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A群脑膜炎球菌兔抗血清的制备及鉴定: 2016年; 目的制备A群脑膜炎球菌兔抗血清内部参考品,并进行鉴定。方法用新鲜培养的A群脑膜炎球菌混悬液按确定的免疫方案免疫日本大耳白兔,免疫完成后,按确定的采血时间点,经颈动脉采血,分离血清,进行凝集试验,观察兔抗血清凝集反应情况;采用免疫双扩散和ELISA法检测兔抗血清效价,同时利用火箭免疫电泳和ELISA法鉴定兔抗血清的血清学特异性。结果确定免疫方案为基础免疫4周后,加强免疫2周;免疫完成后第6天为最佳采血时间点。6份自制A群脑膜炎球菌兔抗血清的凝集试验效价均达到1︰160,与相应的多糖能够产生沉淀线的最大稀释倍数均不低于1︰8,与A群脑膜炎球菌荚膜多糖反应的抗体滴度均在106及以上,与C、Y和W135群脑膜炎球菌荚膜多糖之间无交叉反应。结论自制的A群脑膜炎球菌兔抗血清可作为A群脑膜炎球菌荚膜多糖疫苗的定性和定量检测的内部参考品,同时也为其他多糖类疫苗血清抗体的制备提供了参考。; 刘鹏张海峰郭蓉薛红刚; 关键词：A群脑膜炎球菌

高效阴离子交换色谱-脉冲安培法对A群脑膜炎球菌结合疫苗中游离多糖的检测: 2014年; 目的采用高效阴离子交换色谱-脉冲安培法（high-performance anion-exchange chromatography with pulsed amperometric detection,HPAEC-PAD）检测A群脑膜炎球菌多糖-破伤风类毒素结合疫苗（group A meningococcal polysaccharide-tetanus toxoid conjugate vaccine,MenA-PS-TT）中的游离多糖含量.方法采用1％脱氧胆酸钠（sodium deoxycholate,DOC）处理MenA-PS-TT分离游离PS.游离和结合PS经三氟乙酸水解后,用HPAEC-PAD检测水解产物,并将检测结果与改良钼酸铵分光光度法的检测结果进行比较.结果 1％DOC处理的样品的PS回收率为90％～104％,TT沉淀率为99％以上,说明1％DOC处理不会对游离和结合PS产生影响.HPAEC-PAD检测MenA-PS的重复性良好,3次MenA-PS标准品定位结果和3次MenA-PS-TT成品检测结果的相对标准偏差分别为1.7％和6.4％.HPAEC-PAD与改良钼酸铵分光光度法的检测结果相当.结论 HPAEC-PAD可用于MenA-PS-TT中的游离PS含量检测.; 郭蓉卢佳丽薛红刚胡菁杨燕珠

超滤法去除A群脑膜炎球菌多糖料液中的苯酚被引量：3: 2012年; 目的采用超滤法去除A群脑膜炎球菌多糖料液中的苯酚。方法选取Omega OS010C10膜包(C型筛网,10 KD,过滤面积0.1 m2)和Omega OS010T12膜包(T型筛网,10 KD,过滤面积0.1 m2),分别对A群脑膜炎球菌多糖料液进行超滤,比较两种膜包不同压力对膜滤速的影响,测定超滤前后膜净水滤速的恢复率,分析经超滤和透析后样品中磷和苯酚含量及固体总量。结果 OS010T12膜包切向流速和压力的增加对滤速的影响较OS010C10膜包更显著,且在较低的压力差和过膜压力下,OS010T12膜包具有更高的过滤速度;在浓缩和洗滤阶段,OS010T12膜包的平均滤速较OS010C10膜包高约1.3倍;膜包经清洗后,膜净水滤速OS010T12膜包可恢复至试验前水平;两种膜包超滤的滤出液中苯酚的含量均符合《中国药典》三部(2010版)要求,且多糖回收率均高达90%以上,超滤用时比透析至少节约46 h,且耗水量只有透析工艺的20%。结论可用OS010T12膜包替换透析袋,对A群脑膜炎球菌多糖料液进行超滤,去除残余苯酚,为A群脑膜炎球菌多糖疫苗的生产提供了参考。; 胡菁薛红刚郭蓉陈有喜瞿明霞陈浩军; 关键词：超滤脑膜炎球菌多糖疫苗苯酚多糖

肺炎球菌PsaA抗原及其在结合疫苗中的应用被引量：1: 2011年; 目的应用基因工程技术表达和制备肺炎链球菌表面黏附素A（ pneumococcal surfaceadhesin A, PsaA），并与细菌荚膜多糖耦联制备成多糖蛋白结合疫苗，探讨PsaA作为肺炎球菌蛋白载体在增强结合疫苗中其他细菌多糖抗原的免疫原性的同时，还能获得对肺炎球菌的抗体反应，从而达到用一种结合疫苗能诱导出针对两种细菌的抗体免疫应答的目的。方法从肺炎链球菌基因组中扩增psaA基因，将目的基因插入原核表达载体pET-28a，获得重组质粒pET28a-psaA，通过转化进入大肠杆菌BL21中，经IPTG诱导，采用DEAE．阴离子交换层析法纯化基因重组rPsaA蛋白。将纯化到的rPsaA蛋白与A群脑膜炎荚膜多糖（group A meningococcal polysaccharide, GAMP）耦联成多糖蛋白结合疫苗后，用小鼠动物模型进行免疫实验，检测该疫苗的免疫原性，用ELISA法测定该疫苗在小鼠体内产生的针对肺炎球菌和脑膜炎球菌两种病原菌特异性抗原的抗体水平。结果成功克隆基因重组表达质粒，而且表达的PsaA蛋白在载体上的组氨酸标签之前终止表达，不带有组氨酸标签，保证疫苗的安全性。SDS—PAGE技术分析表明：rPsaA蛋白高效表达，约为菌体蛋白的60％，蛋白质相对分子质量约为37×10’，而且蛋白的可溶性好，不形成包涵体，用DEAE-阴离子交换层析法纯化其纯度可达80％以上。纯化到的PsaA蛋白与荚膜多糖耦联成功，应用于小鼠免疫实验，PsaA蛋白载体能显著增强A群脑膜炎荚膜多糖抗原的免疫原性，并同时产生针对肺炎球菌蛋白抗原和脑膜炎球菌多糖抗原的特异性抗体。结论利用基因工程技术获得无组氨酸标签的PsaA蛋白，并将它与A群脑膜炎荚膜多糖耦联，可以在增强荚膜多糖抗原免疫原性的同时，提高疫苗的免疫保护效果，探讨了给儿童接种一种疫苗能同时预防肺炎和脑膜炎两种传染病的可能性。; 樊小英薛红刚郭蓉胡菁卢佳丽朱越雄; 关键词：多糖蛋白结合疫苗

1株甲基杆菌的鉴定: 2016年; 目的鉴定1株在生物制品生产车间采集的菌株wh01的种属。方法观察该菌株的形态，并用细菌鉴定仪进行检定。采用PCR法扩增菌株的16SrDNA和甲醇脱氢酶大亚基的mxaF基因，用生物信息学软件进行分析。结果该菌株经细菌鉴定仪检定为沙门菌属，但其形态与沙门菌有很大差别，其16SrDNA和mxaF基因序列与甲基杆菌属序列的相似性高达99％。结论该菌株属于甲基杆菌属。; 曹璟黄思佳郭蓉刘鹏金文平胡业勤薛红刚; 关键词：DNA 核糖体环境污染

不同稀释液对冻干A、C群脑膜炎球菌结合疫苗质量的影响被引量：1: 2010年; 为选择合适的的冻干A、C群脑膜炎球菌结合疫苗的稀释液,以注射用水(H2O)、生理盐水(NS)、磷酸盐缓冲液(PBSpH6.8～7.2)作为候选稀释液,进行了相关溶解度、pH、渗透压、异常毒性、免疫原性的检测比较。溶解度、pH、免疫原性结果显示三种稀释液无差异;H2O作为稀释液的渗透压不符合人用制剂渗透压的要求,另两者则符合要求;三种稀释液溶解制品后的pH检测数据均符合要求,但PBS的缓冲能力更强。故认为PBS更适合作为冻干A、C群脑膜炎球菌结合疫苗的稀释液。; 薛红刚郭蓉马艳明项美娟杨晓明; 关键词：脑膜炎球菌结合疫苗稀释液溶解度渗透压

不同稀释液对冻干A、C流脑结合疫苗质量的影响: 目的：选择合适的的冻干A、C群流脑多糖结合疫苗稀释液。方法：选择注射用水(H2O)、生理盐水(NS)、磷酸盐缓冲液(PBS pH6.8-7.2)作为稀释液，进行溶解度、pH、渗透压、异常毒性、免疫原性的检测比...; 郭蓉薛红刚马艳明项美娟杨晓明; 关键词：稀释液异常毒性免疫原性流脑多糖结合疫苗; 文献传递

b型流感嗜血杆菌多糖与肺炎球菌表面黏附素A结合疫苗的免疫原性及预防急性中耳炎效果的实验研究: 2018年; 目的利用肺炎球菌表面黏附素A(PsaA)为蛋白载体研制b型流感嗜血杆菌(Hib)多糖与蛋白的结合疫苗,并研究其在幼龄大鼠体内的免疫原性以及对肺炎球菌导致的急性中耳炎(AOM)的免疫保护作用。方法运用酰胺缩合法将PsaA与Hib荚膜多糖偶联结合制备多糖蛋白结合疫苗。选取30只约3周龄无特定病原体(SPF)雌性SD大鼠,体重88~102 g,随机分成实验组和对照组,每组15只。对幼龄SD大鼠进行疫苗接种,实验组接种Hib-PsaA疫苗,对照组接种磷酸盐缓冲液(PBS)。每2周接种1次,3次接种后检测动物血清相关抗体免疫球蛋白G(IgG)水平。然后对实验组及对照组大鼠分别以肺炎球菌经鼓膜穿刺注入中耳以诱发AOM,观察2组大鼠发生AOM的炎症反应情况。结果运用酰胺缩合法将Psa A与Hib多糖偶联结合,结合物的洗脱峰明显前移,表明细菌多糖与载体蛋白结合成功。接种该结合疫苗的实验组幼龄大鼠产生的抗Psa A抗体Ig G的几何平均滴度(GMT)为11 138,抗Hib抗体Ig G的GMT为7 017,而对照组抗PsaA抗体IgG的GMT与抗Hib抗体Ig G的GMT分别为729和348。实验组2种抗体Ig G均明显高于对照组(P<0.001)。肺炎球菌攻击后组织病理学检查发现,实验组大鼠在细菌攻击后第3天和第7天中耳炎症反应明显轻于对照组,显示Hib-Psa A结合疫苗对肺炎球菌诱发的大鼠AOM有免疫保护作用。结论运用酰胺缩合法可成功将PsaA蛋白与Hib多糖偶联结合,所制备的多糖蛋白结合疫苗在幼龄大鼠体内可诱导分别针对Psa A和Hib多糖的有效免疫应答反应,并且可有效预防肺炎球菌导致的大鼠AOM。; 陈泽宇徐江红郭蓉邱创钧陈兵; 关键词：结合疫苗 B型流感嗜血杆菌急性中耳炎免疫原性

以重组肺炎球菌表面黏附素A为载体蛋白的流感嗜血杆菌多糖结合疫苗的实验研究被引量：1: 2014年; 目的：研究以肺炎球菌表面黏附素（PsaA）为蛋白载体的 b 型流感嗜血杆菌（Hib）多糖结合疫苗的制备及其免疫原性和免疫保护作用。方法用基因工程技术制备 PsaA 基因重组蛋白（rPsaA），通过酰胺缩合法与 Hib 多糖偶联结合，制成结合疫苗（Hib-PsaA）。用此疫苗免疫接种3周龄幼鼠，同时以破伤风类毒素和 B 型流感嗜血杆菌（Hib）多糖结合疫苗（Hib-TT）接种小鼠作为对照及磷酸盐缓冲液（PBS）接种作空白对照。末次免疫后2周观察小鼠对 Hib 多糖和 PsaA 蛋白的免疫原性应答；同时以肺炎球菌分别注入免疫后小鼠和未免疫的对照小鼠听泡，分别于攻击后第3天和第7天观察小鼠中耳内细菌清除率和中耳炎症反应情况，观察新型疫苗的免疫保护作用。结果以基因工程技术成功制备并纯化 rPsaA 蛋白，并运用酰胺缩合法与 Hib 多糖偶联结合，结合物的洗脱峰前移，证明偶联成功。接种该结合疫苗的小鼠产生的抗 PsaA 的抗体 IgG 几何平均滴度（GMT）为4525；抗 Hib 抗体 IgG 的 GMT 为1393。在接种 Hib-TT 疫苗的对照组中，小鼠产生的抗 Hib 抗体 GMT 为1493，两种疫苗的抗 Hib 抗体 GMT 差异无统计学意义，但是 Hib-PsaA 结合疫苗显示出对肺炎球菌的免疫应答，优于以破伤风类毒素为载体的结合疫苗。细菌攻击后第3天实验组小鼠中耳细菌清除率明显高于对照组，组织病理学检查实验组小鼠细菌攻击后第3天和第7天中耳炎症反应明显轻于对照组，显示了 Hib-PsaA 结合疫苗针对肺炎球菌的有效免疫保护作用。结论运用基因工程技术可获得高纯度、高产量的 rPsaA 蛋白，以酰胺缩合法可成功将 rPsaA 蛋白与 Hib 多糖偶联结合，所制备的多糖蛋白结合疫苗在幼小鼠体内可诱导针对 rPsaA 蛋白与 Hib 多糖的免疫应答反应，并且可有效预防肺炎球菌导致的急性中耳炎。提示该疫苗免�; 陈泽宇郭蓉徐江红吴娟薛红刚范小勇; 关键词：多糖蛋白结合疫苗免疫保护

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