范羽
- 作品数：6 被引量：46H指数：2
- 供职机构：天津医科大学总医院更多>>
- 发文基金：“十一五”国家科技攻关计划国家自然科学基金国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 人端粒酶催化亚单位启动子调控nm23-H1基因靶向性表达抑制肺癌转移的实验研究
- 近年来,有研究者尝试将端粒酶催化亚单位的启动子(hTERTp)作为抗肿瘤基因治疗的调控元件,用于肿瘤的靶向基因治疗.本文以正常人血细胞基因组DNA为模板，克隆人的hTERT启动子，并插入PGL3-enhancer中，构建...
- 范羽万海粟吴衡尤嘉琮周清华
- 关键词：肺癌基因调控靶向治疗
- 文献传递
- 槐耳清膏抑制肺癌血管生成及其分子机理的实验研究
- 背景与目的：肺癌是发病率和死亡率增加最快，对人类健康和生命威胁最大的恶性肿瘤。虽然近年来肺癌的基础与临床研究均取得了一定进展，但遗憾的是肺癌的治愈率目前仍然低于15％。究其原因，一方面是目前尚无肺癌早期诊断的有效方法，绝...
- 范羽
- 关键词：槐耳清膏血管生成流式细胞术肺癌分子机理
- 文献传递
- 槐耳清膏对人高转移大细胞肺癌细胞L9981血管生成相关基因表达的影响被引量：37
- 2006年
- 背景与目的肺癌是全世界对人类健康与生命危害最大的恶性肿瘤之一。目前从植物中开发抗肿瘤药物是国内外抗肿瘤新药开发的一个热点。本研究的目的是观察槐耳清膏对人高转移大细胞肺癌细胞株L9981血管生成相关基因mRNA转录表达的影响及意义,并探讨其可能的分子机制。方法体外培养人高转移大细胞肺癌细胞L9981,应用台盼蓝拒染法做细胞毒性实验,实验分为:空白对照组,槐耳清膏组,顺铂化疗组,联合用药组。应用RTPCR检测四组细胞株用药前后βcatenin、Ecadherin、TIMP1、CD44V6、MMP2、endostatin、VEGFmRNA的表达。应用Boyden小室法检测四组细胞株用药前后体外侵袭力改变。结果①槐耳清膏对L9981细胞的生长有明显的抑制作用,且抑制率随药物浓度增加而上升。槐耳清膏组(1g/L)与顺铂化疗组(顺铂3mg/L)及联合用药组(槐耳清膏0.05g/L+顺铂1.5mg/L)比较抑制率无明显差异(P>0.05)。②经槐耳清膏处理后,L9981细胞的βcatenin、Ecadherin、TIMP1、endostatin、MMP2的mRNA表达水平上调,而VEGF、CD44V6表达水平下调,其中TIMP1、endostatin表达水平明显上调,CD44V6表达水平明显下调。③槐耳清膏组、顺铂化疗组、联合用药组细胞株的体外侵袭力均明显低于空白对照组(P<0.05)。结论①槐耳清膏在体外对人高转移大细胞肺癌细胞L9981具有生长抑制作用,该抑制作用呈剂量依赖性。②槐耳清膏对L9981的生长抑制作用可能与其调控血管生成相关基因mRNA的表达有关。③槐耳清膏联合顺铂有一定的协同抗肿瘤作用。
- 张芷旋范羽周清华王艳萍马力陈小禾朱文杨雪琴赵颖
- 关键词：槐耳清膏抗血管生成
- 野生型和突变型nm23-H1基因原核表达载体的构建、表达及纯化被引量：2
- 2009年
- 背景与目的nm23-H1基因是一个肿瘤转移抑制基因,但关于nm23-H1基因抑制肿瘤转移的生化机理目前并不清楚。该实验目的就是构建nm23-H1野生型和P96S、H118F突变型原核表达载体,并在大肠杆菌中表达及纯化。方法通过PCR方法扩增野生型和突变型nm23-H1目的片断,利用基因重组技术构建pET28a-nm23-H1野生型和突变型原核表达载体,并进行酶切和测序鉴定,鉴定正确克隆转化BL21(DE3)溶源菌,进行蛋白表达及可溶性分析,同时采用镍柱亲和层析法进行纯化,应用Western blot方法对纯化后蛋白进行鉴定检测。结果通过酶切和测序鉴定,pET28a-nm23-H1野生型和突变型原核表达载体序列正确,编码框正确。转化溶源菌后能够表达目的蛋白,蛋白表达量高,且均为可溶性蛋白,Western blot检测结果提示野生型和突变型nm23-H1蛋白分子量为20kDa,与预计值相符。结论成功构建pET28a-nm23-H1野生型和P96S、H118F突变型原核表达载体,所表达蛋白可用于下一步实验研究。
- 杨雪琴范羽陈军刘红雨马力朱大兴王东王阁周清华
- 关键词：NM23-H1基因基因表达转移抑制基因
- 人肺癌EGFR基因突变与Gefitinib耐药相关性研究被引量：7
- 2009年
- 背景与目的以人肺癌细胞株PC9及其耐药子系细胞PC9/AB2、PC9/AB11、PC9/BB4为模型,观察4株细胞对Gefitinib的耐药差异及耐药机制。方法体外培养细胞测定耐药指数,对4株细胞EGFR基因exon18-21进行测序并在mRNA水平上的测定表达量差异。结果PC9及其3株耐药子系细胞均存在耐药性差异。PC9及其3株耐药子系细胞均存在19外显子15bp缺失突变并且耐药细胞株PC9/AB11外显子20存在A→G的点突变。敏感细胞株PC9的EGFR基因在mRNA水平上的表达量明显高于其他3株耐药株。结论PC9、PC9/AB2、PC9/AB11和PC9/BB4肺癌细胞株对Gefitinib的耐药性存在非常显著的差异,4株肺癌细胞株EGFR基因突变和mRNA表达水平的差异与其与Gefitinib获得性耐药有关。
- 魏巍范羽刘红雨吴志浩万海粟阎志琴徐克周清华
- 关键词：EGFR基因耐药GEFITINIB肺肿瘤
- Raf全长及氨基端、羧基端真核表达载体的构建和表达
- 2008年
- 背景与目的Raf是Ras-Raf-MEK-ERK信号转导通路中的关键分子,在多种人类肿瘤中存在高度活化,然而其生物学功能和详细调节机理目前尚未完全明了。本研究旨在构建人Raf基因全长(Raf-1),氨基端(N-Raf)及羧基端(C-Raf)真核表达载体,并观察其在293T细胞中的表达情况。方法通过PCR方法扩增Raf-1,N-Raf和C-Raf目的片段,利用基因重组技术构建pCMV-Tag2b-Raf-1,pCMV-Tag2b-N-Raf和pCMV-Tag2b-C-Raf真核表达载体,并进行酶切和测序鉴定。鉴定正确的克隆瞬时转染293T细胞,Western blot检测目的蛋白的表达。结果酶切和测序结果均证实pCMV-Tag2b-Raf-1,pCMV-Tag2b-N-Raf和pCMV-Tag2b-C-Raf真核表达载体的序列和编码框均正确无误,转染后的293T细胞经Western Blot检测可正确表达目的蛋白。结论本研究成功构建了pCMV-Tag2b-Raf-1,pCMV-Tag2b-N-Raf和pCMV-Tag2b-C-Raf真核表达载体并可在293T细胞中表达,为今后进一步研究Raf基因的生物学机理奠定了基础。
- 王卓敏陈军万海粟刘红雨朱文肖文范羽李永文孙丽亚周清华
- 关键词：RAF基因重组真核表达
