目的:原代培养及鉴定大鼠肾小球系膜细胞(GMC),探索分离、培养GMC的最佳条件。方法:对大鼠双肾灌洗后,筛网滤过分离肾小球,并用Ⅳ型胶原酶消化处理,然后种植法体外培养大鼠肾小球。同时采用免疫细胞化学和免疫荧光技术,检测亚代GMC的α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、波形蛋白(V im entin)、细胞角蛋白(Cytokeratin)、Ⅷ因子相关抗原抗体的表达,鉴定GMC,并绘制其生长曲线。结果:种植4 d后,约80%肾小球贴壁,可见卵圆形上皮细胞生长,18 d左右镜下细胞多呈星状或三角形并伴有不规则的突起,21 d后细胞生长密集,细胞团簇之间形成网络。免疫细胞化学和免疫荧光证实抗α-SMA及抗V im entin染色阳性,而抗Cytokera-tin、抗Ⅷ因子抗体染色为阴性。GMC亚代倍增时间为4 d。结论:结果表明,用改良的培养方法成功率高,培养的细胞为大鼠肾小球系膜细胞。
