石薇琳
- 作品数：14 被引量：34H指数：3
- 供职机构：中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室更多>>
- 发文基金：黑龙江省自然科学基金国家科技支撑计划“十一五”国家科技支撑计划更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>
- 低分子牛骨多肽制备及对大鼠成骨细胞的影响被引量：2
- 2007年
- 目的从牛骨制备低分子多肽，并观察其对体外培养新生大鼠的戍骨细胞增殖、碱性磷酸酶（ALP）活性和Ⅰ型胶原mRNA表达的影响。方法采用冷冻离心、等电点沉淀方法去除骨胶原，超滤法得到相对分子质量（Mr）10000以下的牛骨多肽，经Sephadex G-10脱盐，浓缩后用Trieine—SDS-PAGE电泳对Mr进行检测。采用四甲基偶氮唑盐（MTT）比色法测定牛骨多肽对戍骨细胞增殖的影响，ALP检测试剂盒测定细胞的ALP活性，RT—PCR法检测细胞中Ⅰ型胶原mRNA表达。结果建立了牛骨多肽的制备方法。低浓度牛骨多肽组与实验对照组相比对成骨细胞的增殖不显著（P〉0．05），高浓度具有显著的增殖作用（P〈0．05），并呈现出剂量依赖性；中、高浓度（50～400μg／mL）牛骨多肽组可提高戍骨细胞ALP的活性（P〈0.05），低浓度组（10μg／mL）提高ALP的活性不显著（P〉0．05）；牛骨多肽能提高Ⅰ型胶原mRNA表达。结论牛骨多肽的制备工艺简单，适合规模化生产；牛骨多肽能促进戍骨细胞增殖、ALP活性和Ⅰ型胶原mRNA的表达。
- 刘正伟高学军吕丹娜王聪颖石薇琳
- 关键词：碱性磷酸酶活性
- H5亚型禽流感病毒样颗粒的构建及生物学活性鉴定被引量：2
- 2012年
- 为构建H5亚型禽流感病毒(AIV)病毒样颗粒(VLPs),并鉴定其生物学活性,本研究通过杆状病毒/昆虫细胞表达系统,分别单独表达H5亚型AIV血凝素(HA)及共表达HA和基质蛋白(M1),并采用免疫组织化学法、SDS-PAGE、western blot和血凝试验等对重组蛋白进行鉴定。实验结果表明:透射电子显微镜观察结果显示,共表达HA和M1的重组蛋白可以形成VLPs,而单独表达HA未观察到VLPs;表达的重组蛋白HA和HA-M1均能够凝集鸡红细胞,血凝效价分别为1∶27和1∶28。结果显示该方法获得的AIV结构蛋白具有良好的生物学活性和抗原活性,从而为禽流感VLPs疫苗的研究提供依据。
- 张超林刘春国王寿山石薇琳李建辉王伟王伟刘彦云
- 关键词：流感病毒血凝素基因杆状病毒表达系统
- H9N2亚型禽流感病毒HA和NA基因的序列分析被引量：2
- 2012年
- 禽流感病毒（avian influenza virus,AIV）是正黏病毒科流感病毒属A型流感病毒。禽流感又称真性鸡瘟或欧洲鸡瘟,被国际兽医局（OIE）列为A类传染病。H9N2亚型AIV为低致病性禽流感病毒,虽然毒力较H5N1亚型AIV弱,
- 王寿山张超林刘春国石薇琳刘彦云王伟王伟
- 关键词：H9N2亚型禽流感病毒NA基因低致病性禽流感病毒A型流感病毒H5N1亚型
- H6N8亚型鸭流感病毒HA和NA基因的序列分析
- 分离到一株H6N8亚型鸭源禽流感病毒,HA蛋白裂解位点附近氨基酸残基为(-PQIETR↓GLF-),分子水平上表明这是一株低致病性禽流感病毒。序列分析表明流感病毒分离株HA基因核酸和氨基酸序列均与2005年分离于广西的H...
- 刘春国刘明李建辉石薇琳张超林王寿山
- 关键词：禽流感病毒HA和NA基因
- 文献传递
- 犬细小病毒LM株的序列分析及VP2基因的真核表达
- 犬细小病毒/(Canine parvovirus,CPV/)属于细小病毒科,细小病毒属。可引起犬出血性腹泻和心肌炎,使白细胞大量减少,在幼犬中的发病率和死亡率都很高。是危害养犬业最为严重的传染病之一。
本研究...
- 石薇琳
- 关键词：犬细小病毒
- 文献传递
- H1亚型猪流感病毒HA基因DNA疫苗的构建及其对Balb/c小鼠的免疫效果评价被引量：9
- 2009年
- 以A/Swine/Guangdong/LM/2004(H1N1)猪流感病毒HA基因为模板,通过RT-PCR技术扩增出HA基因,并将其克隆到pCI-neo真核表达载体中,成功构建重组表达质粒pCI-HA,瞬时转染vero E6和293T细胞,通过免疫过氧化物酶单层细胞试验(Immunoperoxidase monolayer assay,IPMA)、间接免疫荧光试验(indirect immunofluorescence assay,iIFA)和蛋白免疫印迹(Westernblot,WB)实验证明,HA基因能够在哺乳动物细胞中有效表达并具有良好的生物学活性。将重组质粒三次免疫8w雌性Balb/c小鼠后,ELISA试验和中和试验结果表明该重组质粒能够诱导小鼠产生较高的抗体滴度,并具有良好的中和活性。因此为H1亚型猪流感DNA疫苗的研究奠定了理论基础。
- 刘春国刘明李洪涛杜金玲张新涛石薇琳
- 关键词：猪流感HA基因DNA疫苗
- H3N8亚型马流感病毒拯救体系的建立
- 2009年
- 利用反向遗传学操作技术,以马流感病毒(EIV)A/Equine/Fuyun/2008/(H3N8)为亲本株,采用RT-PCR技术对该毒株的8个基因片段分段进行扩增,通过与双向转录载体pHW2000连接,重组质粒转染293T和MDCK共培养细胞,成功拯救出全部基因均来自亲本株的EIVrH3N8,生物学试验结果表明,rH3N8在鸡胚半数感染量、组织培养半数感染量、稳定性试验等方面都与亲本株保持一致。以猪流感病毒(SIV)A/Swine/Henan/S4/01(H3N2)内部基因的重组阳性质粒替换rH3N8的相应基因,成功拯救出重组病毒rgH3N8。两拯救毒株经鸡胚一次传代的血凝效价分别为1∶32、1∶64,最高可达1∶1024、1∶2048;接种MDCK细胞54h后的血凝效价最高均可达1∶512。rH3N8亚型EIV的成功拯救及基因的成功替换,为流感病毒突破种间屏障分子机制的研究和流感基因工程疫苗株的筛选奠定了基础。
- 杜金玲刘明刘春国李洪涛张新涛石薇琳
- 关键词：马流感病毒反转录聚合酶链式反应病毒拯救
- H5亚型禽流感病毒样颗粒的构建及生物学活性鉴定
- 为研究禽流感病毒(AIV)结构蛋白在昆虫细胞中的表达及其生物活性,本研究通过杆状病毒/昆虫细胞表达系统,单独表达H5亚型AIV血凝素(HA)及共表达HA和基质蛋白(M1),并采用免疫组织化学法,SDS-PAGE,west...
- 张超林刘春国王寿山石薇琳李建辉王伟刘彦云刘明
- 关键词：流感病毒血凝素基因杆状病毒表达系统
- 文献传递
- H9N2亚型禽流感病毒细胞高产株的拯救被引量：1
- 2012年
- 为构建能够在MDCK细胞中高水平复制的H9N2亚型禽流感病毒(AIV)疫苗株,本研究在对病毒生长特性及HA基因遗传进化分析的基础上,筛选出一株细胞高度适应的国内流行株A/chicken/Shanghai/11/2011(H9N2)(SH11),并通过反向遗传操作技术拯救出全部基因均来自亲本株的AIV rSH11株。生物学试验结果表明rSH11在鸡胚半数感染量(EID50)、组织培养半数感染量(TCID50)、遗传稳定性等方面均与亲本株保持一致,rSH11经MDCK细胞连续传5代后血凝价稳定在1∶1 024,表明该病毒株具有细胞高度增殖的特性。采用rSH11株制备油乳剂灭活苗免疫4周龄SPF鸡,免疫一周即可以检测出HI抗体,免疫3周后HI抗体平均效价高于1∶700,表明其具有良好的免疫原性。rSH11疫苗对不同的H9N2病毒株能够产生良好的免疫保护作用,显著抑制免疫鸡排毒。H9N2亚型AIV细胞高产株的拯救为该亚型AIV细胞苗的研制奠定了基础。
- 刘彦云刘春国石薇琳王伟吕让刘明
- 关键词：禽流感H9N2亚型细胞苗
- 密码子优化的H5亚型流感病毒HA基因重组质粒在哺乳动物细胞中的高效表达及其免疫原性的研究被引量：1
- 2009年
- 为了提高流感病毒血凝素(HA)基因的表达量及其免疫原性,按照哺乳动物偏爱密码子将A/Goose/HLJ/QFY/04(H5N1)流感病毒的血凝素基因进行优化改造,然后插入到真核表达载体pCI-neo中,构建了真核表达质粒pCI-opti-HA.将此质粒和含野生HA基因的真核表达质粒pCI-wt-HA分别转染Vero或293T细胞,通过免疫过氧化物酶单层细胞试验(IPMA)和蛋白免疫印迹(WB)实验比较HA蛋白的表达量.将两种重组质粒免疫Balb/c小鼠,比较两者诱导的抗体产生水平.三次免疫后两周用强毒攻击,通过体温和体重变化评价两种重组质粒的免疫保护效果.IP-MA和WB实验结果表明:密码子优化后,HA蛋白在哺乳动物细胞中的表达水平显著提高.酶联免疫吸附实验(ELISA)结果表明:小鼠免疫后密码子优化的重组质粒诱导的特异性抗体效价较高.攻毒试验结果表明:两种重组质粒均能够提供较好的保护.
- 刘春国刘明孙恩成李洪涛杜金玲张新涛石薇琳谢金鑫刘大飞
- 关键词：H5亚型HA密码子优化DNA疫苗
