郭向飞
- 作品数：6 被引量：8H指数：2
- 供职机构：军事医学科学院卫生学环境医学研究所天津市环境与食品安全风险监控技术重点实验室更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 铜绿假单胞菌荧光实时定量PCR标准品的构建被引量：4
- 2009年
- 构建了荧光实时定量PCR标准品以检测水中的铜绿假单胞菌。利用所报道的铜绿假单胞菌gyrA基因为目的基因设计引物,通过培养细胞,煮沸法裂解细胞后做PCR,电泳,胶回收,然后与pMD19-TVector连接并转化到感受态大肠杆菌中;氨苄青霉素筛选出白色菌落,菌落PCR及测序鉴定其特异性,根据OD值确定浓度,制备梯度浓度参考标准品,制作标准曲线,检测水样品中铜绿假单胞菌的菌量。
- 孙飞龙邱志刚金敏郭向飞王新为吴道澄李君文
- 关键词：铜绿假单胞菌克隆标准品荧光实时定量PCR
- 用AFLP结合免疫纳米磁珠技术富集分离BPDE-DNA片段被引量：1
- 2007年
- 目的应用AFLP结合免疫纳米磁珠分离技术富集、分离与BPDE相互作用的DNA片段,从而为筛选BPDE致癌相关基因提供条件。方法应用AFLP技术和免疫纳米磁珠分离相结合技术获得差异片段,进行聚丙烯酰胺凝胶电泳及硝酸银染色观察。结果不同的选择性扩增引物组合均可得到清晰的多态性电泳图谱,以P1T2、P1T4、P1T3、P2T1、P3T4、P4T1、P5T2等组合扩增出的条带最多,均在60条左右,多态性丰富。对差异片段进行回收和PCR再扩增,再经琼脂糖凝胶电泳证实有回收产物出现,回收PCR再扩增片段与回收前的片段大小一致,成功富集、回收了差异片段。结论AFLP结合免疫磁珠分离技术可以分离富集BPDE-DNA片段,可作为筛选BPDE致癌相关的特异或易感基因的一种方法。
- 陈照立金敏郭向飞谌志强王景峰王新为李君文
- 关键词：DNA片段AFLP
- 人胎肝干细胞的分离培养、鉴定及mRNA转录分析被引量：2
- 2009年
- 目的:探讨体外大量扩增培养人胎肝干细胞的方法,研究其形态、特性及mRNA转录情况。方法:采用两步灌流法结合链霉蛋白酶消化及Percoll密度梯度离心法分离12～20周胎龄的胎肝细胞,采用免疫细胞化学染色及RT-PCR方法对分离培养的细胞进行鉴定分析。结果:刚分离的细胞活力在80%以上,原代培养3d开始出现小细胞团,2周后即形成肉眼可见的细胞集落,细胞体积小,核质比大;原代、传代培养的胎肝细胞甲胎蛋白(AFP)、细胞角蛋白19(CK19)、卵圆标记蛋白OV-6、细胞分化抗原34免疫染色阳性;RT-PCR分析证明胎肝干细胞中AFP、白蛋白、CK19、CK18和八聚体结合蛋白(OCT)-4mRNA的表达。结论:分离了胎肝干细胞,具有肝细胞、胆管细胞及干细胞表面标志及相应的基因表达,为进一步的基础研究奠定了基础。
- 郭向飞金敏陈照立李君文
- 关键词：胎肝干细胞MRNA转录
- 肝炎病毒体外培养模型及其构建方法与应用
- 本发明涉及肝炎病毒体外培养模型及其构建方法与应用，所述肝炎病毒体外培养模型采用人胎肝干细胞构建而成，包括分离培养人胎肝干细胞、免疫组化鉴定人胎肝干细胞、肝炎病毒血清感染人胎肝干细胞、验证肝炎病毒已感染人胎肝干细胞且病毒已...
- 李君文金敏郭向飞王姝陈照立邱志刚谌志强王新为王景峰
- 文献传递
- 乙型肝炎病毒体外感染模型的构建方法及应用
- 本发明涉及一种乙型肝炎病毒体外感染模型的构建方法及应用，采用人胎肝干细胞用于抗乙型肝炎病毒药物筛选的乙型肝炎病毒体外感染模型的构建方法的步骤为分离培养人胎肝干细胞、免疫组化鉴定人胎肝干细胞、乙肝病毒血清感染人胎肝干细胞、...
- 金敏郭向飞李君文陈照立邱志刚谌志强王新为王景峰
- 文献传递
- 人胎肝干细胞体外感染乙型肝炎病毒模型的建立被引量：1
- 2011年
- 目的建立一种稳定的基于人胎肝干细胞的维持乙型肝炎病毒（HBV）复制和传代的体外细胞培养模型,为深入研究乙肝病毒的生命周期和发病机制提供必要的工具。方法原代分离12-20周胎龄的胎肝干细胞,用乙肝病毒阳性血清感染胎肝干细胞;荧光定量PCR追踪检测细胞上清和细胞内乙肝病毒DNA及细胞内乙肝病毒复制中间体—闭合环状双链DNA（cccDNA）;化学发光法检测HBsAg、HBeAg分泌情况;免疫细胞化学法鉴定HBcAg表达情况;原位杂交检测细胞内病毒DNA。结果在经HBV感染的细胞上清液中可持续检测出乙肝病毒DNA、HBsAg和HBeAg,细胞内可检测出HBV-cccDNA和HBcAg。结论乙肝病毒可感染胎肝干细胞,并在细胞内增殖、分泌、传代,这一模型可模拟乙肝病毒自然感染人体的病理生理过程,为HBV感染机制研究和抗病毒药物的研发提供了必要的工具。
- 王姝金敏郭向飞王新为邱志刚谌志强李君文
- 关键词：乙型肝炎病毒胎肝干细胞细胞培养
