种诱导因子可诱导hESCs定向分化为肝细胞样细胞。 崔罗方 商昌珍 任萌 曹君 吕丽虹 陈亚进 闵军关键词:胚胎干细胞 肝细胞样细胞 分化 自发性结肠破裂21例诊治分析 2012年 目的:探讨自发性结肠破裂的临床特点和诊治方法。方法:回顾性分析自发性结肠破裂患者21例的临床资料。结果:21例患者均急诊行开腹手术治疗,15例治愈,6例死于感染中毒性休克所致的多脏器功能衰竭。结论:自发性结肠穿孔缺乏特异的临床表现,术前不易确诊。早期诊断、早期手术及合理的手术方式是改善自发性结肠破裂患者预后的关键。 余强 闵军 万云乐关键词:自发性穿孔 结肠 氟尿嘧啶免疫聚乳酸纳米微粒抗肿瘤效应的研究 被引量:5 2007年 目的利用载氟尿嘧啶(5-FU)免疫聚乳酸(PEA)纳米微粒(NPs),观察其对严重联合免疫缺陷病(SCID)鼠人胃癌移植模型的治疗效应。方法超声乳化法合成的载5-FU的抗血管内皮生长因子(VEGF)单克隆抗体纳米微粒,建立SCID鼠人胃癌移植肿瘤模型,观察药物对高表达VEGF胃癌移植肿瘤模型的治疗效应及其不良反应。结果空白对照组、未载药空纳米微粒组、5-FU组(20mg/kg)、抗VEGF单克隆抗体-未载药空纳米微粒组、抗VEGF单克隆抗体组、载5-FU纳米微粒组、5-FU(20mg/kg)加抗VEGF单克隆抗体组及抗VEGF单克隆抗体-载5-FU纳米微粒组(20mg/kg)的抑瘤率分别为0、6.61%、24.26%、27.94%、35.29%、37.50%、39.71%和52.21%,且载5-FU的抗VEGF单克隆抗体纳米微粒组和未载药纳米微粒组的血白细胞数量及肝肾功能与空白对照组相比,差异无统计学意义(P〈0.05);而含5-FU原药组血白细胞数量较空白对照组和抗VEGF单克隆抗体-载5-FU纳米微粒组下降34.43%和37.38%(P〈0.05):而肝转氨酶升高93.17%和66.56%。治疗组与对照组癌细胞凋亡指数相比,以抗VEGF单克隆抗体.载5-FU纳米微粒组更为明显,差异有统计学意义(P〈0.05);含抗VEGF抗体的实验组微血管密度明显低于含5-FU药组和对照组(P〈0.05)。结论载5-FU抗VEGF单克隆抗体纳米微粒可提高5-FU的抑瘤率,并通过抑制肿瘤的血管生成,诱导肿瘤细胞凋亡,增加疗效,有效降低5-FU的骨髓抑制和肝肾功能损害作用.是一种安全的新型药物纳米级靶向制剂。 黄开红 刘建化 王凌云 朱兆华 陈其奎 闵军 陈汝福关键词:氟尿嘧啶 聚乳酸 载药纳米微粒 血管生成 小型猪腹腔镜肝切除模型的建立 2014年 目的介绍构建小型猪腹腔镜肝切除模型的经验和体会,并评价其应用价值。方法建立小型猪腹腔镜肝左外叶切除的动物模型,其技术包括Trocar戳孔布局及CO2气腹的建立、肝脏游离及入肝血流阻断、肝脏离断及肝内外管道的处理等。结果共10只小型猪接受了腹腔镜肝左外叶切除手术,均建模成功,未有中转开放,手术平均时间65.4±10.4 min,平均出血量164.2±23.5 m L,术中无大血管及腹腔脏器损伤等严重并发症发生。结论建立小型猪腹腔镜肝切除模型是安全可行的,并可作为学习腹腔镜肝切除技术的一种重要途径。 何海 林浩铭 李国林 张培东 韩庆芳 韦金星 闵军关键词:小型猪 腹腔镜 肝切除术 动物模型 大鼠原位肝移植胆道并发症的原因分析 被引量:3 2009年 目的研究胆道并发症的发生原因,建立稳定的大鼠原位肝移植模型。方法"二袖套法"行大鼠原位肝脏移植180例,即肝上下腔静脉(SVC)采用连续缝合法吻合,门静脉(PV)以及肝下下腔静脉(IVC)采用袖套法吻合,胆总管采用内支架胆管端端吻合法。结果模型稳定后,供肝冷缺血时间为(50.1±12.0)min,无肝期为(16.0±3.1)min,受体手术时间为(54.4±10.6)min,术后胆道并发症的发生率为40%,主要表现为肝脓肿、肝内外胆管扩张、胆泥形成等。结论胆管内支架管的选择以及手术技巧是影响大鼠肝移植术后胆道并发症发生发展的重要因素。 李国林 龙天柱 林浩铭 吕丽虹 徐鋆耀 俞建东 许晓婷 闵军 万云乐关键词:原位肝移植 胆道并发症 Livin基因在胆管癌组织中的表达及其临床意义 2009年 Livin基因是新近发现的凋亡抑制蛋白(inhibitor of apoptosis protein,IAP)基因家族的新成员。它的表达产物Livin蛋白是迄今为止抗凋亡作用最强的IAP之一,在多数肿瘤组织中发现有Livin的异常高表达现象。我们采用免疫组化的方法检测Livin基因在肝外胆管癌组织中的表达,分析了其表达与临床病理和预后间的关系。 余杰雄 汤志华 陈积圣 闵军关键词:LIVIN基因 胆管癌组织 APOPTOSIS 凋亡抑制蛋白 抗凋亡作用 基因家族 胚胎干细胞源性肝干细胞肝内移植对宿主肝功能的影响及安全性评估(英文) 被引量:3 2008年 背景:体外诱导胚胎干细胞分化为肝细胞已有不少成功的报道,但其体内移植后能否有效整合入宿主肝板、在肝内能否进一步生长分化并表达肝细胞功能以及成瘤的风险等情况目前还不清楚。目的:应用治疗性肝再生模型进行胚胎干细胞源性肝干细胞肝内移植.观察其在肝组织替代、体内的生长分化及成瘤性情况。设计:随机对照动物实验。单位:中山大学附属第二医院小儿外科。材料:选用BALB/c小鼠24只为受体,鼠龄6~8周,体质量20~352,雌雄不拘购自广州市实验动物中心。实验所用胚胎干细胞源性肝干细胞由作者所在课题组诱导胚胎干细胞分化而成。小鼠胚胎干细胞株E14由本院干细胞中心提供。方法:实验于2006-07/2007-06在中山大学附属第二医院干细胞研究中心完成。将24只小鼠随机分为2组:肝再生模型+干细胞移植组和肝切除+干细胞移植组,每组12只。前组分两次按50mg/kg剂量腹腔内注射倒千里光碱(retrorsine),间隔2周,第2次注射4周后行70%肝部分切除制造肝损伤;然后经门静脉分别移植1×10^5羟基荧光素乙酰乙酸(CFDA-SE)荧光标记的细胞入小鼠肝内进行胚胎干细胞源性肝干细胞移植。后组在行70%肝部分切除制造肝损伤模型后进行胚胎干细胞源性肝干细胞移植。主要观察指标:荧光显微镜下观察移植细胞组受体鼠肝脏内分布、整合与体内生长分化情况。2周后行白蛋白荧光免疫组化(双荧光染色)、血清白蛋白水平检测其功能状况。将胚胎干细胞源性肝干细胞注入治疗性肝再生小鼠肝内,将未分化的胚胎干细胞移植入小鼠腋区皮下作为对照,观察胚胎干细胞源性肝干细胞体内成瘤情况。结果:①肝干细胞在受体鼠肝内生长情况:CFDASE标记的胚胎干细胞源性肝干细胞肝内移植1周,受体小鼠肝实质内可见散在绿色荧� 邓小耿 宋尔卫 闵军 张杰 陈伦 曾炳胜 方天翎 陈积圣关键词:胚胎干细胞 肝细胞移植 诱导分化 原发性胆囊癌Survivin和Ki-67的表达及意义 被引量:18 2006年 目的探讨Survivin和Ki-67蛋白在原发性胆囊癌(PGC)组织中的表达及其与癌组织类型、病理分级和转移状况的关系,以及Survivin和Ki-67表达的相关性。方法应用免疫组织化学方法检测49例原发性胆囊癌、21例胆囊腺瘤和13例慢性胆囊炎组织中Survivin和Ki-67蛋白的表达。结果胆囊癌组织中Survivin和Ki-67表达阳性率分别为65.31%(32/49)和77.55% (38/49),均明显高于胆囊腺瘤(分别为0%和9.52%,P<0.05),Survivin阳性表达与胆囊癌细胞分化程度、病理分级和转移无关(P>0.05)。而Survivin和Ki-67的表达呈明显关联(K=0.509,P<0.01)。结论Survivin和Ki-67均是胆囊癌高度恶性的重要指标,但Survivin表达可能与胆囊癌预后无关。Survivin和Ki-67蛋白的表达在胆囊癌的发生发展过程中可能具有相互协同作用。 万云乐 丁伟 郑树森 闵军 王捷关键词:胆囊癌 SURVIVIN 免疫组织化学 含人γ-干扰素基因真核表达载体的构建及其在肝癌细胞中的表达 被引量:8 2002年 目的 构建含人γ -干扰素 (IFN -γ)基因的真核表达载体 ( pcDNA3-IFN -γ) ,并观察其在肝癌细胞株中的表达情况。方法 将IFN -γ的cDNA亚克隆于哺乳动物载体 ( pcDNA3)上 ,经脂质体介导将pcDNA3-IFN -γ导入人肝癌细胞株SMMC -772 1和QGY -770 1中 ,通过高剂量G418选择培养得出抗性克隆。RT -PCR检测IFN -γ基因在转染细胞内有无转录 ,ELISA法检测转染细胞内IFN -γ的表达水平。 结果 IFN -γ基因的mRNA仅存在于pcDNA3-IFN -γ导入的肝癌细胞内。其细胞培养上清液存在高水平的IFN -γ。 结论 含IFN 郭英 杨丽新 王坤 闵军 陈积圣关键词:遗传学 基因表达 肝癌 不同诱导方法对人外周血树突状细胞体外成熟的影响 被引量:1 2012年 目的探讨不同诱导方式对于体外培养的树突状细胞(dendritic cells,DC)免疫刺激活性的影响。方法通过rhGM-CSF和IL-4体外诱导的人外周血单核细胞来源的DC,分别用肿瘤坏死因子α(TNF-α)、脂多糖(LPS)、细胞因子鸡尾酒法诱导成熟,再以流式细胞仪、FITC-Dxtran内吞检测、MLR、ELISA法检测DC的表面标志、内吞能力、刺激淋巴细胞增殖能力和IL-12分泌的变化。结果在不同方法促进DC成熟中,细胞因子鸡尾酒法诱导下的DC成熟状态最佳,CD83指数表达高达84.87%,IL-12的分泌量[(656.18±38.52ng/L)]高于其他各组,且刺激淋巴细胞增殖能力最强(P<0.05)。结论细胞因子鸡尾酒法是体外诱导DC成熟的最佳方法。 刘璐 李琳 伍衡 闵军 王捷 曾育杰 褚忠华关键词:树突状细胞