田静
- 作品数：6 被引量：33H指数：3
- 供职机构：中国科学院武汉病毒研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学农业科学更多>>
- 电转化法提高平连载体DNA转化效率的研究被引量：7
- 1999年
- 探讨了电转化过程中一些影响平连载体ＤＮＡ转化效率的因素，并与化学法进行了比较，由此建立了优化的电转化条件。结果显示，在ＯＤ６００值０．７２－０．７８收获细胞时，可使平连载体ＤＮＡ的转化效率达到５×１０６转化子／μｇｃＤ－ＮＡ，较化学法高１０２－１０３倍。同时，降低连接产物的盐浓度。
- 方勤田静
- 关键词：电转化法感受态细胞
- 草鱼出血病病毒基因组的cDNA合成、克隆及部分序列分析被引量：18
- 1999年
- 采用差速离心的方法纯化感染草鱼出血病病毒的细胞悬液。提纯的病毒粒子经蛋白酶Ｋ处理和酚氯仿抽提，在１％琼脂糖凝胶电泳条件下分离得到１１条ｄｓＲＮＡ，利用柱离心式胶回收试剂盒纯化各基因片段。纯化的ｄｓＲＮＡ溶于９０％的ＤＭＳＯ中，７０℃变性１５ｍｉｎ，然后采用随机引物法反转录合成各基因片段的ｃＤＮＡ，并平头连接于ｐＺＥｒＯ２．０载体的ＥｃｏＲＶ位点，电转化ＴＯＰ１０感受态细胞。重组质粒经酶切、ＰＣＲ扩增得到大小不等的插入片段，ｃＤＮＡＲＮＡ斑点杂交的结果进一步证实其插入为目的基因片段。采用循环ＰＣＲ测序的方法，对其插入片段进行了序列测定，对其中第１１片段的部分序列作了报道。
- 田静邹桂平方勤
- 关键词：草鱼出血病病毒CDNA克隆
- 草鱼出血病病毒(GCHV)基因组片段的序列分析及推导的氨基酸序列
- 该文通过细胞培养的方法制备草鱼出血病病毒细胞培养悬液,采用两轮差速离心法分离纯化病毒粒子.纯化的病毒粒子经酚/氯仿油提得到病毒基因组DSRNA,提取的病毒基因组通过琼脂糖凝胶电泳及柱离心式胶回收试剂盒分离纯化了病毒基因组...
- 田静
- 关键词：草鱼出血病病毒CDNA合成克隆氨基酸序列
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- 双链DNA模板循环测序的研究被引量：2
- 1999年
- 采用末端标记引物法进行双链DNA循环测序是实验室快速、准确获得双链DNA模板序列的有效方法。实验结果表明：该测序法不仅能消除由于模板不纯所导致的引物的非特异性结合等因素而产生的非特异条带，而且能降低PCR产物测序的背景问题。
- 方勤田静
- 一种快速、简便、高效cDNA合成及克隆策略被引量：2
- 2000年
- 以鱼呼肠孤病毒双链RNA为模板 ,建立一种快速、简便、高效的cDNA合成及克隆策略。在一定量模板条件下 ,采用随机六聚体为引物合成cDNA第一链。以退火方式形成双链cDNA ,直接通过琼脂糖凝胶电泳检测其cDNA合成产量。双链cDNA经两端补齐后 ,平头连接于具有阳性选择标记的载体中 ,以高效电转化的方式进行快速克隆。
- 田静方勤
- 关键词：双链RNACDNA合成CDNA文库基因克隆
- 草鱼呼肠孤病毒(GCRV)部分基因片段cDNA文库的构建被引量：9
- 2000年
- 在随机六聚体引物浓度不变条件下 ,分别采用 0 .5、2、5μg草鱼呼肠孤病毒 (GCRV)单一片段RNA进行反转录cDNA合成及文库构建。结果表明 ,在GCRV RNA模板浓度大于 2 μg时 ,第二链cDNA合成产物可直接通过EB染色的琼脂糖凝胶电泳进行定量及鉴定。选择cDNA与载体连接比率为 5∶1,在高效电转化条件下 ,可获得 10 6 转化子 /μgcDNA的转化效率。阳性克隆子经酶切及PCR鉴定 ,约 4 5%以上的插入片段大于 50 0bp。
- 方勤田静
- 关键词：草鱼呼肠孤病毒双链RNACDNA文库
