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TFPI-2对人肝癌细胞生长增殖、凋亡及AFP合成的影响被引量：5: 2011年; 目的:探讨TFPI-2基因对人肝癌细胞Hep3B生长增殖、凋亡及甲胎蛋白AFP表达的影响。方法:将重组质粒PCDNA3.1-TFPI-2转染Hep3B细胞并经G418稳定筛选后,RT-PCR和Westernblot检测转染前后TFPI-2 mRNA和蛋白表达水平,采用CCK-8法、生长曲线观察TFPI-2对人肝癌细胞Hep3B生长增殖的影响,通过平板克隆形成实验观察单个细胞的增殖能力,RT-PCR检测AFP mRNA的表达,并用电化学发光法测定培养上清液中甲胎蛋白AFP含量,流式细胞仪检测细胞早晚期凋亡情况。结果:转染成功的Hep3B细胞检测到TFPI-2 mRNA和蛋白的表达;与转染空载体及未转染的细胞相比,转染TFPI-2的细胞生长增殖能力明显减弱;AFP mRNA表达抑制率为16.51%,AFP蛋白分泌明显低于对照组(P<0.01);流式细胞术检测转染TFPI-2的Hep3B细胞早期凋亡率明显增加(24.03%±7.28%vs 8.77%±3.66%)。结论:TFPI-2表达可显著抑制肝癌细胞生长和AFP的表达,同时还能诱导细胞早期凋亡。为进一步探讨靶向TFPI-2的肝癌基因治疗提供了实验依据。; 秦晓林徐勇范晓卿李武县匡文斌成凤涂植光; 关键词：肝癌组织因子途径抑制物-2 甲胎蛋白

携人IL-12基因腺病毒的构建及其对Hep3B细胞增殖及TGF-β表达的影响被引量：7: 2012年; 目的:构建携带人IL-12的重组腺病毒,观察其对Hep3B增殖及TGF-β表达的影响。方法:PCR扩增IL-12基因,构建穿梭质粒pAdTrack-IL-12;穿梭质粒经Pme I线性化后转化AdEasier Cell,E.coli BJ5183内同源重组;PacⅠ酶切重组腺病毒质粒,转染AD293,包装病毒;病毒pAd-IL-12感染肝癌细胞Hep3B,以RT-PCR、Western blot检测白介素12的表达;MTT法检测肝癌细胞的增殖情况;RT-PCR检测转化生长因子-β(TGF-β)的表达。结果:成功构建携IL-12基因的重组质粒,并成功包装可高效感染Hep3B的腺病毒pAd-IL-12;RT-PCR以及Western blot结果表明,病毒pAd-IL-12感染Hep3B后可高表达白介素12,并且与对照组相比Hep3B增殖能力显著降低(P<0.05),TGF-β表达量也降低(P<0.05)。结论:可高表达IL-12的腺病毒包装成功,感染肝癌细胞Hep3B后抑制其增殖,同时也下调TGF-β的表达,为进一步研究IL-12的肿瘤治疗作用奠定了基础。; 成凤匡文斌王秦秦晓林范晓卿董晋豫梁勤东李朴涂植光; 关键词：白介素12 细胞增殖

重组腺病毒Ad5-hNK4-EGFP的构建与鉴定被引量：3: 2012年; 目的构建携带绿色荧光蛋白(Enhanced green fluorescent protein,EGFP)标签和hNK4基因的重组腺病毒Ad5-hNK4-EGFP,并检测其对乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖的影响。方法以pcDNA3/hNK4质粒为模板,采用高保真DNA聚合酶扩增hNK4基因,克隆至腺病毒穿梭载体pAdTrack-CMV中,构建重组穿梭质粒pAdTrack-hNK4,穿梭质粒经PmeⅠ酶切线性化,与腺病毒骨架质粒pAdEasy-1在大肠杆菌BJ5183中进行同源重组,获得重组腺病毒质粒pAd5-hNK4-EGFP,经PacⅠ酶切线性化后转染AD-293细胞进行包装,获得重组腺病毒Ad5-hNK4-EGFP,经4轮扩增后,测定病毒滴度;将重组腺病毒感染AD-293细胞,采用RT-PCR及Western blot法检测感染细胞中NK4基因的转录及蛋白的表达;MTT法检测Ad5-hNK4-EGFP对肝细胞生长因子(Hepatocyte growth factor,HGF)诱导的MDA-MB-231细胞增殖的影响。结果重组腺病毒质粒pAd5-hNK4-EGFP经PacⅠ酶切鉴定证明构建正确;经包装及4轮扩增后,重组腺病毒Ad5-hNK4-EGFP的滴度可达1.5×1011PFU/ml;经RT-PCR及Western blot鉴定表明,重组腺病毒携带的NK4基因能够在AD-293细胞中表达;HGF可促进MDA-MB-231细胞增殖,而Ad5-hNK4-EGFP可拮抗HGF诱导的MDA-MB-231细胞增殖。结论成功构建了表达hNK4基因的重组腺病毒Ad5-hNK4-EGFP,其可拮抗HGF诱导的MDA-MB-231细胞的增殖,为进一步深入研究HGF和NK4的功能、相互作用及作用机制奠定了基础,也为乳腺癌的靶向基因治疗提供了一个新的靶点。; 匡文斌成凤秦晓林范晓卿王秦董晋豫梁勤东涂植光; 关键词：腺病毒肝细胞生长因子 NK4

冠心病患者血清差异蛋白质分析: 第一部分，稳定性心绞痛患者血清差异蛋白质分析　　目的：探寻稳定性心绞痛患者血清中的差异性表达蛋白质。　　方法：收集年龄与性别匹配的50例确诊的稳定性心绞痛患者与50例体检证实为健康人群的血清，去除IgG和清蛋白后利用双向...; 范晓卿; 关键词：冠心病差异蛋白质稳定性心绞痛肽指纹图谱; 文献传递

触珠蛋白在急性心肌梗死患者血清中的表达被引量：1: 2012年; 目的探讨触珠蛋白(Haptoglobin,Hp)在急性心肌梗死(Acute myocardial infarction,AMI)患者血清中的表达情况,为该疾病的诊断与治疗提供新思路。方法收集30例确诊的AMI患者和30例体检证实为健康人群组的血清,去除血清高丰度蛋白后,采用双向电泳(2-DE)分离血清蛋白,获得的电泳图谱经ImageMaster5.00软件分析,差异明显的蛋白点经胶内酶解后,行基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(Matrix-assisted laser desorption-ionization-time of flight-mass spectrometry,MALDI-TOF-MS)分析,检测Hp的表达。结果 AMI患者与健康人群组血清的电泳图谱相似;MALDI-TOF-MS分析显示,AMI患者血清中Hp表达量明显高于健康人群组(P<0.05)。结论 Hp在AMI患者血清中表达量升高,其有望成为AMI患者的特异性诊断标记物。; 范晓卿周义文秦晓林何咏婷刘银河王毅涂植光; 关键词：心肌梗死双向电泳基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱

稳定性心绞痛患者血清差异蛋白质的初步分析: 2012年; 目的初步分析稳定性心绞痛(SAP)患者血清中差异蛋白质的表达。方法收集年龄与性别相匹配的50例SAP初诊患者与50例体检健康者的血清,分别混合血清后去除IgG和清蛋白,进行PAGE并观察去除效率;进行固相pH梯度SDS-PAGE二维凝胶电泳,对凝胶进行银染后用Image Master 5.00软件分析;对差异点用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)技术进行测定。结果去除IgG和清蛋白前后的SDS-PAGE电泳图效果良好,IgG和清蛋白去除率均>80%;分析获得的2个差异点经质谱分析,间-α-胰蛋白酶抑制剂家族重链相关蛋白(inter-α-trypsin inhibitor family heavy-chainrelated protein,IHRP)、锌指蛋白A20(zinc finger protein A20,A20)在SAP患者血清中表达而在健康人血清中无表达。结论IHRP和A20可能在SAP发病机制中起一定作用。; 范晓卿周义文秦晓林刘银河涂植光何咏婷; 关键词：稳定性心绞痛基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱差异蛋白质

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