赵莉敏
- 作品数：21 被引量：78H指数：5
- 供职机构：北京市心肺血管疾病研究所更多>>
- 发文基金：北京市自然科学基金国家自然科学基金首都医学发展科研基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 人心肌肌球蛋白轻链基因启动子驱动的GFP和Luc报告基因在人心肌细胞系中的表达被引量：2
- 2012年
- 目的:构建人肌球蛋白2v基因启动子(pMLC2v)驱动的绿色荧光蛋白(GFP)和萤光素酶(Luc)报告基因慢病毒载体并观察其在人心肌细胞系(HCM)和人肺癌细胞株A549中的整合表达特征。方法:应用去毒化的人类I型免疫缺陷病毒和pMLC2v-GFP或pMLC2v-Luc报告基因构建慢病毒示踪载体,转染HCM和A549细胞,激光共聚焦显微镜及生物发光检测仪观察2种报告基因在不同细胞生长进程中的表达特征。非特异性启动子驱动的GFP(GFPC)和红色荧光蛋白(RFPC)报告基因作为对照。结果:2种细胞转染GFPC和RFPC后第3 d,都表达GFP和RFP;而HCM只在转染pMLC2v-GFP和pMLC2v-Luc 21 d后表达GFP和Luc,A549细胞不表达。结论:pMLC2v主要在培养21 d后新增殖的人心肌细胞中驱动GFP和Luc报告基因表达,这为监测干细胞向心肌细胞的分化进程提供了可靠的病理及活体示踪工具。
- 许秀芳辛毅汪劲松赵莉敏杜兰萍葛桂玲李娜张颖王世强黄益民罗毅
- 关键词：肌球蛋白轻链萤光素酶
- 富含微量元素矿泉水对人血管平滑肌细胞生长增殖的影响
- 2010年
- 目的研究富含微量元素矿泉水对体外培养血管平滑肌细胞（HVSMCs）生长增殖的影响。方法无菌取12例冠状动脉旁路移植术患者术中废弃的大隐静脉，应用金山矿泉水配制的DMEM培养液（MW—DMEM）和双蒸水配制的DMEM培养液（DDW—DMEM）分别培养平滑肌细胞，分为金川矿泉水组和双蒸水组。观察记录2种培养液培养的HVSMCs游出组织块的时间及细胞呈“峰”-“谷”样时间；建立血管紧张素Ⅱ诱导HVSMCs增殖模型，采用MTT比色法观察2种培养液对AngⅡ诱导HVSMCs增殖抑制作用；应用电镜和免疫组织化学染色法观察鉴定HVSMCs。结果金川矿泉水组培养的HVSMCs贴壁时间为（3．7±0．2）d，双蒸水组为（8．5±0．6）d；金川矿泉水组培养的HVSMCs自贴壁后到长成“峰”-“谷”样形态的时间为（8．3±0．2）d，双蒸水组为（7．1±0．5）d；MTT比色法测定金川矿泉水组培养的HVSMCs的增殖活度明显降低；电镜观察MW—DMEM培养的HVSMCs细胞形态完整，表面有丰富的微绒毛。HVSMCs胞浆内富含肌丝，纵向平行排列，胞内有密体；抗-actin平滑肌肌动蛋白免疫组织化学染色后可见胞浆内染成褐色呈细丝网状。结论富含微量元素和矿物质的金川矿泉水具有修复血管平滑肌细胞损伤和抑制血管紧张素Ⅱ诱导HVSMCs增殖的作用。
- 赵莉敏文杰刘阔刘洁琳刘雅洪昭光唐朝枢温绍君
- 关键词：微量元素血管平滑肌细胞细胞培养增殖
- 血管平滑肌细胞和内皮细胞联合种植生物可降解材料的组织工程血管研究被引量：4
- 2005年
- 目的探讨应用组织工程学方法构建人工血管片。方法应用聚(乙交酯/丙交酯)二元共聚物(PLGA)无纺网织片作为细胞支架,体外逐层顺序种植血管平滑肌细胞、内皮细胞制作组织血管片。免疫组织化学方法鉴定平滑肌细胞、内皮细胞;扫描电镜观察组织血管片生长情况;放射免疫方法检测内皮细胞分泌内皮素、前列腺素E的功能。结果免疫组织化学染色鉴定平滑肌细胞肌动蛋白染色阳性,内皮细胞凝血Ⅷ因子相关抗原染色阳性。组织血管片在扫描电镜下显示出细胞融合,连接成片。放射免疫方法可以检测出平滑肌细胞和内皮细胞联合培养的组织片分泌内皮素(229pg/ml±34pg/ml),分泌前列环素的代谢产物6-酮-前列腺素F1α(402pg/ml±108pg/ml)。结论应用PLGA无纺网织片作为细胞支架,体外逐层种植血管平滑肌细胞、内皮细胞制作的组织血管片,基本具备正常血管组织基本形态结构和功能。
- 温绍君赵莉敏李平李京倖刘雅刘洁琳陈英淳
- 关键词：人工血管细胞血管内皮
- 心钠素对培养人心包间皮细胞内钙离子浓度的影响被引量：8
- 2002年
- 目的 探讨心纳素与人类心包间皮细胞之间的关系。 方法 分离人心包间皮细胞进行体外培养 ,用Fluo 3作为钙的指示剂 ,利用激光共聚焦显微镜测定 10 - 9mol L ,10 - 1 0 mol L ,10 - 1 1 mol L心钠素 (ANP)分别用作用于人心包间皮细胞后细胞内Ca2 + (Ca2 + )浓度变化。 结果 人心包间皮细胞存在细胞内Ca2 + 浓度的改变 ,随着ANP浓度的增加 ,细胞内Ca2 + 浓度出现非常明显的变化 (P <0 0 0 0 1) ;细胞内Ca2 + 浓度随时间变化也出现明显的变化 (P <0 0 0 0 1) ;不同时间测定的钙离子浓度与ANP浓度之间存在着交互作用 (P <0 0 0 0 1)。 结论 人心包间皮细胞存在细胞内Ca2 + 的改变 ;不同浓度的ANP作用于间皮细胞后引起细胞内Ca2 +
- 温绍君王佐广赵莉敏高宇翔文杰张忱徐燕玲何士大
- 关键词：激光共聚焦显微镜钙离子心钠素体外培养
- 西藏高原红细胞增多症患者红细胞生成素低氧反应增强子多态性研究被引量：7
- 2000年
- 刘舒裴澍萱张世馥王春荣陈燕赵莉敏孔祥诚刘艳霞
- 关键词：高原红细胞增多症红细胞生成素
- M-200培养液培养成人大隐静脉内皮细胞
- 本文对应用M-200培养基培养成人大隐静脉内皮细胞进行了研究。文章选取28例冠脉搭桥患者(年龄45-70岁)术中废弃大隐静脉,采用酶消化法分离血管内皮细胞,用M-200培养基按1x104/cm2接种细胞进行原代培养,观察...
- 赵莉敏温绍君刘洁琳刘雅刘亚萍陈新军王世奇
- 关键词：细胞培养大隐静脉内皮细胞生物医学
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- 231培养液培养成人大隐静脉平滑肌细胞被引量：3
- 2006年
- 目的:应用231培养基培养成人大隐静脉平滑肌细胞探讨其有效方法。方法:实验于2004-11/2005-3在首都医科大学附属北京安贞医院北京心肺血管疾病研究所中心实验室完成。①平滑肌细胞分离:40例冠状动脉旁路移植术患者(年龄43～74岁)术中废弃的大隐静脉,经患者同意无菌取2.0～3.0cm。2.5g/L胰蛋白酶溶液吹打消化15min,去除内皮细胞,同时松动平滑肌细胞,便于细胞游离出组织块生长。将血管剪成2.0～3.0mm2的小块贴到培养瓶底,加入完全231培养液3mL,直立放入37℃、体积分数为0.05的CO2、饱和湿度的培养箱中,24h后将培养瓶放平使培养液浸没组织块继续培养。②平滑肌细胞传代:当细胞延组织块周围密集成片生长时,即可传代。③平滑肌细胞形态观察:应用倒置显微镜观察平滑肌细胞生长状况,记录生长曲线,观察各生长时期变化。④平滑肌细胞鉴定:应用透射电镜和免疫组织化学方法鉴定平滑肌细胞。结果:①大隐静脉平滑肌细胞形态观察结果:大隐静脉平滑肌细胞原代培养沿组织块长出时间为2～14d,经过7d潜伏期细胞进入对数生长期,细胞呈“峰谷”长势。原代细胞培养第(25±2.1)天传第1代,传代24h后进入对数生长期,细胞传10代以上仍保持良好的形态结构。培养成功率100%。培养过程中未见杂细胞或微生物污染。②大隐静脉平滑肌细胞鉴定结果:电镜下观察,胞浆内富含肌丝,纵向平行排列,胞内有密体,具有平滑肌细胞特征;抗α平滑肌肌动蛋白免疫组织化学染色后可见胞浆内染成褐色呈细丝网状,所有细胞均呈阳性染色。证实培养细胞为平滑肌细胞。结论:利用消化贴块方法分离人大隐静脉平滑肌细胞,应用231培养基进行培养,不仅培养成功率高,并且可产生高纯度及多数量的平滑肌细胞。技术具有操作简便,污染机会少,为心血管疾病研究和组织工程学研究及应用提供可�
- 赵莉敏温绍君刘雅刘洁琳刘亚萍陈新军王世奇
- 关键词：隐静脉肌细胞平滑肌细胞培养
- 烟草提取物对人脐静脉内皮细胞影响的研究
- 2016年
- 目的:观察香烟提取物(CES)对人脐静脉内皮细胞的影响,并初步探讨吸烟导致动脉粥样硬化的可能机制。方法:采用浓度分别为2.5%、5%、10%、20%和40%的CSE以相同的时间24h处理人脐静脉内皮细胞,另用同一浓度10%CSE分别处理人脐静脉内皮细胞6,12,24和48 h,用MT方法分析浓度及时间梯度CES处理后细胞的抑制率。采用未加CES处理的人脐静脉内皮细胞作为对照组,ELISA方法检测VCAM-1、ICAM-1、TNF-α及IL-6等细胞因子的水平;Western blot方法检测人脐静脉内皮细胞自噬基因蛋白的表达水平。结果:MTT检测显示CSE以浓度梯度和时间梯度的方式降低HUVEC的细胞活性;ELISA检测结果表明CES增加VCAM-1、ICAM-1、TNFα及IL-6等黏附因子和炎症因子水平;Western blot结果表明10%CSE处理人脐静脉内皮细胞会降低抑制凋亡基因Bcl-2蛋白的表达水平,增加促凋亡基因Bax及促进细胞自噬的基因Beclin1的蛋白表达水平。结论:研究结果显示CES可能通过提高细胞黏附因子和炎症因子水平,促进HUVEC的凋亡和自噬,从而对内皮细胞及血管内皮产生影响。
- 李云涛孟康蔺洁赵莉敏曾哲淳吴雪
- 关键词：吸烟人脐静脉内皮细胞凋亡细胞因子自噬
- 血管紧张素Ⅱ与血管紧张素-(1-7)对人血管平滑肌细胞内游离钙浓度的影响
- 2005年
- 目的：观察血管紧张素Ⅱ与血管紧张素-(1-7)分别刺激后，培养的人血管平滑肌细胞内游离Ca^(2+)浓度的变化情况。 方法：实验于2004-06／2004-12在首都医科大学附属北京安贞医院高血压研究室完成。①收集2004-06／2004-09安贞医院心脏外科进行冠状动脉旁路移植术患者术中剩余大隐静脉，进行体外人血管平滑肌细胞培养，并分为高血压搭桥组(n=23，男22例，女1例)和正常血压搭桥组(n=17，男16例，女1例)。②用钙荧光探针Fluo-3／AM作为钙指示 剂，利用激光共聚焦显微镜观察不同浓度的血管紧张素Ⅱ和血管紧张素-(1-7)分别刺激后的平滑肌细胞内游离钙浓度的变化情况。 结果：①在分别加入血管紧张素Ⅱ和血管紧张素-(1-7)前，细胞内的Ca^(2+)也具有一定的荧光光密度，但是相对较低。②经血管紧张素Ⅱ和血管紧张素-(1-7)刺激后人平滑肌细胞内Ca^(2+)均迅速升高。③高血压搭桥组血管紧张素Ⅱ刺激后平滑肌细胞胞内Ca^(2+)荧光光密度明显高于正常血压搭桥组，而经血管紧张素-(1-7)刺激后，高血压搭桥组平滑肌细胞胞内Ca^(2+)荧光光密度明显低于正常血压搭桥组。 结论：①血管紧张素Ⅱ和血管紧张素-(1-7)刺激后人血管平滑肌细胞存在胞内Ca^(2+)的变化。②抑制血管紧张素Ⅱ介导的平滑肌细胞内游离Ca^(2+)浓度增加可能是血管紧张素-(1-7)的舒血管机制之一。
- 刘雅温绍君赵莉敏刘洁琳文杰王佐广刘亚萍陈新军
- 藏药1号与7号水提液对大鼠离体胸主动脉条收缩的抑制作用被引量：8
- 2003年
- 目的 通过对比观察藏药 1号与藏药 7号水提液对大鼠离体胸动脉条收缩作用的影响 ,研究藏药 1号与藏药 7号的降压机制。方法 以生理盐水作为对照组 ,观察藏药 1号与藏药 7号水提液 (6mg/ml)和维拉帕米 (Ver 0 0 1 3mg/ml)对高K+ 液引起的主动脉条收缩的时效影响 ,观察对KCl,NE及CaCl2 引起的大鼠主动脉条收缩的量效曲线的影响 ,以及对NE引起的依赖于细胞内钙及细胞外钙的收缩的影响。结果 藏药 1号与藏药 7号水提液抑制高K+液引起的主动脉收缩 (P <0 0 0 1 ) ;而且可以使KCl,NE及CaCl2 引起的大鼠主动脉条收缩的量效曲线非平行右移 ,最大效应降低 ,呈非竞争性拮抗作用 (P <0 0 5) ,与维拉帕米相似 ,并且对NE引起的依赖于细胞内钙及细胞外钙的收缩均有抑制作用 (P <0 0 5)。从 pD’2值分析 ,藏药 1号的药效作用要强于藏药 7号 ,但比Ver的弱。 结论 提示藏药 1号与藏药 7号的降压机制与钙离子通道拮抗剂一致 ,而且其作用效果比Ver延迟、平缓 ,其最大作用与Ver相近。而且藏药 1号药效更加显著。
- 彭晓云温绍君陶燕铎于庆利王佐广赵莉敏梅丽娟王绿娅刘志勤曹伟国
- 关键词：维拉帕米
