郑薇薇
- 作品数：9 被引量：61H指数：3
- 供职机构：深圳市疾病预防控制中心更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金福建省自然科学基金广东省卫生厅资助课题更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 改良分子信标-实时PCR快速检测副溶血弧菌被引量：27
- 2004年
- 目的 :建立改良分子信标 -实时 PCR检测副溶血弧菌的快速方法 ,应用于副溶血弧菌食物中毒的快速诊断和海产品检验。方法 :根据 Gen Bank公布副溶血弧菌的耐热直接溶血毒素基因 (TDH)的保守序列 ,设计一对引物和改良分子信标探针 ,用 FAM荧光剂标记探针的 5′,并进行特异性和灵敏度分析 ;同时以 11种细菌作对照 ,建立改良分子信标检测副溶血弧菌的实时 PCR反应体系 ,应用于副溶血弧菌食物中毒快速诊断和食品微生物检测。结果 :检测 12种细菌 ,只有副溶血弧菌有荧光信号 ,与其他细菌无交叉反应 ,DNA灵敏度为 16 6 .6 fg/ μl,菌液灵敏度为 6 9cfu/ ml或 6 cfu/ PCR反应体系。改良分子信标 -实时 PCR反应体系检测 4 0株副溶血弧菌均出现特异的荧光信号 ,无干扰。对 3起细菌性食物中毒共 4 8份样品和 10 0份海产品进行检测 ,9份副溶血弧菌实时 PCR阳性 ,其中 7份副溶血弧菌细菌培养阳性 ,其余样品都为阴性。检测时间仅需 2 h。结论 :改良分子信标 -实时 PCR检测体系快速、灵敏度高 ,特异性强 ,可用于副溶血弧菌食物中毒的快速诊断 。
- 扈庆华郑薇薇石晓路李庆阁王冰庄志雄刘小立
- 关键词：分子信标实时PCR副溶血弧菌食物中毒
- 改良分子信标—实时PCR快速检测霍乱弧菌被引量：9
- 2004年
- 目的 建立改良分子信标—实时PCR检测霍乱弧菌的快速方法 ,应用于霍乱监测。 方法 根据GenBank公布的霍乱弧菌肠毒素基因A亚单位 (ctxA)的保守序列 ,设计一对引物和改良分子信标探针 ,并进行特异性和灵敏度分析 ;同时以 11种细菌作对照 ,建立改良分子信标检测霍乱弧菌的实时PCR反应体系 ,应用于霍乱监测。 结果 霍乱弧菌改良分子信标检测体系检测 12种细菌 ,只有霍乱弧菌有荧光信号 ,与其他细菌无交叉反应 ,DNA灵敏度为10 2 4fg/ul ,菌液灵敏度为 3 2cfu/ml或 3cfu/PCR反应体系。对 10 0份海产品和 3 0份腹泻病人大便标本进行检测 ,结果都为阴性。检测时间仅需 2h。 结论 改良分子信标—实时PCR检测体系快速、灵敏度高、特异性强 ,可用于霍乱的快速诊断 。
- 扈庆华郑薇薇石晓路叶宝英李庆阁王冰庄志雄刘小立
- 关键词：霍乱弧菌流行病学
- 双重实时PCR快速同时检测霍乱弧菌和副溶血弧菌被引量：22
- 2004年
- 目的建立改良分子信标双重实时PCR同时检测霍乱弧菌和副溶血弧菌的快速方法,应用于霍乱监测、副溶血弧菌食物中毒的快速诊断和海产品检验。方法根据GenBank公布的霍乱弧菌肠毒素基因A亚单位(ctxA)和副溶血弧菌的耐热直接溶血毒素基因(TDH)的保守序列,分别设计引物和改良分子信标探针,以10种细菌作对照,建立双重实时PCR改良分子信标检测体系,应用于副溶血弧菌食物中毒快速诊断和霍乱监测。结果改良分子信标双重实时PCR反应体系DNA灵敏度为102.4～166.6fgμl,菌液灵敏度为32～64CFUml或3～6CFUPCR反应体系,无交叉反应。此反应体系同时检测40株副溶血弧菌和50株霍乱弧菌,均出现特异的荧光信号,两种细菌检测互不干扰。对3起细菌性食物中毒共48份样品和100份海产品进行检测,9份副溶血弧菌实时PCR阳性,其中7份副溶血弧菌细菌培养阳性,其余样品都为阴性。从样品处理到检测结果仅需1天时间。结论改良分子信标双重实时PCR检测体系快速、灵敏度高、特异性强,可用于霍乱和副溶血弧菌食物中毒的快速诊断,为食源性疾病的分子流行病学调查提供新的检测手段。
- 扈庆华郑薇薇石晓路李庆阁王冰庄志雄刘小立贺连华吴平芳
- 关键词：实时PCR副溶血弧菌霍乱弧菌食物中毒分子信标保守序列
- 实时聚合酶链反应熔解曲线分析检测APC基因突变被引量：3
- 2005年
- 目的建立一种准确、方便、价廉、适合临床的APC基因突变检测方法。方法采用SYBRGreenⅠ为实时聚合酶链反应(PCR)指示剂,首先从基因组DNA中扩增包含突变位点的靶基因(270bp),并通过熔解曲线分析确定产物;再以上述片段为模板扩增特定长度的小片段(40/35bp),以0.5℃/step的速率,获得从65℃到99℃的熔解曲线以检测APC_1309位5bp缺失突变。结果临床标本检测结果表明:18例结直肠肿瘤患者石蜡组织标本中检出APC_1309位5bp缺失突变7例,20例正常人外周血标本检测结果均为阴性。结论实时PCR熔解曲线法设计简单,操作简便,结果可靠,可望应用于临床APC基因突变检测,并可推荐用于其他基因突变的检测。
- 郑薇薇刘忠臣李庆阁
- 关键词：聚合酶链反应基因APC结肠直肠肿瘤
- ARMS实时PCR基因分型特异性的研究被引量：3
- 2005年
- 以原癌基因Kras基因12位密码子的4种基因型(野生型为GGT,突变型为AGT、TGT、CGT)质粒DNA为研究模型,采用SYBRGreenⅠ为实时PCR指示剂,进行ARMS实时PCR基因分型特异性的研究.结果表明:在和模板匹配的ARMS引物3′端附近引入故意错配碱基,将ARMS引物浓度稀释10倍,并对传统三步PCR循环进行改良,即根据目的产物和引物二聚体的熔点差异,在传统延伸步骤之后增加一步恒温80℃检测荧光步骤,可消除引物二聚体的影响,使ARMS引物的特异性增强,得到清晰的基因分型结果.实验表明这种基于SYBRGreenⅠ的ARMS实时PCR基因分型方法,无需合成探针,实验设计简单,是一种快速、简便、经济、特异性好的基因分型方法,可推广用于其他基因的分型,并可望成为应用于临床的基因诊断技术之一.
- 郑薇薇梁基选李庆阁
- 关键词：基因分型特异性基因诊断技术SYBRRAS基因
- ARMS实时PCR和MALDI-TOF-MS进行K-ras基因分型被引量：1
- 2005年
- [目的]建立K-ras基因12位密码子第一、二位点基因分型的研究模型。[方法]采用ARMS实时PCR和MALDI-TOF-MS两种方法,以自行构建的质粒DNA为模板,建立K-ras基因12位密码子第一、二位点基因分型的研究模型。[结果]在相同的扩增条件下,采用ARMS实时PCR方法,第一个位点的野生型和突变型的ΔCt值至少为,但第8二个位点野生型和突变型的ΔCt值仅为1～2左右。第二个位点改用MALDI鄄TOF-MS分型方法,采用一条公用引物和dATP,ddTTP,ddCTP和ddGTP的混和物,12密码子第二位点基因分型可以准确检测。[结论]ARMS实时PCR方法分析速度快,操作简便,但它需要合适的反应条件及高质量模板。MALDI-TOF-MS分型方法虽然步骤较多,但准确度高,反应体系稳定并具有高通量潜力。
- 刘忠臣郑薇薇李庆阁
- 关键词：实时PCR基因分型K-RAS基因
- 双重荧光PCR－改良分子信标检测食源性致病菌的方法
- 本发明涉及一种双重荧光PCR－改良分子信标检测食源性致病菌的方法，根据待测两种致病菌的特异基因序列设计对应的一对引物1和改良分子信标探针1，以及一对引物2和改良分子信标探针2，采用荧光PCR－改良分子信标扩增待测两种致病...
- 扈庆华李庆阁郑薇薇石晓路郑琳琳王冰庄志雄刘小立张顺祥
- 文献传递
- 多重荧光PCR－改良分子信标检测食源性致病菌的方法
- 本发明涉及一种多重荧光PCR－改良分子信标检测食源性致病菌的方法，根据待测多种致病菌的特异基因序列设计多对引物和多个改良分子信标探针，采用荧光PCR－改良分子信标扩增待测多种致病菌特异基因的序列，利用分子信标与扩增产物的...
- 扈庆华李庆阁郑琳琳石晓路郑薇薇王冰庄志雄刘小立张顺祥
- 文献传递
- MALDI-TOF-MS结合引物延伸反应检测K-ras基因型方法的建立
- 2005年
- 目的:建立MALDI-TOF-MS结合引物延伸的方法检测K-ras基因12位密码子7种基因型的研究模型并探讨其应用价值。方法:以自行构建的K-ras质粒DNA为模板,经目的片断扩增,去磷酸化,再用两条未经修饰的普通引物,在dATP、ddTTP、ddCTP和ddGTP混和物存在的体系中进行引物延伸反应,最后用MALDI-TOF-MS检测引物延伸产物质荷比(m/z),得到质谱图,根据质谱图中各个峰的峰值进行基因分型研究。结果:用MALDI-TOF-MS结合引物延伸的方法,可以准确区分7种不同基因型。该方法可同时对384份样品进行检测。结论:MALDI-TOF-MS结合引物延伸的方法准确度高,反应体系稳定并具有快速、高通量、自动化的特点,可能成为肿瘤早期诊断的检测方法。
- 刘忠臣郑薇薇李庆阁赵家宏
- 关键词：基因RAS突变
