【目的】建立适合于茭白线粒体蛋白质组分析的双向电泳技术体系,为进一步开展茭白线粒体差异蛋白质组学研究提供参考。【方法】以茭白为试验材料,比较不同线粒体提取纯化方法、IPG胶条p H范围及蛋白上样量等条件对双向电泳图谱的影响。【结果】差速离心（3000~14000×g）联合Percoll不连续密度梯度离心（20%∶24%∶40%=2∶4∶2）对茭白线粒体的提取纯化效果优于仅采用差速离心。采用改良酚抽法提取茭白线粒体蛋白,17 cm、p H 3~10的IPG胶条,1.0 mg上样量,12%SDS-PAGE进行双向电泳,0.12%考马斯亮蓝G-250胶体考染法染色,茭白线粒体蛋白主要分布在p H 4~8范围内,p H 3~4和p H 8~10范围内蛋白点较少;进一步选用p H 4~7和p H 5~8的IPG胶条对茭白线粒体蛋白进行双向电泳,分离效果均明显提高,且p H 4~7范围内IPG胶条的双向电泳图谱清晰,蛋白点分辨率较高。分别采用0.8、1.0和1.2 mg 3个不同的上样量进行双向电泳,结果表明上样量为1.0 mg时,电泳图谱质量最好。【结论】通过差速离心联合Percoll不连续密度梯度离心提取纯化茭白线粒体,并控制好双向电泳体系的p H范围、上样量等因素,可获得蛋白质点清晰、分辨率高、重复性好的双向电泳图谱。
该文在超声波处理虾干的基础上,采用L9(34)试验对虾处理条件进行优化,以探讨超声波与嫩化剂对虾干嫩化效果的影响。结果表明:在超声波单因子试验中,超声波能显著改善虾干的组织结构,但同时降低氨基酸含量;加深虾干的色泽;L9(34)正交试验结果表明,超声波结合嫩化剂处理虾干,不但能显著改善虾干的嫩度,而且较好地保持了虾干的营养成分,各因素对虾干剪切力的影响主次顺序为超声波>木瓜蛋白酶>氯化钙>复合磷酸盐;最佳组合为300W超声波7 m in、0.2%C aC l2、0.008%木瓜蛋白酶、不添加复合磷酸盐,可达到较好的嫩化效果。此时虾干的剪切力为136 kg/cm2,游离氨基酸含量为19.3 m g/g。方差分析表明,超声波结合木瓜蛋白酶对虾干嫩化效果显著,而C aC l2和复合磷酸盐嫩化效果不显著。
