耿朝晖
- 作品数：16 被引量：56H指数：6
- 供职机构：南开大学生命科学学院生物化学与分子生物学系更多>>
- 发文基金：天津市自然科学基金“九五”国家科技攻关计划更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 人生长激素基因在昆虫细胞中的表达及产物分析
- 1999年
- 俞新大耿朝晖张宝珠谌莉郜鹏郭宏杰岳鹏李建民
- 关键词：人生长激素基因昆虫细胞重组病毒放射免疫测定
- 真核细胞基因工程产物人生长激素的纯化研究
- 1997年
- 应用反相高效液相色谱法（ＲＰ－ＨＰＬＣ）对真核细胞基因表达产物人生长激素进行了纯化研究，发现在７１．６７％的乙晴浓度下人生长激素可有效地与其它杂蛋白分离，乙晴与人生长激素的短时间接触不影响其放射免疫活性．
- 于自然俞新大周卫东耿朝晖张宝珠李建民崔同昌
- 关键词：人生长激素纯化基因工程真核细胞
- 利用免疫荧光标记研究磷酸化组蛋白H3在乳腺癌细胞中的分布被引量：6
- 2002年
- 在时间上与细胞周期相关并且在功能上又与染色质凝集偶联的一类组蛋白翻译后修饰就是组蛋白H3磷酸化。运用一个针对H3 Ser10磷酸化的特异性抗体 ,通过SDS PAGE、免疫印迹和免疫荧光标记检测了磷酸化H3在MCF 7细胞周期中的分布。共聚焦显微结果显示 :H3磷酸化在早前期细胞核膜附近以斑点状起始 ,之后扩展到整个凝集的染色质上 ,然后在早中期达到最高水平。H3去磷酸化开始于有丝分裂后期 ,很快在末期完成 ,而此时末期细胞凝集的染色质并未完全解凝集。H3磷酸化与染色质初期凝集之间存在着精确的时间和空间上的相关性。另外 ,对H3磷酸化可能的作用进行了讨论。
- 杨琴陈家童耿朝晖俞新大黄熙泰
- 关键词：免疫荧光标记磷酸化组蛋白H3乳腺癌细胞染色质凝集细胞周期
- 用Bac-to-Bac杆状病毒系统表达人生长激素被引量：16
- 2002年
- 利用Bac to Bac杆状病毒载体表达系统将人生长激素 (humangrowthhormone ,hGH)基因cDNA克隆至转移载体pFastBac1中 ,得到pFastBac hGH ,再将其转化进入含穿梭载体Bacmid的受体菌DH10Bac中 ,发生转座作用 ,得到含hGH基因的重组穿梭载体rBacmid hGH .纯化DNA ,直接转染培养的昆虫细胞Sf9,得到重组病毒rAcV Bac hGH .经酶切PCR及Southern杂交鉴定 ,hGH基因正确地插入病毒基因组的多角体蛋白基因启动子下 ,SDS PAGE测得产物蛋白分子量为 2 2kD左右 .用免疫化学发光法测得转染上清中hGH表达水平可达 18μg ml ,与用传统的BEVS表达hGH相比 ,转染上清中hGH表达水平提高 4 0
- 耿朝晖郜鹏刘莹赵东明张宝珠俞新大李建民
- 关键词：BAC-TO-BAC系统昆虫细胞HGH杆状病毒生长激素
- 缩短hGH基因5’-UTR可提高在昆虫细胞中的表达水平
- 昆虫细胞-杆状病毒表达系统是近年发展起来的高效真核表达系统,其表达能力强,安全性好,操作方便,在基因工程生产真核基因蛋白的研究与应用方面都有着巨大的潜力,至今已有几百种蛋白在该系统中得到表达.但利用该系统表达外源基因时,...
- 耿朝晖刘莹郜鹏赵东明张宝珠俞新大
- 文献传递
- 小檗胺及其衍生物的结构对宫颈癌（HeLa）细胞生长增殖的影响被引量：6
- 1996年
- 本文研究了不同结构的新型钙调蛋白（ＣａＭ）拮抗剂—小檗胺（Ｂ０）及三种衍生物ＥＢＢ、Ｂ４、Ｂ２）对宫颈癌细胞的生长曲线、单细胞克隆、３Ｈ－ＴｄＲ掺入、线粒体脱氢酶活性的影响．并测定了小檗胺类化合物作用ＨｅＬａ细胞后，细胞内ＣａＭ水平的变化．结果发现，四种小檗胺类化合物对ＨｅＬａ细胞的生长和增殖有明显的抑制作用；其抑制增殖的ＩＣ（５０）值分别为Ｂ０１２．５μｍｏｌ／Ｌ、Ｂ２２．１μｍｏｌ／Ｌ、Ｂ４２．６μｍｏｌ／Ｌ、ＥＢＢ１．６μｍｏｌ／Ｌ；其中ＥＢＢ的效果最强，另外还发现小檗胺类化合物作用ＨｅＬａ细胞后，细胞内ＣａＭ水平比对照组细胞内ＣａＭ水平有明显降低，且衍生物下降的程度高于小檗胺．
- 张金红耿朝晖段江燕陈家童梁学俞耀庭
- 关键词：小檗胺衍生物HELA细胞增殖宫颈癌细胞生长
- 钙调蛋白拮抗剂——小檗胺及其衍生物对正常牛胚肾细胞毒性的影响被引量：6
- 1997年
- 本文研究了4种小檗胺类化合物对正常牛胚肾细胞(MDBK)生长增殖和细胞内钙调蛋白(CaM)水平的影响。结果发现,小檗胺及其衍生物对MDBK细胞的增殖都有抑制作用,但小檗胺的影响大于衍生物,而衍生物中,结构略复杂的EBB对MDBK细胞影响最小。实验结果还发现四种化合物均能不同程度地降低MDBK细胞内CaM的水平。
- 张金红耿朝晖段江燕陈家童贺宏黄建英
- 关键词：小檗胺免疫制剂肾细胞细胞毒性
- 人生长激素基因在昆虫细胞中表达的初步研究被引量：4
- 1998年
- 将人生长激素hGH的cDNA片段克隆在转移载体pVL1393的多角体蛋白基因启动子下游，构成重组转移载体pVL1393hGH，将该质粒DNA与昆虫杆状病毒（AcNPV）DNA共转染秋粘虫（Spodopterafrugiperda）细胞Sf9，通过体内同源重组，hGH基因取代多角体蛋白基因，从而整合到病毒基因组上，经感染昆虫细胞后表达外源hGH基因，通过反复病毒空斑纯化，获不含多角体的重组病毒，利用免疫化学发光法测定hGH表达量达40μg／mL．
- 俞新大耿朝晖周卫东张宝珠张爱虹李建民沈孝宙王瑛
- 关键词：ACNPV昆虫细胞
- 人生长激素基因在昆虫细胞中的表达
- 1998年
- 近年发展起来的昆虫细胞－杆状病毒基因工程系统具有良好的优越性：（1）表达产量高，（2）产物的免疫原性、功能性类似于天然产物，（3）适用于悬及无血清培养。本实验中，将外源基因hGH克隆至质粒pVL1393，形成转移载体pVL1393／hGH（Fig.1&2)。与昆虫核多体病毒AcNPV基因组DNA转染秋粘虫细胞Sf9（Fig.3)，pV1393／hGH与AcNPV基因组DNA发生同源重组，取代多角体蛋白基因。经空斑分析纯化得到不含多角体，单一表达的重组病毒rAcVhGH(Fig.4)，感染滴度达到2．03×10^8PUF/mL。经反复实验，10^5细胞／mL感染6－7天后收获培养上清液，可得到表达量为40μg/mL的hGH蛋白（Fig.5,6&7)。
- 耿朝晖余慕贞等
- 关键词：人生长激素基因昆虫细胞基因表达
- MTT比色分析法在贴壁生长细胞药物敏感性测定中的应用被引量：16
- 1996年
- 用ＭＴＴ法（噻唑蓝比色分析法）测定了几种小檗胺类化合物对三种贴壁生长细胞（ＨｅＬａ、Ｂｏｗｅｓ、ＭＤＢＫ）生长增殖的影响．结果显示：ＭＴＴ分析法比传统的活细胞计数法、单细胞克隆法及３Ｈ－ＴｄＲ掺入法测定样品多、省时、省试剂、精确度高、重复性好及没有同位素污染等优点，是肿瘤药物研究中较理想的检测方法．
- 张金红耿朝晖段江燕陈家童黄建英
- 关键词：小檗胺抗肿瘤药物
