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绿脓杆菌ATCC27853菌株外毒素A全长编码基因的克隆及其在HEK293T细胞中的表达: 采用 PCR 方法从绿脓杆菌(Pseudomonas aeruginosa)ATCC27853菌株基因组扩增绿脓杆菌外毒素 A(Pseudomonas aeruginosa exotoxin A,PEA)全长编码基因,并...; 吴凌娟仲飞解民靳慧君王微韩冬梅; 文献传递

猪β防御素-2基因在HEK293T细胞中的表达被引量：2: 2009年; 用Trizol试剂提取猪血白细胞总RNA,根据已发表的序列设计引物,采用RT-PCR方法扩增出猪β防御素-2(pBD-2)基因,并将该基因插入到真核表达载体pcDNA3.1A中,构建成猪β防御素-2基因的真核表达载体pcDNA3.1A/pBD-2,经磷酸钙介导转染HEK293T细胞进行表达。结果表明:本试验扩增的pBD-2基因与已发表的序列完全一致。表达产物经Western-blot检测,证明pBD-2能够在真核细胞HEK293T中表达。; 王微解民吴凌娟靳慧君韩冬梅仲飞

狐狸生长激素基因的克隆及其在毕赤酵母中的表达被引量：1: 2009年; 为制备重组狐狸生长激素(fGH),采用RT-PCR方法,从银狐垂体中扩增fGHcDNA基因,利用SnaBI和NotI位点将fGH基因插入到酵母分泌型表达载体pPIC9K中α-因子信号肽的下游,构建成fGH基因的酵母分泌型表达载体pPIC9K/fGH,载体经SalI酶切线性化后,通过电转移将线性化的pPIC9K/fGH转化到组氨酸缺陷型酵母宿主菌GS115中。然后利用不含氨基酸的以葡萄糖为碳源的培养基(MD)和以甲醇为碳源的培养基(MM)筛选出组氨酸His+型和甲醇利用正型(Mut+)酵母重组体,再经G418加压筛选出高拷贝fGH基因的重组酵母,经摇瓶发酵培养和甲醇诱导使fGH进行分泌表达。结果表明本实验扩增的fGH基因序列与GenBank发表的序列基本一致,发酵液经SDS-PAGE和Western blotting检测证明构建的重组酵母能够分泌表达fGH,表达的fGH占发酵液总蛋白的34%,表达量达119mg/L发酵液。; 李巍李秀锦仲飞靳慧君解民刘玉芝刘龙飞苏清洁; 关键词：CDNA 毕赤酵母分泌表达

重组猪β防御素2在毕赤酵母中的表达及其鉴定被引量：3: 2010年; 根据GenBank猪β防御素2(pBD-2)的氨基酸序列,参照酵母偏爱的密码子,设计无信号肽序列的pBD-2的基因编码序列,并由公司合成。将合成的基因通过SnaBⅠ和NotⅠ位点插入到酵母表达载体pPIC9K的α因子信号肽序列下游,构建成pBD-2基因的分泌表达载体pPIC9K/pBD-2。利用电穿孔法将经SalⅠ线性化的pPIC9K/pBD-2质粒导入毕赤酵母GS115中,通过G418加压筛选得到His+Mut+表型的高拷贝转化子。经PCR检测证明pBD-2基因在毕赤酵母染色体上得到整合。阳性重组酵母经摇瓶发酵培养和甲醇诱导,用SDS-PAGE方法在发酵上清中检测到重组pBD-2的存在,说明构建重组酵母菌能够分泌性表达pBD-2。琼脂孔穴扩散法检测结果显示,pBD-2对金黄色葡萄球菌有较好的抑菌活性。; 解民仲飞李秀锦吴凌娟李凌李巍; 关键词：毕赤酵母分泌表达抗菌活性

β-防御素基因在毕赤酵母中分泌表达的影响因素及优化: 巴斯德毕赤酵母表达系统是一种优秀的重组蛋白表达系统,近年来被广泛的应用于重组蛋白的表达。该文从诱导时间、pH值、甲醇剂量等方面对重组基因酵母工程菌的摇瓶发酵条件进行了优化,找出最佳的外源蛋白表达条件。结果表明:摇瓶发酵最...; 解民亢春雨苏旭东樊喜福马小燕李英军张会彦张伟; 关键词：巴斯德毕赤酵母摇瓶发酵; 文献传递

β-防御素基因在毕赤酵母中分泌表达的影响因素及优化: 巴斯德毕赤酵母表达系统是一种优秀的重组蛋白表达系统,近年来被广泛的应用于重组蛋白的表达。该文从诱导时间、pH 值、甲醇剂量等方面对重组基因酵母工程菌的摇瓶发酵条件进行了优化,找出最佳的外源蛋白表达条件。结果表明：摇瓶发酵...; 解民亢春雨苏旭东樊喜福马小燕李英军张会彦张伟; 关键词：巴斯德毕赤酵母摇瓶发酵; 文献传递

犬β防御素-1真核表达载体的构建及其在HEK293T细胞中的表达被引量：4: 2008年; 哺乳动物的β-防御素是一类具有广谱抗微生物活性的阳离子小肽。为了克隆和分析犬β防御素-1基因,并建立一套在HEK293T细胞中高效表达犬β防御素-1的方法,本研究采用RT-PCR方法从犬睾丸组织中扩增出犬β防御素-1(cBD-1)的cDNA基因,并将其克隆到pcDNA3.1A载体中,构建了犬β防御素-1基因的真核表达载体pcDNA3.1A-cBD-1,经磷酸钙介导转染HEK293T细胞进行表达。结果表明:克隆的犬β防御素-1基因序列与已发表序列(GenBank编号:NM-001024641)的同源性为99.7%。表达犬β防御素-1经Western-blot检测,证明构建的犬β防御素-1基因表达载体能够在真核细胞中表达,表达产物能够分泌到细胞外。为进一步研究犬β防御素的功能奠定了基础。; 靳慧君仲飞吴凌娟解民王微韩冬梅

犬β防御素-1真核表达载体的构建及其在HEK293T细胞中的表达: 哺乳动物的β-防御素是一类具有广谱抗微生物活性的阳离子小肽。为了克隆和分析犬β防御素-1基因,并建立一套在 HEK293T 细胞中高效表达犬β防御素-1的方法,本研究采用 RT-PCR 方法从犬睾丸组织中扩增出犬β防御素...; 靳慧君仲飞吴凌娟解民王微韩冬梅; 文献传递

β防御素2基因酵母工程菌的构建和表达: 防御素是生物体在抵御病原微生物的防御反应过程中产生的一类重要的抗菌肽类物质。它具有十分广泛的抗菌谱，可以抵抗细菌、真菌、被膜病毒等多种微生物，尤其是哺乳动物防御素除了对细菌、真菌、被膜病毒有毒杀作用外，还对支原体、衣原体...; 解民; 关键词：防御素免疫应答毕赤酵母基因调控; 文献传递

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解民